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Prática microbiologia

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Prática- microbiologia
esterelização
Métodos físicos:
Calor úmido
-autoclave (121ºc)  vidrarias
		  meios de cultivo que suportam altas temperaturas
-tindalização (100ºc/ 30 min) 	 meios de cultivo que se alterem com 							temperatura elevada (meios contendo 						açúcares!!)
2) Calor seco
-estufa (ou forno de pasteur) (170º-180ºC/ 1 a 2 horas)
  para vidrarias que não podem ser expostas à umidade
-flabagem (bico de bunsen)
Para alças de platina/ bocas 
De vidrarias 
3) Filtração
Líquidos que não podem ser submetidos ao calor (solução de açúcar)
3) Radiação (esterilização do ar e ambientes) 
-uv
-ionizante (raios gama ou x)
Métodos químicos
glutaraldeído ou formaldeído (exposição em torno de 18 horas)
Desinfecção (superfícies) diferente de assepsia (tecidos vivos)
Tipos de coloração
coloração simples (azul de metileno)
(só consegue identificar morfologia e arranjo)
** não é possível fazer diferenciação de bactérias gram negativas e gram positivas
Coloração de gram (coloração diferencial)
Gram positivas  coradas em roxo (pelo cristal violeta)
Gram negativas  coradas em vermelho (fucsina de gram)
Coloração de ziehl-neelsen
**o método é utilizado para aquelas bactérias que resistem à coloração de gram (já que em gram se utiliza álcool e ácido)
 As resistentes se coram pela fucsina fenicada (estão em vermelho) e as não resistentes, são suscetíveis ao azul de metileno
** como podemos ver, as que resistem à solução álcool acido, não serão coradas pelo azul de metileno, ficando coradas pela FUCSINA FENICADA.
Meios de cultivo
Quanto à consistência:
Líquidos (caldo) 
Semi sólidos (ágar menos concentrado) 
3) Sólidos (ágar mais concentrado)
Quanto à função
Meio enriquecedor (aquele que vai “alimentar” a bactéria)
-ágar chocolate, ágar sangue, bhi
2)Meio seletivo
-ágar salmonella-shiguella
3)Meio diferenciador
-ágar sangue, ágar emb
4) Meio de manunteção (irá manter a bactéria)
-ágar nutriente (não confundir com meio enriquecedor!)
Técnicas de semeio
1)Meio inclinado 
	A) estria sinuosa (se for com alça de platina –em zigue-zague)
	b)estria reta (se for com agulha de platina- estria reta)
2) Meio em pé
3) Placa de petri
	a) em superfície 
		-estrias múltiplas (zigue- zague)
		- por distensão (espalha-se uniformemente por toda a placa, 			iniciando no centro)
	b) em profundidade
	
Identificação de gram positivas
Streptococcus pyogenes (beta), agalactiae (beta), 
Pneumonie (alfa)
1) Atividade hemolítica
** alfa libera pigmento verde
**beta forma zona clara ao redor da colônia
** gama não forma nada
2)Teste da bacitracina (fármaco que identifica s. pyogenes)- forma-se um halo
3)Teste de camp
**Lembrando que não há como confundir com outros testes com halo de inibição, já que este é feito em ÁGAR SANGUE para uma bactéria BETA HEMOLÍTICA.
Staphylococcus (aureus, epidermidis ou saprophyticus)
Prova da coagulase (positiva para aureus)
Teste de novobiocina
3) Manitol (positivo para aureus)
** vermelho quer dizer negativo e 
Amarelo, positivo
** pode ficar todo amarelo!! Ter 
Cuidado pra não confundir com 
Outros meios
4) Teste da catalase (diferencia Streptococcus de staphylococcus)
 ** positiva p/ staphylococcus
5) ANTIBIOGRAMA
Identificação de gram negativas
TESTE NEGATIVO
TESTE POSITIVO
CITRATO:
AZUL (POSITIVO)
VERDE (NEGATIVO)
LISINA:
ROXO (POSITIVO)
AMARELO (NEGATIVO)
UREIA:
ROSA (POSITIVO)
AMARELO/ AMARELADO (NEGATIVO)
TSI (AÇÚCARES):
AMARELO/ LARANJA (POSITIVO)
VERMELHO (NEGATIVO)
 (GLICOSE/SACAROSE/LACTOSE)
AMARELO/LARANJA (POSITIVO)
VERMELHO (NEGATIVO)
TESTE POSITIVO
TRÊS AÇÚCARES JUNTOS (G+S+L)
AMARELO (POSITIVO)
INDOL
**TER CUIDADO QUANDO PEDIREM O TESTE. NO TESTE SIM, HÁ O INDOL E O TESTE DE MOTILIDADE. OBSERVAR SE HÁ CRESCIMENTO NA INOCULAÇÃO POR AGULHA DE PLATINA. SE HOUVER CRESCIMENTO, É POSITIVO.
TESTE POSITIVO
REFERÊNCIA:
 APOSTILA FORNECIDA ÀS AULAS PRÁTICAS DA DISCIPLINA DE MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA (UFPE)
MARÍLIA MIGUEL (GRADUANDA EM FARMÁCIA)

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