RESUMO - 3º Prova de Biofisica II

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3°Prova de Biofísica 2 
Cromatografia 
É uma técnica analítica que tem a função de separar os componentes de uma mistura. Esses componentes são distribuídos 
entre uma fase móvel e uma estacionária. 
 
Classificação: 
- Planar: Ocorre em superfícies planas 
- Em coluna: Ocorre em cilindros preenchidos com a fase 
estacionária(normalmente silica gel) 
 - Gasosa: A fase móvel é um gás 
 - líquida: Fase móvel é um líquido 
 
PROCESSO DE ELUIÇÃO 
Eluição: Passagem da fase móvel pela a fase estacionária, 
gerando o deslocamento do soluto. 
Série eluotrópica: Ordena os solventes de acordo com a sua 
habilidade de arrastar o soluto de um adsorvente. 
 Eluente fraco: É apolar e vai arrastar compostos apolares 
 Eluente forte: É polar e arrasta polares e apolares, então não é bom para separar os compostos 
 Ex de apolares: Hexano, tolueno 
 Ex de polares: água, acetato de etila 
 Se eu colocar hexano e ele nao arrastar os componentes, é pq ele é muito fraco. Então eu aumento a 
 polaridade da fase móvel para que ele tenha uma maior força de eluição e consiga arrastar o soluto. 
 Força que o eluente vai ter sobre as amostras 
MODOS DE ELUIÇÃO 
Isocrático: Usa a mesma fase móvel do começo ao final da corrida. 
Gradiente: Varia a fase móvel durante a corrida 
 
CROMATOGRAFIA COM FASE NORMAL: Fase estac. é polar com solvente menos polar. Separa melhor compostos apolares. 
CROMATOGRAFIA COM FASE REVERSA: Utiliza fase estac. apolar ou fracamente polar e um solvente polar. Separa melhor os 
compostos polares. 
Mecanismos Cromatográficos(Formas que ocorrem a cromatografia) 
 
CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA(CLAE/HPLC) 
Fase móvel: Solução, solventes orgânicos(metanol, acetonitrila) e água 
Fase estacionária: Coluna analítica cromatográfica (geralmente preenchi- 
da por silica gel), que deve ter um pH abaixo de 8,0 
Pré-coluna: Tem o objetivo de reter sólidos e materiais que podem precipitar 
sobre a fase estacionária. Fica acoplada no começo da coluna 
 
Pré-coluna Coluna Detector Computador 
 
# Tudo que entra nesse cromatógrafo precisa ser filtrado. 
 
Componentes auxiliares do HPLC: Válvula de purga e misturador 
 
-Troca iônica: Fase estacionária positiva atrai 
componentes negativos, e vice-versa. É bom para 
separar peptídeos, carboidratos... A separação 
ocorre por eletronegatividade ou eletropositividade. 
-Filtração em gel/Exclusão: Separação por tamanho, 
sendo que os componentes maiores saem primeiro. 
Fase estacionária: Gel poroso 
 
-Adsorção: Aderencia do soluto na fase estacionária, que 
ocorre por forma física(interações de Van der walls, que é 
fraca) ou química(forma ligação covalente). Ocorre na silica 
gel 
-Partição: Ocorre em cromatografia líquido-líquido 
imiscíveis(não se misturam). Substâncias polares se ligam 
na fase que for polar, e as apolares na fase apolar. 
-Bioafinidade: A fase estacionária é um ligante que se 
associa a apenas 1 molécula, ou seja, é muito específico. 
 
Método analítico: Quer descobrir os 
compostos na amostra. 
Método preparativo: Quer coletar os 
diferentes compostos da amostra 
 
Princípios de separação(Interação do 
solto nas 2 fases): Van der walls, pontes 
de hidrogênio, dipolo-dipolo e atração 
eletrostática 
 
# Na coluna é realizada a separação efetiva dos 
componentes 
# Compostos de maior polaridade ficam mais retidos na 
coluna, e os menos polares passam mais rapidamente. 
Esses compostos também sofrem influência da fase 
móvel. 
 Quanto mais rápido o composto andar, mais 
apolar ele é, e mais afinidade com a fase móvel ele tem. 
 
A diferença de interação com a coluna promove a 
separação. 
 
