Aula 2_Microscopia

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AULA DE MICROBIOLOGIA
MICROSCOPIA
PROFESSORA:
CARLA SCHMIDT
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Objeto de cristal da rocha conhecido como lente de 
Lanyard, datado de 721 a.C., pode ter sido a 
primeira lente criada pelo homem.
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Holandês Zacharias Jansen, por volta do ano 1595.
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Modelo de microscópio
italiano, possivelmente utilizado
por volta do ano 1600. Os
modelos italianos eram simples e
pequenos.
A magnificação dos objetos
obtida, em torno de nove vezes,
não permitia observar coisas
realmente novas.
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Microscópio de uma
lente datado de 1700.
Esse tipo de
instrumento foi
popularizado por
Leeuwenhoek (1632 –
1723) no final do século
XVII - Holanda.
Aumento de 200 vezes.
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Microscópio de Hooke (1632-1713),
Inglaterra. Microscópio de duas lentes.
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Microscópio de Marshall - 1715
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Microscópio de Culpeper - 1725
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Microscópio de Cuff - 1744
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Modelo de microscópio italiano de 1700
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Microscópio solar de projeção, modelo
italiano de 1760.
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
Microscópio com espelhos e conjunto de
acessórios. Modelo construído pelo italiano Giovan
Battista em 1813.
A HISTÓRIA DO MICROSCÓPIO
No século XIX, os fabricantes de microscópios
desenvolveram novas técnicas para fabricação de
lentes. Passaram, também, a utilizar espelhos curvos
para melhorar a capacidade de foco desses
instrumentos. Em 1840, os Estados Unidos passaram a
fabricar microscópios, uma atividade até então restrita
basicamente à Inglaterra.
Por volta de 1880, os chamados
microscópios ópticos atingiram a resolução de
0,2 micrômetros, limite que permanece até os
dias de hoje.
O nome microscópio vem de:
“mikrós” = pequeno, e
“skoppéoo” = observar, ver através de.
O MICROSCÓPIO
O olho humano é incapaz de perceber um
objeto com um diâmetro menor que 0.1 mm, a
uma distância de 25 cm.
Os microrganismos tem dimensões de µm
(1µm = 10-3mm = 10-6m)
O MICROSCÓPIO
O MICROSCÓPIO
Quilômetro (Km) 1Km = 1000m = 103m 
Metro (m) 
Decímetro (dm) 1dm = 0,1m = 10-1m 
Centímetro (cm) 1cm = 0,01m = 10-2m 
Milímetro (mm) 1mm = 0,001m = 10-3m 
Micrômetro (μm) 1μm = 10-6m 
Nanômetro (nm) 1nm = 10-9m 
Angstron (Ao) 1Ao = 10-4µm = 0,1nm = 10
-10
m 
 
O MICROSCÓPIO
1dm
Os microscópicos são classificados dependendo
do princípio no qual a ampliação é baseada:
� ópticos (empregam dois sistemas de lentes,
ocular e objetiva, através das quais a imagem
ampliada é obtida) e
� eletrônicos (empregam um feixe de elétrons
para produzir a imagem ampliada)
O MICROSCÓPIO
O MICROSCÓPIO
Microrganismo Tamanho
Staphylococcus sp (bactéria) 1,5 µm
Rickettsia sp (bactéria) 0,3 µm
Mycoplasma sp (bactéria) 0,3 µm
Clostridium sp (bactéria) 3 a 10 µm
Bacillus sp (bactéria) 3 a 9 µm
Cryptococcus sp (fungo) 2 a 15 µm
Candida sp (fungo) 4 µm
Aspergillus sp (fungo) 3 a 15 µm
Família Picornaviridae (vírus) 0,028 µm
Família Retroviridae (vírus) 0,1 µm
Família Herpesviridae (vírus) 0,2 µm
Família Poxviridae (vírus) 0,23 a 0,4 µm
Família Rhabdoviridae (vírus) 0,18 µm
Exemplos de TAMANHO:
A microscopia óptica é a mais comumente
utilizada no laboratório de microbiologia.
