Relatório - Cinética Enzimática

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PRÁTICA – BIOQUÍMICA – CINÉTICA ENZIMÁTICA
Enzimas são proteínas com atividade catalítica, ou seja, aceleram a velocidade de reações químicas, pois diminuem a energia de ativação. Praticamente todas as reações do metabolismo celular são catalisadas por enzimas, e elas possuem especificidade ao substrato, não são consumidas ao fim da reação e não alteram a constante de equilíbrio. Alguns fatores (pH, temperatura, velocidade, pressão) podem alterar a atividade enzimática, visto que são proteínas, e estas quando têm sua estrutura modificada, podem ter suas funções interrompidas. 
Neste experimento, utilizou-se o para-nitrofenil fosfato como substrato, e a enzima fosfatase (obtida através da batata inglesa), irá catalisar a reação de desfosforilação para formar o composto para-nitrofenol. Utilizou-se para encerrar a reação o hidróxido de sódio (NaOH). Discutiram-se os resultados dos experimentos, os quais foram feitos, separadamente, levando em consideração as seguintes influências na atividade enzimática:
1. Tempo de reação
2. Concentração da enzima
3. Concentração de substrato
RESULTADOS:
As quantidades de substrato, água e enzima nos tubos foi a mesma. A partir disto, começou-se a cronometrar, e o experimento teve fim aos 30 minutos. A partir da alteração do pH com a adição de NaOH, em diferentes intervalos de tempo, nos tubos, as reações foram encerradas. Os tubos mostraram uma escala de coloração amarelada crescente, mostrando as maiores formações de produto de acordo com o maior tempo de ação da enzima, o que mostra o tempo como um fator limitante da reação, mas em certo ponto a reação ficaria estagnada, pois não haveria mais substrato para ser convertido em produto, a não ser que fosse adicionado mais substrato. 
Adicionou-se substrato (3,0ml) e água aos tubos, e então, adicionou-se o homogeneizado complementar à água em cada tubo para que se obtivesse um volume final de 4ml (tubo 7: 1,0ml de água e 0ml de enzima; tubo 8: 0,9ml de água e 0,1ml de enzima; tubo 9: 0,5ml de água e 0,5ml de enzima; tubo 10: 0ml de água e 1,0 ml de enzima). Após 5 minutos de reação, adicionou-se 2ml NaOH em cada tubo, e observou-se a diferença de tonalidades em cada um deles. O primeiro tubo não mostrou coloração alguma, pois não havia enzima para catalisar a reação, mas nos outros havia a escala crescente de tonalidades amareladas. O fator limitante, neste caso, é o tempo, pois com mais tempo as enzimas iriam converter mais substrato em produto, até mesmo nos tubos com menor concentração de enzima, já que não são consumidas durante o processo.
Adicionou-se água e substrato nos tubos, em quantidades complementares para formar 5ml, e a seguir adicionou-se 0,5ml de homogeneizado em cada tubo. Após 10 minutos de reação, adicionou-se 2ml de NaOH nos tubos e a reação foi interrompida. Observou-se que o fator limitante foi a concentração de enzimas, uma vez que esta foi saturada nos tubos que possuíam uma maior quantidade de substrato. Se fossem adicionadas mais enzimas, mais produto seria formado,