Detectores: Componentes do cromatógrafo que geram sinal elétrico 
proporcional a quantidade eluída de um analito 
 -Universais: Geram sinal pra qualquer substância 
 -Seletivos: Detectam apenas substâncias específicas 
 Mais utilizados: Utravioleta, MS e Infra-vermelho 
CROMATOGRAFIA GASOSA(CG) 
O equipamento consegue analisar aromas(HPLC não consegue). 
Sua coluna tem de 30-50m. 
 
Desenvolvida para compostos voláteis ou que podem ser volatilizados sem 
degradação, sob aquecimento. 
 
A cromatografia só acontece quando o composto vira gás. 
 
É muito utilizada para análises quantitativas e qualitativas; análise de contaminantes de ar, de álcool no sangue; para 
monitoramento de processos industriais... 
 
Vantagens: O volume injetado é pequeno, as análises são rápidas(máx10 min), tem maior sensibilidade e seletividade. 
 
ESPECTROMETRIA DE MASSA(MS) 
É uma forma de deteção utilizada no CG ou na C. Líquida, que é muito específica. Indica o peso e fórmula molecular. 
- Não há absorção ou emissão de luz(Usa-se espectrômetro e não espectrofotômetro) 
- A amostra vai ser destruída por um feixe de elétrons(Método destrutivo) até chegar a forma de íons. 
 
O Espectrômetro é composto de: 
 - Unidade de admissão/entrada para amostras gasosas 
 - Fonte de ionização 
 - Unidade aceleradora de íons 
 - Analisador magnético de íons (Deixa passar os íons que são adequados 
para serem analisados) 
 - Detector 
 
#Uma amostra pode ser separada por Cromatografia gasosa e analisada 
pela Espetrometria de Massa. 
 
Microscópios 
 
Há basicamente 2 tipos de microscópios: Diretos e invertidos 
Direto: A luz passa pelo condensador e é focalizada na amostra. 
Invertido: É como se o microscópio Direto estivesse de cabeça para baixo. 
 
Por que tem o Micros. Invertido? Ele facilita manipulações biológicas. Há um espaço grande entre o condensador e a platina 
que cabe garrafas de culturas de células, permitindo a visualização de culturas celulares nessas garrafas. 
 
# Foco: No Direto, a platina que regula o foco, e no Invertido a Objetiva que sobe e desce. 
 
 Microscópio antigo(antes 1998): Objetiva e Ocular eram as lentes. A Objetiva formava a imagem num plano 
 Microscópios modernos: Lentes: Objetiva a ocular(ou lente da câmera) e a lente de tubo. 
 -(De óptica infinita): É como se o objeto sempre estivesse no foco da objetiva, então os raios saem em paralelo, não 
 formando a imagem. As lentes de tubo fazem com que os raios se encontrem formando a imagem no plano 
 intermediário, servindo de Objeto para a ocular. 
 
Substâncias que podem ser analisadas: 
Antibióticos, diuréticos, fármacos, drogas, 
substâncias não voláteis ou termicamente 
instáveis. 
 
No HPLC dá pra recolher as amostras que 
foram separadas, e na cromatografia 
gasosa não dá, porque o material será 
destruído. 
 
Fase móvel: Gás(hélio e nitrogênio) 
Fase estacionária: Coluna de silica especial 
 
 É muito seletivo, formando uma 
espécie de “Impressão digital” de uma 
substância. 
 
 Utilização: Monitoramento de 
respiração de pacientes durante a 
cirurgia, análise de moléculas inorgânicas, 
testes anti-doping. 
 
 
A objetiva coleta a luz que vem da 
amostra e a imagem é formada no 
computador, câmera ou na ocular. 
 
Vantagem do microscópio de óptica infinita: Ele permite 
que nós coloquemos elementos óticos entre a objetiva e 
as lentes de tubo, sem haver distorção na imagem. Isso 
ocorre porque os raios que estão vindo, estão em 
paralelo(Não causando refração). 
 
Por que se coloca mais elementos óticos? Para a 
utilização de imagens de fluorescência ou 
tridimensionais. Essas imagens dão mais informações 
biológicas. A de fluorescência dá a especificidade 
química e a outra dá mais detalhes da morfologia celular. 
 
CONTRASTE: Quando consigo distinguir a amostra do “fundo”. Em contraste, as células que estão sendo analisadas ficam 
destacadas do fundo. 
RESOLUÇÃO: São os detalhes que conseguimos observar na imagem. Quanto mais detalhes, maior a resolução. 
 