Em geral, o microscópico óptico amplia o
objeto até certo limite (1.000 a 2.000 vezes). Esta
limitação é devida ao poder de resolução.
O MICROSCÓPIO ÓPTICO
É a capacidade de um aparelho aumentar n
vezes uma imagem.
Na microscopia é dado pelo produto entre a
ampliação das oculares e a ampliação das
objetivas.
O PODER DE AMPLIAÇÃO
Poder de Resolução (P.R.) - capacidade
de um aparelho fornecer imagens distintas de dois
pontos distintos.
A capacidade de aumento só possui valor
prático se for acompanhada de um aumento
paralelo do poder resolutivo.
O PODER DE RESOLUÇÃO
O PODER DE RESOLUÇÃO
λ é o comprimento de onda.
O PODER DE RESOLUÇÃO
O LIMITE DE RESOLUÇÃO
O limite de resolução corresponde à
menor distância entre dois pontos em que
eles ainda podem ser distinguidos
separadamente.
O PODER DE RESOLUÇÃO
O poder de resolução é inversamente
proporcional ao limite de resolução.
Normalmente a ampliação tem limites, se
usar ampliações muito grandes as imagens
começam a perder qualidade.
O olho humano é incapaz de perceber um
objeto com um diâmetro menor que 0,1 mm, a
uma distância de 25 cm.
A RESOLUÇÃO
A RESOLUÇÃO
O que determina pois a riqueza dos detalhes
da imagem fornecida por um sistema de imagens é
o seu poder de resolução e não o seu poder de
ampliar o tamanho dos objetos.
A capacidade de aumentar só tem valor
prático se for acompanhado de um aumento
do poder de resolução.
A RESOLUÇÃO
O limite de resolução depende
essencialmente da objetiva, já que as oculares
não podem acrescentar detalhes à imagem, pois a
sua função é aumentar de tamanho essa imagem,
que é projetada no seu plano de focagem pela
objetiva.
Uma das características mais importantes de
uma objetiva é a sua abertura numérica, pois o
limite resolutivo depende principalmente desta e
do comprimento de luz utilizada.
A abertura numérica vem gravada nas
objetivas e sua determinação cabe ao fabricante
das lentes.
ABERTURA NUMÉRICA
Pode-se usar um meio (p.ex. óleo de cedro) com
o mesmo índice de refração do vidro da lâmina, para
que os raios de luz deixem a lâmina sem refração,
seguindo uma direção reta para dentro da objetiva,
aumentando assim o poder de resolução (P.R.).
O INDICE DE REFRAÇÃO
O MICROSCÓPIO ÓPTICO
O MICROSCÓPIO ÓPTICO
Principais características das objetivas do
microscópio óptico :
Ampliação linear da 
objetiva
Distância 
focal 
aproxima
da (mm)
Diâmetr
o aprox. 
do 
campo 
(mm)
Abertura 
Númeric
a
Dist. de 
trabalh
o 
aprox.
(mm)
Poder de 
resoluçã
o (µm)
Máxima 
ampliação 
aprox. 
(ocular 
10x)
10x
(objetiva à seco de 
pequeno aumento)
16 1.5 0.25 4.50 2.0 100 vezes
40-45x
(objetiva à seco de 
grande aumento)
4 0.34 0.65 0.65 0.7 450 vezes
90-100x
(objetiva de imersão) 1.8 0.15 1.25 0.13 0.4 1000 vezes
O MICROSCÓPIO ÓPTICO
A objetiva produz uma imagem real ampliada do
objeto, a qual é ainda aumentada em escala muito
maior pela ocular, sendo a mesma captada pelo olho
humano.
O MICROSCÓPIO ÓPTICO
O MICROSCÓPIO ÓPTICO
O Microscópico eletrônico foi inventado por
Ernst August Friedrich Ruska, em 1932 ele possui
grande vantagem diante do óptico, apresenta um
poder de resolução 100 vezes maior, em virtude do
comprimento de onda muito curto dos raios
eletrônicos utilizados.
