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Sumário
1	INTRODUÇÃO	4
2	OBJETIVO	5
3	MATERIAIS	6
4	MÉTODOS	7
5	RESULTADO E DISCUSSÃO	9
6	CONCLUSÃO	13
7	REFERÊNCIAS	14
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INTRODUÇÃO
Iremos ressaltar no presente relatório sobre o crescimento dos microrganismos nos diferentes meios de cultura utilizados, onde os mesmos fornecem as primeiras informações para a sua identificação. Os microrganismos necessitam de nutrientes apropriados ao seu desenvolvimento, assim como condições físicas ou ambientais favoráveis. Por isso, tem-se a importância em conhecer o potencial de crescimento de cada meio de cultura. 
O estudo dos microrganismos depende da obtenção de uma grande quantidade de microrganismos idênticos, que são obtidos através do isolamento a partir de uma população mista. Para ajudar na identificação das bactérias veremos que são necessários os testes bioquímicos, pois as bactérias podem ser identificadas por características do seu metabolismo, como a capacidade de degradar determinados substratos e produzir gases. Estes testes utilizam meios de cultura e reagentes específicos para detectar metabólitos resultantes da atividade bacteriana.
OBJETIVO
Identificar através do exame de cultura se á presença de bactérias e posteriormente sua identificação juntamente com a triagem bioquímica.
MATERIAIS
3.1 Semeadura:
Amostra de urina;
Meio de cultura Mac Conkey;
Meio de cultura Cled;
Alça calibrada de 10 uL (0,01 mL);
Estufa;
3.2 Identificação de culturas:
 Placas Mac Conkey e Cled já semeadas e com crescimento bacteriano;
3.3 Identificação – Triagem bioquímica:
Placas Mac Conkey já semeadas e com crescimento bacteriano;
TSI;
MIO;
LIA;
Uréia;
Fenil;
Citrato;
Bico de bunsen;
Agulha bacteriológica.
3.4 Antibiograma:
Meio de cultura (Ágar Müeller Hinton é um meio de cultura recomendado) já semeado e com os discos de antibióticos: BAC (bacitracina), ASB (ampicilina e sulbactam), TET (tetraciclina) e CIP (ciprofloxacino).
MÉTODOS
Semeadura:
Foi semeado uma amostra de urina nos meios Mac Conkey e Cled com auxílio da alça calibrada 10uL; 
No meio de cultura Mac Conkey foi realizada semeadura quantitativa com alça calibrada (estrias por distensão), já no meio Cled foi realizado estrias de esgotamento para identificação das colônias isoladas.
Identificação de cultura de Klebsiela
Foram utilizadas meios de cultura Mac Conkey e Cled já semeados e com crescimento bacteriano, e posteriormente identificado as estrias, cor, aspecto.
Triagem bioquímica :
Para identificação da bactéria presente no meio Mac Conkey, foram utilizados 6 tubos contendo meios para realização da triagem bioquímica. Foi realizada a flambagem da agulha bacteriológica no bico de bunsen, em seguida pegou-se um pouco da colônia bacteriana presente no meio Mac Conkey e semeadas nos seguintes tubos:
Tubo 1: TSI, foi introduzida a agulha na base do meio de cultura e em seguida estriado o seu ápice. 
Tubo 2: MIO, foi introduzida a agulha até a metade da base;
Tubo 3: LIA, foi introduzida a agulha em ¾ da base do meio de cultura e em seguida estriado o seu ápice;
Tubo 4: Uréia, estriado o seu ápice;
Tubo 5: Fenil, estriado o seu ápice;
Tubo 6: Citrato, estriado o seu ápice.
Todos foram levados até a estufa a 37ºC de 18 a 24 horas.
Antibiograma
Através do meio de cultura (Ágar Müeller Hinton é um meio de cultura recomendado) já semeado e com os discos de antibióticos, foi possível fazer a leitura dos halos formados ao redor dos antibióticos com auxílio de uma regua para identificar a resistência e sensibilidade. Antibióticos: BAC (bacitracina), ASB (ampicilina e sulbactam), TET (tetraciclina) e CIP (ciprofloxacino)
RESULTADO E DISCUSSÃO 
Semeadura:
Ágar Mac Conkey é um meio de cultura destinado a inibir o crescimento da maioria das bactérias Gram positivo e seletivo para crescimento de bacilos Gram negativos. É um meio diferencial, ele indica a fermentação de lactose. Quando as bactérias fermentam a lactose tornam o meio rosa (LAC +) e as bactérias que não são fermentadoras de lactose tornam o meio marrom/incolor (LAC -).
As bactérias fermentadoras de lactose (Klebsiela, Enterobacter), utilizam a lactose disponível no meio e produzem ácidos como produto final. Este ácido diminui o pH do meio para valores inferiores a 6.8, resultando na observação de colónias rosa (LAC +).
As bactérias que não fermentam a lactose (Salmonella, Pseudomas e Shigella) não consegue utilizar a lactose, e utilizam a peptona. Isto forma amónia, que eleva o pH do ágar, levando à formação de colónias incolor/marrom (LAC-).
 Ágara Cled é um meio nutritivo (crescem bactérias gram negativas e gram positivas), a contagem é feita no Cled (UFC .105 ).
Identificação de cultura de Klebsiela
Através do meio Cled pode-se observar que ouve crescimento completo, >105.
No meio Mac Conkey foi possível observar estrias grandes, úmidas e brilhosas. Apresentou uma cor rosa/marrom, sendo identificada como LAC D (intermediário), sendo LAC + e LAC -.
