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B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t M a r l i s e L a d v o c a t M a r l i s e L a d v o c a t M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i B a r t h o l o m e i B a r t h o l o m e i B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s S a n t o s S a n t o s S a n t o s 2 0 1 0 2 0 1 0 2 0 1 0 2 0 1 0 ESTRUTURA E FUNESTRUTURA E FUNESTRUTURA E FUNESTRUTURA E FUNÇÇÇÇÃO DO ÃO DO ÃO DO ÃO DO DNADNADNADNA B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 Células têm que armazenar, obter e traduzir as instruções genéticas necessárias para manter o organismo vivo A informação hereditária é passada de uma célula às suas células-filhas durante a divisão celular e de uma geração para outra B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 O que torna isso possível? Breve histórico da procura pela molécula da hereditariedade A BUSCA PELA MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE • 1848 Wilhelm Hofmeister: durante a mitose o núcleo “se arruma” em estruturas em forma de bastão • 1869 Johan Friedrich Miescher: núcleo contém substância ácida - nucleína B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 • 1928 Frederick Griffith: • Pneumococcus cepa S (Smooth) = patogênica • Pneumococcus cepa R (Rough) = não-patogênica PRINCÍPIO TRANSFORMANTE B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 A BUSCA PELA MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE • 1944 Oswald Avery, Colin MacLeod e Maclyn McCarty: O PRINCÍPIO TRANSFORMANTE É DNA B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 A BUSCA PELA MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE • 1952 Alfred Hershey e Martha Chase: DNA É O MATERIAL GENÉTICO B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 A BUSCA PELA MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE Rosalind Franklin (25/07/1920-16/04/1958): • Estudos de difração de Raios X da molécula de DNA • DNA = hélice • Esqueleto açucar-fosfato do lado externo • Seu trabalho foi essencial para a descrição correta da estrutura do DNA • Morreu aos 37 anos sem receber o devido reconhecimento pelo seu trabalho B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t Ba r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 A BUSCA PELA MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE Maurice Wilkins (15/12/1916-05/10/2004): • Estudos de difração de Raios X da molécula de DNA A BUSCA PELA MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 A regra de Erwin Chargaff (1950): 1)Adenina está na mesma concentração molar de Timina e Citosina está na mesma concentração molar de Guanina na molécula de DNA 1)A quantidade molar de A/T e G/C varia de espécie para espécie B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 A BUSCA PELA MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE James Watson e Francis Crick: • 25/04/1953 Publicação na Nature de artigo descrevendo a estrutura do DNA Crick (08/06/1916-28/07/2004) e Watson (06/04/1928-) B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 A BUSCA PELA MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE ESTRUTURA DO B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO • Unidade básica: NUCLEOTÍDEO Fosfato Base nitrogenada Açucar de 5 C (pentose) = desoxirribose B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO • Polímero linear de nucleotídeos (DESOXIRRIBONUCLEOTÍDEOS) ligados entre si através de ligações fosfodiéster • Desoxirribonucleotídeo: Fosfato (PO4-), Açucar de 5 carbonos (desoxirribose), base nitrogenada • Dupla-fita • Cada fita apresenta uma orientação • Fitas antiparalelas B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO Polímero de nucleotídeos B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a dv o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO Duas fitas antiparalelas B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO Estrutura do B-DNA (forma + comum em condições fisiológicas) • Destrógira • Espaçamento regular entre bases de 0,34 nm ao longo do eixo • Volta completa da hélice a cada 3,4 nm (10,5 pb por volta) • Presença de sulcos (maior e menor) B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 B DNA B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO Bases nitrogenadas presentes no DNA: • Purinas: B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 Bases nitrogenadas presentes no DNA: • Pirimidinas: DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO Pareamento de bases de Watson-Crick (convencional): • Adenina pareia com Timina através de 2 pontes de H • Guanina pareia com Citosina através de 3 pontes de H B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DNA – ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO Tipos de DNA: B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 01 0 S a n t o s 2 0 1 0 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 ESTRUTURA DO RNA – ÁCIDO RIBONUCLEICO • Polímero linear de nucleotídeos (RIBONUCLEOTÍDEOS) ligados entre si através de ligações fosfodiéster • Ribonucleotídeo: Fosfato (PO4-), Açucar de 5 Carbonos (Ribose), base nitrogenada • Fita simples • Pode formar estruturas secundárias, onde A pareia com U e G pareia com C • Bases nitrogenadas: Purinas (Adenina e Guanina) e Pirimidinas (Citosina e Uracila) B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 RNA – ÁCIDO RIBONUCLEICO Ribonucleotídeo B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 RNA – ÁCIDO RIBONUCLEICO B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 RNA – ÁCIDO RIBONUCLEICO PRINCIPAIS TIPOS DE RNA: • mRNA (RNA mensageiro): contém a mensagem codificada no gene (DNA) que será utilizada na síntese de proteínas • tRNA (RNA transportador): transporta aminoácidos até o local da síntese de proteínas • rRNA (RNA ribossomal): junto com proteínas forma o ribossomo • snRNA (“small nuclear RNA” ou RNA pequeno nuclear): participa do processamento de mRNAs em eucariotos • scRNA (RNA pequeno citoplasmático) • SnoRNA (RNA pequeno nucleolar): envolvido no processamento de rRNA • siRNA (RNA de interferência): dispara a degradação do mRNA • ribozimas: RNAs catalíticos que degradam mRNAs B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 Em eucariontes o DNA é localizado no núcleo celular B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 Quantas moléculas de DNA tem o ser humano? 