É possível resolução de objetos tão pequenos
quanto 10 Ao (1Ao = 10-4 µm = 0,1 nm = 10-10 m).
Produz aumentos úteis de 5.000 a 500.000 vezes.
O MICROSCÓPIO ELETRÔNICO
O MICROSCÓPIO ELETRÔNICO
Microscópio 
eletrônico de 
varredura.
Os microscópios eletrônicos permitem um fator de 
aumento da ordem de centenas de milhares de vezes. 
TIPOS DE MICROSCOPIA
Tipos de 
Microscopia
Aumento 
máx. útil
Aspecto do 
Espécime Aplicações
Microscopia 
Óptica Campo 
Luminoso
1000 -
2000
coradas ou não,
quando coradas
geralmente
assumem a cor
do corante
determinação dos
elementos grosseiros de
bactérias, leveduras,
bolores, algas e
protozoários
TIPOS DE MICROSCOPIA
Tipos de 
Microscopia
Aumento 
máx. útil
Aspecto do 
Espécime Aplicações
MicroscopiaÓptica Campo 
Escuro
1000 -
2000
geralmente não
coradas,
aparecem
brilhante sobre
um fundo
escuro
microrganismos que
exibem algum dado
morfológico
característico em estado
vivo
Sacos polínicos 
contendo pólen
TIPOS DE MICROSCOPIA
Tipos de 
Microscopia
Aumento 
máx. útil
Aspecto do 
Espécime Aplicações
Microscopia 
Óptica 
Ultravioleta
1000 -
2000
não visualizado
diretamente;
fotografado
diferenciação de
componentes celulares
com base em maior ou
menor absorção da luz
UV.
TIPOS DE MICROSCOPIA
Tipos de 
Microscopia
Aumento 
máx. útil
Aspecto do 
Espécime Aplicações
Microscopia 
Óptica 
Fluorescente
1000 -
2000
brilhante e
corado, corante
fluorescente
técnicas diagnósticas
TIPOS DE MICROSCOPIA
Celulas vivas a esquerda e mortas e coloridas
com iodo a direita.
TIPOS DE MICROSCOPIA
Tipos de 
Microscopia
Aumento 
máx. útil
Aspecto do 
Espécime Aplicações
Microscopia 
Óptica 
Contraste de 
Fase
1000 -
2000
vários graus de
brilho
exames de estruturas
celulares em células
vivas de microrganismos
maiores (leveduras,
algas, protozoários, e
algumas bactérias)
(A, B, C, E y F, Barra=25 µm; D, Barra=50µm). 
TIPOS DE MICROSCOPIA
TIPOS DE MICROSCOPIA
Tipos de 
Microscopia
Aumento 
máx. útil
Aspecto do 
Espécime Aplicações
Microsc. 
Eletrônica
200.000 -
400.000
visto em tela 
fluorescente
exames de vírus e da 
ultra estrutura das 
células microbianas
O MICROSCÓPIO
CUIDADOS COM O MICROSCÓPIO
Os principais inimigos do microscópio são:
� Poeira
� Graxa
� Óleo de imersão
� Golpes
CUIDADOS COM O MICROSCÓPIO
� Nunca tocar as lentes, limpar apenas com papel
absorvente fino;
� Nunca deixar a lâmina no microscópio após sua
observação;
� Sempre que utilizar óleo de imersão, limpar a
lente e não inclinar o microscópio para que o óleo
não caia no sistema mecânico da platina onde é
difícil sua limpeza;
CUIDADOS COM O MICROSCÓPIO
� Não utilizar excesso de xilol ou álcool-éter para
não descolar as lentes;
� Manter a platina sempre seca;
� Nunca force o microscópio;
� As lentes nunca devem tocas a lâmina;
CUIDADOS COM O MICROSCÓPIO
� Para subir a lâmina e observar ao mesmo tempo,
utilize o botão micrométrico;
� Nunca desmontar o microscópio;
� Após o uso, deixar a objetiva de menor aumento
no eixo ótico, cobrir o microscópio e guardá-lo em
local apropriado.