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* Embriologia Métodos de estudos em Embriologia Prof. Plínio Pereira Gomes Júnior * Ferramentas (técnicas e métodos) Última metade do século XX Biologia do Desenvolvimento = Embriologia Expressão dos genes Estudo estocástico dos genes Produtos Indução Regulação * Século XXI Edição de genes – Crispr-Cas9 (Técnica recente de engenharia genética) * Eletroforese Surgiu: anos 60 Proteínas enzimáticas Proteínas não enzimáticas Principio Carga elétrica das moléculas (Anódo ou Catódo) Maior carga = mais rápida Meio-gel (agarose ou poliacrilamida) Maior molécula = mais lenta pH Tamanho * * Resultado Formação de bandas (comparada com padrão) Coloração Histoquímica Nitrato de Prata Isótopos Radioativos (aminoácido marcado) * Variantes SDS-eletroforese (Gel C/ sódio dodecil sulfato) Beta-mercaptoetanol (reduz pontes dissulfídicas, dissociam polipeptídeos e afrouxa a estrutura secundária das proteínas Vantagem – carga / massa = razão similar * * Eletroforese Bidimensional Ponto isoelétrico (pI)= pH neutro Eletroforese horizontal * Filtragem molecular (RNA e DNA) Carga / massa = para todos os ácidos nucléicos Maior precisão nos suportes * * As tecnologias do DNA recombinante Surgiu – anos 70 Enzimas de restrição Enzimas de síntese Enzimas de ligação Aplicação Homologia (sondas) Coloração: brometo de etídeo + Luz UV Captura do DNA: membrana de nylon ou nitrocelulose * * Hibridação in situ Como a expressão gênica está guiando o desenvolvimento Detecta RNAm * PCR – reação em cadeia da polimerase Termociclador Enzima de síntese Primers DNA * * Vetores de clonagem e de Expressão Obter cópias Plasmídeos Vírus bacteriófagos * Transgenia Testar in vivo * Edição de embriões: Crispr-Casp9 Cas9 - enzima da bactéria Streptococcus pyogenes. Consiste em acoplar à Cas9 um fragmento de RNA que tem a sequência certa para se ligar a uma porção específica da molécula do DNA. Objetivo: cortar pedaços de genes mutantes que provocam doenças e substituir por outros pedaços de DNA normal.
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