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2a aula métodos de estudo e tipos de ovos

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Embriologia
Métodos de estudos em Embriologia
Prof. Plínio Pereira Gomes Júnior
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Ferramentas (técnicas e métodos)
Última metade do século XX
Biologia do Desenvolvimento = Embriologia
Expressão dos genes
Estudo estocástico dos genes
Produtos
Indução
Regulação
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Século XXI 
Edição de genes – Crispr-Cas9 (Técnica recente de engenharia genética)
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Eletroforese
Surgiu: anos 60
Proteínas enzimáticas
Proteínas não enzimáticas
Principio
Carga elétrica das moléculas (Anódo ou Catódo)
Maior carga = mais rápida
Meio-gel (agarose ou poliacrilamida)
Maior molécula = mais lenta
pH
Tamanho
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Resultado
Formação de bandas (comparada com padrão)
Coloração
Histoquímica
Nitrato de Prata
Isótopos Radioativos (aminoácido marcado)
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Variantes
SDS-eletroforese (Gel C/ sódio dodecil sulfato)
Beta-mercaptoetanol (reduz pontes dissulfídicas, dissociam polipeptídeos e afrouxa a estrutura secundária das proteínas
Vantagem – carga / massa = razão similar
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Eletroforese Bidimensional
Ponto isoelétrico (pI)= pH neutro
Eletroforese horizontal
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Filtragem molecular (RNA e DNA)
Carga / massa = para todos os ácidos nucléicos
Maior precisão nos suportes
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As tecnologias do DNA recombinante 
Surgiu – anos 70
Enzimas de restrição
Enzimas de síntese
Enzimas de ligação
Aplicação
Homologia (sondas)
Coloração: brometo de etídeo + Luz UV
Captura do DNA: membrana de nylon ou nitrocelulose
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Hibridação in situ
Como a expressão gênica está guiando o desenvolvimento
Detecta RNAm
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PCR – reação em cadeia da polimerase
Termociclador
Enzima de síntese
Primers
DNA
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Vetores de clonagem e de Expressão
Obter cópias
Plasmídeos
Vírus
bacteriófagos
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Transgenia
Testar in vivo
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 Edição de embriões: Crispr-Casp9 
Cas9 - enzima da bactéria Streptococcus pyogenes. 
Consiste em acoplar à Cas9 um fragmento de RNA que tem a sequência certa para se ligar a uma porção específica da molécula do DNA.
Objetivo: cortar pedaços de genes mutantes que provocam doenças e substituir por outros pedaços de DNA normal.

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