ELISA e Radioimunoensaio

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ELISA E RADIOIMUNOENSAIO 
Prof. Thiago S. Fernandes 
Universidade Federal de Pernambuco 
Centro de Ciências Biológicas 
Departamento de Biofísica e Radiobiologia 
ELISA 
ENZIMA 
LIGADO 
IMUNO 
ADSORÇÃO 
ENSAIO 
Produção de Anticorpos 
• OBTENÇÃO E ESCOLHA DO ANTICORPO 
– Os anticorpos são produzidos em animais: 
• Coelhos 
• Cobaias 
– Repetidas injeções do antígeno (Ag+adjuvante de 
Freund) 
– Adjuvante de Freund= tem a finalidade de 
retardar a liberação do antígeno no corpo do 
animal 
– Tempo= 6 semanas a 6 meses 
Camundongo imunizado com antígeno X 
Linfócitos do baço que produzem AC 
contra X são isolados 
Linfócitos são fundidos com mielomas 
(imortais) 
Células híbridas (mieloma/linfócito) são 
selecionadas 
Células são clonadas 
AC é produzido no meio de cultura e este 
meio é testado 
Linhagem que produz o melhor AC é 
crescida e o AC é purificado. Por serem 
células imortais, isso pode ser realizado 
indefinidamente 
Produção de AC monoclonais 
Revendo a estrutura do 
Anticorpo 
Luminescência 
ELISA 
fase sólida: poliacrilamida, agarose, dextran, poliestireno, 
polivinil, polipropileno 
Placa de ELISA 
• Aplicações: 
Detectar Ags e Acs, proteínas séricas, hormônios, 
medicamentos, drogas, etc. 
 
‐ Explora a reação Ag‐Ac usando enzimas como marcadores 
‐ Sensível e específico 
‐ Leitura no espectrofotômetro 
‐ Reagentes estáveis 
‐ Variedade de enzimas que podem ser usadas 
‐ Sem riscos 
‐ Poder ser automatizada 
ELISA 
Reações reversíveis. 
 
 Ligações não covalentes: 
-Pontes de hidrogênio 
-Interações hidrofóbicas 
-Interações de Van der Waals 
-Ligações iônicas 
ELISA 
TIPOS DE ELISA 
Indireto, Direto e Competitivo 
DIRETO OU 
SANDUÍCHE 
INDIRETO PLACA 
UTILIZADA 
 ELISA Indireto 
 ELISA Direto ou Sanduíche 
 ELISA Competitivo 
TIPOS DE ELISA 
• ELISA QUALITATIVO 
– esta leitura, em alguns casos, pode ser feita visualmente, caso deseje 
saber somente se é "positivo" ou "negativo“. 
– Ainda neste caso, também pode-se definir aquelas amostras 
"duvidosas", ou "indeterminadas", que talvez devam ser submetidas a 
outro tipo de teste para confirmação. 
 
• ELISA QUANTITATIVO 
– Para resultados mais precisos, com espectrofotômetro ou uma 
Leitora de Microplacas por absorvância, pode-se obter a 
concentração. 
Radioimunoensaio 
Radioimunoensaio 
• Conceito: 
– Marcação da molécula biológica com 
isótopos radioativos. 
 
– Alta especificidade e afinidade (detecção 
na ordem de picogramas) 
 
– Amostras diretamente do líquido 
biológico com volume reduzido. 
 
Utilização do radioimunoensaio 
• É aplicado para determinar: 
hormônio de crescimento 
hormônio luteinizante 
gonadotrofina coriônica 
testosterona 
imunoglobulinas 
hormônios tireoidianos 
marcadores tumorais 
antígenos virais 
Drogas 
Alérgenos 
Doenças parasitárias 
 
 
Radioimunoensaio 
• Radioproteção 
 
– Tempo 
– Distância 
– Blindagem