 
 
Contraste 
A luz passa de forma diferente no fundo e na célula, porque a célula pode ter um índice de refração e espessura diferentedo 
meio. Isso proporciona diferenças na absorção da luz. 
O que proporciona o contraste em microscópios de Campo claro: a diferença do índice de refração e da espessura do meio 
para a célula. 
 # Em microscópios convencionais, não se pode enxergar leucócitos porque eles têm o I.R parecido com o do meio. 
 
OBJETIVA 
Características: Aumento, distância de trabalho, campo de visão, abertura numérica e Imersão. 
O campo de visão diminui com o aumento da objetiva 
Abertura numérica(A.N): n.sen θ 
 n é o índice de refração, pois a objetiva pode trabalhar no ar, óleo, água... 
 θ é a capacidade que a objetiva tem de coletar a luz 
Quanto maior a A.N, maior o ângulo de coleta da objetiva 
Geralmente, objetivas de maior aumento, tem maior A.N 
A maior A.N que existe é a de 1,4(no óleo), no ar é de 0,95(Maior 
abertura que não há reflexão interna total) 
Quanto maior o aumento, menor a distância de trabalho 
#Sempre a lamínula tem que ficar em contato com a objetiva 
Por que existe a Objetiva de Imersão a óleo = Para aumentar a resolução. O óleo evita a reflexão interna total, aumentando o 
ângulo de coleta de luz, aumentando a A.N, que melhora a resolução. 
 
 Refração ≠ Difração 
 
Resolução e é a menor distância que duas estruturas 
podem estar e ainda podem ser distinguidas. Ou seja, 
estruturas ≥ R são distinguíveis. 
 
Resolução não depende do aumento e sim da Abertura numérica. Porque R=0,61λ/A.N, então quanto maior a A.N, menor a 
resolução. 
 
 
Ultrassonografia 
É uma técnica para analisar tecidos moles. 
Efeito piezo-elétrico: Através de um sinal elétrico em determinado materiais, ele transmite ultrassom. Ex: Quartzo 
 
Ultrassom é uma onda mecânica(precisa do meio material pra se propagar) longitudinal de frequência > que 20KHz. 
Como essa onda depende do meio, ela tem velocidade diferente em vários meios. A velocidade depende da elasticidade e da 
densidade. 
Velocidade média: 1530m/s 
 
Na ultrassonografia, o que vai ser analisado é a onda refletida pelo nosso corpo. O transdutor vai emitir a onda e a cada 
interface do tecido, a onda vai sendo refletida. Essa reflexão é captada pelo próprio transdutor, e ele vai analisar e o tempo de 
retorno ao aparelho(diz a localização) e a amplitude. 
 
 
 
Aumento 
Tem que estar sempre relacionado com a ocular. O 
microscópio ótico tem no máximo 1500x de 
aumento com boa resolução. 
 
 
O que limita o que posso enxergar no microscópio ótico 
e eletrônico é a Difração. 
 
 
 
Desvio que a luz sofre ao 
passar de um meio para 
outro. 
É o fenômeno que é gerado 
pelo espalhamento da luz 
por causa de um obstáculo. 
Como varia a A.N? Variando a objetiva. 
Depende também do λ, porem não dá pra 
alterar esse parâmetro no microscópio, 
então consideramos λ como 600nm. 
 
 
Por que na Mic. Eletronica consigo enxergar mais detalhes(maior 
resolução) que na Mic. Optica? Por causa do comprimento de 
onda que é menor. 
Estrutura ecogênica: Reflete muito 
Estrutura anecoica: Reflete pouco 
 
 
Intensidade da onda Refletida 
Impedância acústica: Resistência do material à passagem do som. 
Função do gel = Faz com que a diferença de impedância acústica diminua, permitindo que o ultrassom entre no corpo. 
 
Por que não vemos osso? A diferença de impedância é grande e a atenuação das ondas é alta. 
 
# A atenuação é importante enquanto a onda está no mesmo material, e a reflexão é importante na interface. 
 
A atenuação depende da frequência. 
 Quanto maior a frequência, maior a atenuação. 
 Quanto maior a quantidade de água, menor a atenuação 
 Quanto maior a absorção, maior a atenuação 
 
A terapia de ultrassom é baseada no aquecimento(por causa da absorção) e na cavitação(Produção de pequenas bolhas, 
gerando uma micromassagem) 
 
#Por que não dá pra visualizar pulmão? Porque tem muito ar, causando reflexão de 99% do ultrassom. 
 