Identificação – Triagem bioquímica :
Após o crescimento em estufa 37°C de 18 a 24 horas, foi realizada a identificação- triagem bioquímica.
Tubo 1 (TSI): Amarelo. Houve fermentação de glicose (base) e lactose (ápice); 
Não ouve presença de ferro (negativo). 
O Agar TSI possui em sua composição glicose, lactose e sacarose, os quais sofrendo fermentação são visualizados através da viragem (de vermelho para amarelo) do indicador de pH: o vermelho de fenol. Já o sulfato ferroso de amônio é usado na detecção da produção de sulfeto de hidrogênio, formando composto na cor preta.
Tubo 2 (MIO): 
Motilidade: Negativo;
Indol: negativo (amarelo); para essa análise, pingou 4 gotas de reativo de Kovacs).
Meio MIO é utilizado para a diferenciação de micro-organismos com base na motilidade, atividade de ornitina descarboxilase e produção de indol.
Motilidade: a bactéria móvel cresce além da linha de inoculação, turvando parcial ou totalmente o meio (resultado positivo). A bactéria imóvel cresce apenas onde foi inoculada (resultado negativo).
Indol: A enzima triptofanase, age sobre o triptofano, resultando na liberação do Indol. Essa reação é evidenciada pela adição do reativo de Kovacs, produzindo uma coloração rosa-avermelhada (resultado positivo).
Tubo 3 (LIA): 
 Lisina: positivo (roxo);
Indol: Negativo (amarelo);
Arginina : Negativo (Amarelo);
As bactérias que produzem a enzima descarboxilase da lisina podem descarboxilar a lisina e usar as aminas como percursoras para a síntese de outras moléculas. Adicionalmente, quando certas bactérias fazem fermentação são produzidos produtos ácidos que tornam o meio ácido e portanto hostil. Assim, muitas descarboxilases são activadas por um pH baixo, pois ao remover os grupos ácidos dos aminoácidos produzem aminas que aumentam o pH do meio que fica mais adequado.
Tubo 4 (Uréia): positivo (ficou rosa). Teste utilizado para saber se a bactéria metaboliza a uréia. Se tem urease degradará a uréia em amônia, mudando a alcalinização da uréia e ficando rosa.
Tubo 5 (Fenil): Negativo (amarelo), não tem presença de fenilalanina. Ao pingar o cloreto férrico, se tiver presença da enzima fenilalanina descarboxilase degradará a fenilalanina, ficando verde (positivo).
Tubo 6 (Citrato): positivo (azul), indicando que a bactéria usa fonte de carbono. Teste utilizado para saber se a bactéria usa fonte de carbono, se não utiliza apresenta coloração verde.
RESULTADOS DOS TESTES BIOQUÍMICOS
Tabela I. Identificação bioquímica da Klebsiella
	Característica
	Klebsiella
	EMB
	Lac +
	TSI- H2S
	-
	TSI-Glicose
	+
	TSI-Lactose
	+
	Citrato
	+
	Indol
	-
	Lisina
	+
	Fenil
	-
	Mobilidade
	-
	Uréia
	v
 ​​​Legenda: (+) = positivo, (-) = negativo, (v) = variável.
Antibiograma
Antibióticos: 
BAC (bacitracina): não apresentou formação de halo, sendo uma bactéria resistente;
 ASB (ampicilina e sulbactam): apresentouhalo de 7 mm;
TET (tetraciclina) : apresentou halo de 10 mm;
CIP (ciprofloxacino): apresentou halo de 1 mm;
A formação de um halo transparente sobre a superfície do meio, ao redor de um disco de antibiótico, indica uma região com ausência de crescimento bacteriano, revelando a ação inibitória do agente antimicrobiano sobre a bactéria ensaiada.
Um antibiograma é um ensaio que mede a susceptibilidade/resistência de uma bactéria a um ou mais agentes antimicrobianos. Seu objetivo é tanto a análise do espectro de sensibilidade/resistência a drogas de uma bactéria quanto a determinação da concentração mínima inibitória. Nota-se que o antibiótico o qual a bactéria é mais sensível é o TET (tetraciclina) e o antibiótico BAC (bacitracina) a bactéria apresentou resistência.
Conclusão
Concluímos então, que o processo de identificação dos microrganismos é feito através da determinação de um número mínimo de propriedades, ou seja, quanto menor o número de observações efetuadas, maior o risco de erros de identificação. Vimos também, que a cultura dos microrganismos em meios de isolamento primário, assim como a execução e interpretação da coloração e reação ao Gram são vitais para a correta identificação.
Outro ponto importante que analisamos foi que os testes bioquímicos são de suma importância na investigação das atividades metabólicas das bactérias, pois servem para auxiliar na identificação de grupos ou espécies de bactérias ou leveduras através da verificação das transformações químicas. 
E através de todos estes testes que realizamos podemos concluir que a bactéria identificada foi a Klebiella. 
REFERÊNCIAS
BRASIL a. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Detecção e Identificação de Bactérias de Importância Médica. Brasília: ANVISA, Módulo Artigo em PDF. 2004.
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE
FARMÁCIA
JÉSSICA chuistak
JOICE FERNANDA PESTANA
RELATÓRIO DE
 AULA PRÁTICA: MICROBIOLOGIA
Londrina 
2017
JÉSSICA chuistak
JOICE FERNANDA PESTANA
RELATÓRIO 
 Aula Prática Microbiologia
Relatório de aula prática do 2º Bimestre apresentado à Universidade Norte do Paraná - UNOPAR, como requisito parcial para a obtenção de média bimestral na disciplina de fisiopatologia e Farmacoterapia 4.
Orientador: Flávia Lassie. 
Londrina
2017