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Prática- microbiologia esterelização Métodos físicos: Calor úmido -autoclave (121ºc) vidrarias meios de cultivo que suportam altas temperaturas -tindalização (100ºc/ 30 min) meios de cultivo que se alterem com temperatura elevada (meios contendo açúcares!!) 2) Calor seco -estufa (ou forno de pasteur) (170º-180ºC/ 1 a 2 horas) para vidrarias que não podem ser expostas à umidade -flabagem (bico de bunsen) Para alças de platina/ bocas De vidrarias 3) Filtração Líquidos que não podem ser submetidos ao calor (solução de açúcar) 3) Radiação (esterilização do ar e ambientes) -uv -ionizante (raios gama ou x) Métodos químicos glutaraldeído ou formaldeído (exposição em torno de 18 horas) Desinfecção (superfícies) diferente de assepsia (tecidos vivos) Tipos de coloração coloração simples (azul de metileno) (só consegue identificar morfologia e arranjo) ** não é possível fazer diferenciação de bactérias gram negativas e gram positivas Coloração de gram (coloração diferencial) Gram positivas coradas em roxo (pelo cristal violeta) Gram negativas coradas em vermelho (fucsina de gram) Coloração de ziehl-neelsen **o método é utilizado para aquelas bactérias que resistem à coloração de gram (já que em gram se utiliza álcool e ácido) As resistentes se coram pela fucsina fenicada (estão em vermelho) e as não resistentes, são suscetíveis ao azul de metileno ** como podemos ver, as que resistem à solução álcool acido, não serão coradas pelo azul de metileno, ficando coradas pela FUCSINA FENICADA. Meios de cultivo Quanto à consistência: Líquidos (caldo) Semi sólidos (ágar menos concentrado) 3) Sólidos (ágar mais concentrado) Quanto à função Meio enriquecedor (aquele que vai “alimentar” a bactéria) -ágar chocolate, ágar sangue, bhi 2)Meio seletivo -ágar salmonella-shiguella 3)Meio diferenciador -ágar sangue, ágar emb 4) Meio de manunteção (irá manter a bactéria) -ágar nutriente (não confundir com meio enriquecedor!) Técnicas de semeio 1)Meio inclinado A) estria sinuosa (se for com alça de platina –em zigue-zague) b)estria reta (se for com agulha de platina- estria reta) 2) Meio em pé 3) Placa de petri a) em superfície -estrias múltiplas (zigue- zague) - por distensão (espalha-se uniformemente por toda a placa, iniciando no centro) b) em profundidade Identificação de gram positivas Streptococcus pyogenes (beta), agalactiae (beta), Pneumonie (alfa) 1) Atividade hemolítica ** alfa libera pigmento verde **beta forma zona clara ao redor da colônia ** gama não forma nada 2)Teste da bacitracina (fármaco que identifica s. pyogenes)- forma-se um halo 3)Teste de camp **Lembrando que não há como confundir com outros testes com halo de inibição, já que este é feito em ÁGAR SANGUE para uma bactéria BETA HEMOLÍTICA. Staphylococcus (aureus, epidermidis ou saprophyticus) Prova da coagulase (positiva para aureus) Teste de novobiocina 3) Manitol (positivo para aureus) ** vermelho quer dizer negativo e Amarelo, positivo ** pode ficar todo amarelo!! Ter Cuidado pra não confundir com Outros meios 4) Teste da catalase (diferencia Streptococcus de staphylococcus) ** positiva p/ staphylococcus 5) ANTIBIOGRAMA Identificação de gram negativas TESTE NEGATIVO TESTE POSITIVO CITRATO: AZUL (POSITIVO) VERDE (NEGATIVO) LISINA: ROXO (POSITIVO) AMARELO (NEGATIVO) UREIA: ROSA (POSITIVO) AMARELO/ AMARELADO (NEGATIVO) TSI (AÇÚCARES): AMARELO/ LARANJA (POSITIVO) VERMELHO (NEGATIVO) (GLICOSE/SACAROSE/LACTOSE) AMARELO/LARANJA (POSITIVO) VERMELHO (NEGATIVO) TESTE POSITIVO TRÊS AÇÚCARES JUNTOS (G+S+L) AMARELO (POSITIVO) INDOL **TER CUIDADO QUANDO PEDIREM O TESTE. NO TESTE SIM, HÁ O INDOL E O TESTE DE MOTILIDADE. OBSERVAR SE HÁ CRESCIMENTO NA INOCULAÇÃO POR AGULHA DE PLATINA. SE HOUVER CRESCIMENTO, É POSITIVO. TESTE POSITIVO REFERÊNCIA: APOSTILA FORNECIDA ÀS AULAS PRÁTICAS DA DISCIPLINA DE MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA (UFPE) MARÍLIA MIGUEL (GRADUANDA EM FARMÁCIA)
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