Resolução = Habilidade de disitinguir estruturas separadas espacialmente. 
Quanto maior a frequência, melhor a resolução. 
 
O transdutor é feito de um material piezo-elétrico. Após a aplicação de uma certa tensão, a cerâmica vai vibrar, deformar e 
gerar uma onda ultrassônica. 
 
MODOS DE APRESENTAÇÃO 
Modo A 
Só observa pulsos(dos sinais refletidos). Observa a amplitude e o 
tempo em que o sinal demorou pra chegar no transdutor. Não 
apresenta a forma do objeto. 
Localiza interface ecogênicas 
Modo B(brilho) 
Faz uma imagem 2D a partir do ultrassom. Analisa o tempo e a 
amplitude. 
Reflete muito(Ecogênica): Cor branca. O que reflete pouco: Preto 
Imagem em escala de cinza 
Modo M(Movimento) 
Usado pra escutar batimentos cardíacos do bebê(órgãos em 
movimento) 
O som é dado ao favor da amplitude 
 
Vantagens do ultrassom 
Bom para gerar imagem de tecido mole, imagem em tempo real, não é prejudicial ao pacientee é de baixo custo. 
Desvantagens: Baixa qualidade da imagem em obesos, não dá imagem de ossos e a qualidade da imagem depende do 
operador. 
 
#Equilibração do equipamento: Pelo phantom. Ele tem cilindros que lembram as regiões do corpo. O operador faz a imagem 
dele, se ficar boa, é porque o equipamento está calibrado. 
 
Tomografia 
 
A radiação eletromagnética é emitida ou absorvida quando o elétron faz transição entre órbitas (níveis de energia). 
 
Formas de Raios-x: 
- Característico: Vem um feixe de elétrons acelerado e colide com o átomo. Se esse feixe tiver energia suficiente, pode arrancar 
um elétron da cada K. Quando isso acontecer, o elétron da camada mais externa vai completar o espaço que ficou na camada 
anterior. Quando o elétron faz isso, a energia que ele libera é o raio-x. 
 Só acontece em átomos de grande n° atômico 
 A energia desse raio-x é própria do elemento(por isso é chamado Característico) 
 
O que faz dentro de um mesmo meio a 
onda perder a intensidade? Sua 
absorção. 
 
 
Modo Doppler 
Usado para detectar fluxo sanguíneo, 
monitoramento de pressão... 
Sempre acompanhado do Modo M 
É colorido 
Transdutor: Observador. Fonte: Estrutura 
do corpo. 
A frequência da onda refletida muda de 
acordo com a aproximação(vermelho) ou 
afastamento(azul) do transdutor 
 
Power Doppler 
Vê pequenas alterações no fluxo em 
determinadas regiões 
 
 
- De frenagem: O feixe de elétrons chega próximo ao núcleo e é desviado ou desacelerado. Nessa hora, há a liberação de raios-
x de frenagem. 
  Esses fótons podem ter qualquer energia 
 Quanto menor é a energia perdida, maior é o comprimento de onda do raio-x 
 É utilizado para diagnóstico, porque pode ser controlado 
 
# O raio-x é gerado na ampola de raio-x 
 -Catodo(emissor de elétrons que vai ser aquecido) 
 -Anodo(alvo do feixe de elétrons) 
A interação do raio-x com o corpo é diferente em cada região. Enquanto os ossos o absorvem, o tecido mole o deixa passar. 
Por isso nas imagens os ossos são brancos e o restante escuro 
 
O que é absorvido pode ser visualizado 
 
Como o raio-x interage com o corpo? 
-Absorvendo: Esse raio interage com o corpo pelo efeito fotoelétrico. O feixe vai interagir com o elétron, perder toda a sua 
energia, o retirando da sua camada eletrônica. 
 Ocorre em materiais de alto nível atômico 
- Pelo Espalhamento Compton: O fóton vai ser apenas desviado, espalhando raio-x. Só atrapalha a imagem médica 
- Sendo Transmitido: O raio-x será transmitido pelo tecido mole com baixo número atômico 
 Ocorre em materiais de baixo nível atômico 
 
O que faz pra gerar efeito fotoelétrico: Usa raio-x de baixa energia. 
 Em caso de tecidos moles, usa-se raios-x com energia ainda menores, para que ele seja mais absorvido. Aumentando 
a absorçao e o efeito fotoelétrico, aumenta-se a dose de radiação recebida, então é por isso que exames como a mamografia 
devem ser feitos com baixa frequência. 
 