46, com ~3,2 x 109 nucleotídeos distribuídos em 24 cromossomos diferentes B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a rl i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 24?? 22 pares de homólogos iguais nos dois sexos (autossomos) + 2 cromossomos sexuais (X e Y) B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 Você sabe quanto mede o DNA humano se colocarmos as moléculas de DNA em fila indiana? Dois metros ~ Como essa metragem pode caber dentro do núcleo de uma célula, com ~ 6 µµµµm de diâmetro??? B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 CROMOSSOMOS EUCARIÓTICOS - compactação B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 CROMOSSOMOS EUCARIÓTICOS - compactação B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 CROMOSSOMOS EUCARIÓTICOS - compactação 1º nível de compactação: • Nucleossomo – octâmero de histonas (H2A, H2B, H3, H4) + histona H1 (11 nm) 2° nível: • Solenóide: fibra de 30 nm 3º nível: • Arcabouço de proteínas não-histônicas com alças: fibra de cromatina – intérfase (300 nm) Cromossomos metafásicos: • Grau máximo de condensação: 1400 nm B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 Cerne do nucleossomo B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 Micrografia eletrônica de cromossomo metafásico humano B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 10 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 Micrografia eletrônica de cromossomo humano metafásico do qual foram removidas as histonas B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 A natureza dos genomas... B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 GENOMA: Informação genética total contida em uma célula ou organismo GENÔMICA: O estudo das seqüências de DNA e das propriedades de genomas inteiros •Genômica Estrutural •Genômica FuncionalB i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 DOGMA CENTRAL DA BIOLOGIA MOLECULAR: DNA RNA PROTEÍNAS Replicação Transcrição Retrotranscrição Tradução B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 GENOMA GENOMA VIRAL: • Vírus: proteína + ácido nucléico • compacto, com poucos nts espaçadores • DNA dupla-fita Vaccinia < 300 genes 187.000 pb SV 40 (Papova) ~ 6 genes 5.226 pb • DNA fita simples Parvovírus 5 genes 5.000 pb • RNA dupla-fita Reovirus 22 23.000 pb • RNA fita simples Influenza 12 13.500 pb B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 Micrografia eletrônica de DNA do bacteriófago lambda B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 GENOMA GENOMA PROCARIÓTICO • DNA circular (raras exceções) dupla-fita Ocupa região chamada nucleóide Ligado à MP • 1 molécula de DNA • Genes estão muito próximos – pouco espaço intergênico • Operon Grupos de genes regulados coordenadamente Transcritos em um único mRNA • Íntrons são raros B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0S a n t o s 2 0 1 0 Diagrama da estrutura do estado funcional do cromossomo de E. coli B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 GENOMA GENOMA PLASMIDIAL: • Geralmente DNA dupla-fita circular • Presente em células procarióticas e raramente em células eucarióticas – leveduras • Apresentam genes de resistência a antibióticos B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 GENOMA GENOMA EUCARIÓTICO NUCLEAR: • DNA dupla-fita linear • Tamanho varia de acordo com a sp • Várias moléculas de DNA; cada sp tem nº característico (humanos = 46) • Genes são segmentos de cromossomos nucleares • Ploidia se refere ao nº de conjuntos cromossômicos Haploidia (n) – 1 conjunto de cromossomos Diploidia (2n) – 2 conjuntos cromossômicos Triploidia (3n) - ... • Em organismos 2n, cromossomos ocorrem aos pares (homólogos) Estruturalmente similares; mesma seqüência de genes B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 GENOMA ORGANELAR GENOMA MITOCONDRIAL: • Extra-nuclear (eucariontes) • DNA dupla-fita circular • Herança materna • Genes que codificam para RNAs e enzimas envolvidos no processo de fosforilação oxidativa • Várias moléculas por mitocôndria GENOMA DE CLOROPLASTOS: • Extra-nuclear • Genes que codificam para RNAs e enzimas envolvidos na fotossíntese B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 GENES GENE: • Segmento completo de DNA necessário para a síntese de um produto gênico funcional (RNA ou proteína) • Inclui mais do que os nts que codificam a seqüência de aminoácidos (aa) de uma proteína ou RNA (→→→→ Região codificante): Região promotora Região amplificadora (enhancer), sítios de processamento em eucariotos B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 GENES Genes procarióticos: B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 GENES Genes eucarióticos: B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 Número de éxons % de genes B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M ar l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 B i o l o g i a M o l e c u l a r B L G 1 0 1 7 M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i M a r l i s e L a d v o c a t B a r t h o l o m e i - - - - S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0 S a n t o s 2 0 1 0
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