Exames 
Fluoroscopia: Video de raio-x 
Abreugrafia:Raio-x do pulmão(diagnostica tuberculose) 
Angiografia: Usada para monitorar desobstrução de vasos do coração 
 Porque o raio vai ter que passar pelo 
 corpo e ser transmitido ao detector 
Tomografia por Transmissão(usa raio-x) 
Dá ênfase ao estudo anatômico 
Dá pra ver tecido mole 
O paciente fica entre a fonte de raio-x e o detector 
Tomografia por Emissão(usa raio gama) 
Dá ênfase ao estudo fisiológico 
PET e SPECT 
Utiliza radionuclídeos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Ressonância Nuclear Magnética 
 
 
 
 
 
 
Método não invasivo que não usa radiação ionizante 
Raio Gama 
- Produzido em átomos com núcleos intáveis 
 
Formas de geração: 
-O átomo emite raio-gama diretamente 
-O átomo emite pósitron que vai ser 
aniquilado gerando o raio gama 
 
Interação com a matéria 
#Mesmo jeito que o raio-x 
 
#O raio gama é mais energético que o raio-x 
 
Spect: Emite Raio gama diretamente 
-Radioisótopo: Tecnésio 99M 
PET: Emite pósitron que é aniquilado 
gerando 2 raios gama de direção oposta, 
mas com a mesma energia 
-Radioisótopo: Flúor 18 
É bom pois ao liberar 2 raios gama, a 
localização das estruturas são mais 
específicas 
Ajuda no monitoramento do câncer 
 
 
Porque é em relação 
ao núcleo do próton 
de H+ 
 
 
Porque sente a presença 
do campo magnético 
 
 
Porque aplica um pulso de rádio 
frequência na mesma frequência 
de precessão do próton de H+ 
 
Permite a visualização de tecidos profundos com alta definição anatômica 
 Se comporta como um ímã 
#Momento magnético nuclear: movimento das cargas elétricas gerando um campo magnético 
#Movimento angular intrínseco: Movimento do prótio ao redor de seu próprio eixo(spin) 
 
 Precessão: Movimento de um peão cambaleando de um prótio ao sentir a presença de um campo magnético 
 -A frequência da precessão é governada pelo campo magnético externo 
 ->Frequência de precessão para o H+: Frequência de Larmor do H+ 
#Em Ressonância, o vetor campo magnético “desce” no plano y 
A captação da imagem vem da perda de energia do próton(Perde no plano xy e ganha no plano z) 
 
 
 
 
Principais contrastes 
Região com prótons(Com água): Imagem mais preta 
Região sem prótons(Sem água): Imagem mais branca 
 
Tipos de contraste 
 
 
 
 
 
Tipos de Imagem 
Imagens hiperintensas: Estruturas cujos H+ passam pouco tempo emitindo sinal, apresentando coloração esbranquiçada em T2 
Imagens hipointensas: Estruturas cujos H+ não retornam rápido, passando mt tempo emitindo sinal, apresentando coloração 
mais escura em T2 
Imagem com ausência de sinal: Estruturas cujos H+ estãoem fluxo rápido, como nos vasos. Imagens pretas em T2 
 
Quanto menor o tempo emitindo sinal nos planos xyz, mais esbranquiçada é a imagem. 
Se a estrutura passar muito tempo emitindo sinal em T2, ela passa pouco tempo em T1, e vice-versa. 
 
A qualidade da imagem é determinada por quatro itens: Artefatos, ruído, distorção e contraste 
 
Vantagens: Não usa radiação ionizante, não invasivo, é bom para imagem de tecidos moles e tem alta definição anatômica 
Desvantagens: Alto custo, tempo longo de exame, pode causar claustrofobia e é ruim para ossos. 
 
Citometria de Fluxo 
 
 
 
 
Aplicabilidade: Análise de ciclo celular, de proliferação celular, de viabilidade, fluxo de Ca2+ intracelular.. 
 
É uma técnica multiparamétrica que permite a análise rápida, objetiva, qualitativa e quantitativa de células de partículas 
suspensas em meio líquido sob fluxo contínuo. 
 
 
O Processo de relaxação magnética é modulado por 
duas constantes de tempo: T1 e T2. 
 - T1 e T2 dependem da inomogeneidade do 
 meio, gerando diferentes imagens pelas 
 diferentes composições químicas e 
 morfofisiológicas do meio 
T1: Tempo de relaxação longitudinal(Recuperação da 
magnetização do plano Z) 
T2: Tempo de relaxação transversal 
 
 
Contraste em T1: 
-Com prótons(água): Enegrecido 
-Sem prótons(água): Esbranquiçado 
 
 
Contraste em T2 
-Com prótons(água): Esbranquiçado 
-Sem prótons(água): Enegrecido 
 
 
Célula 
 
Medir 
 
Movimento 
 
Dentro do aparelho, deve haver 3 sistemas: Sistema de fluxo(vai colocar as partículas em um líquido em movimento), sistema 
óptico(utilizado pra fazer análise) e sistema eletrônico(transforma a análise em gráfico) 
 
 
Sistema ótico 
Gera e coleta sinais de luz 
Fonte de luz(Laser) interage com cada célula, sofre espalhamento podendo gerar fluorescência, que será coletado pelos filtros 
e detectores ópticos. 
Detectores do espalhamento a ser analisado: 
 FSC(espalhamento que passou pela célula), - Diz o tamanho, pois o espalhamento é proporcional ao tamanho da célula 
 SSC(espalhamento lateral) – Depende da complexidade interna celular, então diz a complexidade celular 
 FL1,FL2,FL3 E FL4(De marcadores fluorescentes) – Dá análise de fluroescência, dizendo a propriedade bioquímica da célula 
Lasers: Azul-esverdeado(488nm) e vermelho(633) 
 
Sistema de fluxo 
Aspira e deixa as células em “fila indiana” com o auxílio de um líquido na câmara de fluxo 
Sistema eletrônico 
Processa sinais ópticos em eletrônicos, gerando gráficos 
 
FLUORESCÊNCIA 
 
 
Fluorescentes naturais: cristais e clorofila 
Fluorescentes secundários(tratados com fluoróforos): corantes(fluoresceína, Alexa...), proteínas fluorescentes e outros. 
 
Ao jogar a luz na amostra, ela via fluorescer e então temos que separar o sinal fraco do sinal forte através de filtros. Então 
assim podemos visualizar apenas o sinal fraco(o que foi refletido) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Aplicações em imunofenotipagem: análise da expressão antigênica através da interação antígeno-anticorpo 
 Útil no diagnóstico e monitoramento de terapias de doenças malignas hematológicas, como 
 leucemia e linfomas. 
O anticorpo vai ser marcado com fluorescência para reconhecer o antígeno 
 
#Existem citômetros que fazem separação física de células pelo método eletrostático 
É emitido uma luz de alta energia(baixo comprimento de onda) para fazer com que o elétron saia do nível para 
fundamental e vá para o nível eletrônico e excitado. Esse elétron vai tender a voltar para o nível fundamental, 
emitindo uma luz de baixa energia(alto comprimento de onda) 
 
 
Filtros: Bloqueiam certos comprimentos de onda e permitem a 
passagem de outros 
 -Passa banda(3): Deixa passar só um tipo de cor 
 1°: no detector FL1(só passa verde) 
 2°: no detector FL2(só passa laranja) 
 3°: no detector FL3(só passa vermelho) 
 -Passa alta(1): Deixa passar cores acima de um limite 
 1°: no detector FL4(só passa acima do vermelho, pra 
detectar infravermelho) 
Espelho dicróico: Deixa passar as cores e “reflete” 1 cor para os 
filtros. Reflete verde pra FL1, laranja para FL2, vermelho para 
FL3 e infraverm para FL4. 
 
1° coisa a se fazer na citometria: O gráfico da FSC com a SSC. 
#O controle são as células não marcadas, e diz o perfil de 
autofluorescência dessas células. 
 
Gates e regiões: Separam as populações de interesse 
Quando se tem só 1 população de interesse marcada, a 
análise é por histograma. 
Quando se quer analisar 2 marcadores, a análise é por 
histograma de 2 parâmetros