Apresentação Gustavo TCC

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Eficácia de métodos de Triagem para seleção quantitativa e qualitativa de bactérias com potencial probiótico para serem utilizadas na criação de Tilápiado-nilo (Oreochromis niloticus) 
Graduando : Gustavo Siromaru Osti
Orientadora: Daniele de C. Dias
Coorientador: Alexandre Queiroz
Curso de Ciencias Biológicas 8° Sem
Consumo per capita: 
9,9 kg em 1960
19,7 kg em 2013
+20,0 kg em 2014 e 2015
+17% em 2025
Figura 1: http://www.bibliotecas.sebrae.com.br/chronus/ARQUIVOS_CHRONUS/bds/bds.nsf/4b14e85d5844cc99cb32040a4980779f/$File/5403.pdf
Figura 2 https://www.google.com.br/search?q=Food+and+agriculture+Food+and+Agriculture+Organization+of+the+United+Nations.+FishstatJ,+2014&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwjNmL2No7TUAhWHvJAKHY0EDsMQ_AUICCgD&biw=1354&bih=583#tbm=isch&q=pescado&imgrc=9j1LdWyNCRXZ0M:
Introdução - Aquicultura Mundial – 2013 a 2015 e projeção para 2025
Consumo per capita: 
9,6 kg em 2013 a 2015
12,7kg em 2025
+32% aumento
Figura 1: http://www.bibliotecas.sebrae.com.br/chronus/ARQUIVOS_CHRONUS/bds/bds.nsf/4b14e85d5844cc99cb32040a4980779f/$File/5403.pdf
Figura 2 https://www.google.com.br/search?q=Food+and+agriculture+Food+and+Agriculture+Organization+of+the+United+Nations.+FishstatJ,+2014&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwjNmL2No7TUAhWHvJAKHY0EDsMQ_AUICCgD&biw=1354&bih=583#tbm=isch&q=pescado&imgrc=9j1LdWyNCRXZ0M:
Introdução - Aquicultura no Brasil – 2013 a 2015 e projeção para 2025
Crescimento mundial: 
2° peixe mais cultivado 
+ 4X última década 
Figura 1: http://www.bibliotecas.sebrae.com.br/chronus/ARQUIVOS_CHRONUS/bds/bds.nsf/4b14e85d5844cc99cb32040a4980779f/$File/5403.pdf
Figura 2 https://www.google.com.br/search?q=Food+and+agriculture+Food+and+Agriculture+Organization+of+the+United+Nations.+FishstatJ,+2014&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwjNmL2No7TUAhWHvJAKHY0EDsMQ_AUICCgD&biw=1354&bih=583#tbm=isch&q=pescado&imgrc=9j1LdWyNCRXZ0M:
Introdução – Tilapicultura Mundial 
Consumo per capita: 
+9,7% em 2015
219mil ton. em 2015
1° peixe mais criado no país
Figura 1: http://www.bibliotecas.sebrae.com.br/chronus/ARQUIVOS_CHRONUS/bds/bds.nsf/4b14e85d5844cc99cb32040a4980779f/$File/5403.pdf
Figura 2 https://www.google.com.br/search?q=Food+and+agriculture+Food+and+Agriculture+Organization+of+the+United+Nations.+FishstatJ,+2014&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwjNmL2No7TUAhWHvJAKHY0EDsMQ_AUICCgD&biw=1354&bih=583#tbm=isch&q=pescado&imgrc=9j1LdWyNCRXZ0M:
Introdução - Tilapicultura no Brasil 
Produção em tanques : escavado e rede
Fig 3 :hhttp://revistagloborural.globo.com/Revista/Common/0,,EMI255147-18289,00-TANQUES+PARA+PISCICULTURA.html
Fig 4: http://www.ebah.com.br/content/ABAAABm9sAA/alimentacao-peixes-tanques-rede
 Nutrição dos peixes
Fig 5: http://iepec.com/piscicultura-e-alternativa-para-aumentar-a-rentabilidade-das-propriedades/
Piscicultura no Brasil
(*sistemas de recirculação)
Organofosforados
Fig 6 Fonte http://www.grupoescolar.com/pesquisa/antibioticos.html
Fig 7 Fonte http://www.pec.biovet.com.br/produto/oxitetraciclina-20-l-a-biovet/20120905151758_V_445
Fig 8 Fonte https://pt.slideshare.net/drmarmolejo318/organofosforados-11992649?ref=
Fig 9 Fonte https://pt.slideshare.net/drmarmolejo318/organofosforados-11992649?ref=
Fig 10 Fonte http://www.educacaopublica.rj.gov.br/biblioteca/quimica/0013.html
 Antibióticos e efluentes químicos
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Fig 11: https://www.google.com.br/search?q=%C3%A1gua+de+m%C3%A1+qualidade+piscicultura&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwiZtKW-trTUAhVFOZAKHZa3AcAQ_AUIBigB&biw=1354&bih=583#imgdii=R4Bo-ymUDTAK3M:&imgrc=bxPOAWLN6HcqqM:
Fig 12: Fonte http://www.acquaimagem.com.br/docs/Pan112_Kubitza.pdf
Sustentabilidade na aquicultura
Conceitos de Probiótico
 Füller (1989)
Figura 13 – Fonte:journal of applied bacteriology
Figura 14 – Fonte: http://www.ellafm.com.br/single-post/2015/07/21/Sa%C3%BAde-intestinal-%C3%A9-o-nosso-tema-de-hoje
“Microorganismo vivo suplemento que afeta beneficamente a saúde do animal hospedeiro, otimizando o equilíbrio e interações microbianas intestinais"
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 Introdução de 
 probióticos na alimentação
 Capacidade de melhoria na saúde do peixe:
 Melhora em aspectos fisiológicos e imunológicos (diminuição de antibióticos)
Aumento nas taxas de reprodução
Desempenho zootécnico
Fig 15 – Fonte : http://tudo.criacaodepeixes.com/suplemento-probioticos-alimentacao-de-peixes/
Objetivos 
 
Objetiva-se com este trabalho selecionar e avaliar de forma quantitativa e qualitativamente eficaz, bactérias isoladas do intestino e muco de tilápia (Oreochromis niloticus) em busca de bactérias com as características de interesse para a aplicação nas criações na forma de suplementos na alimentação dos peixes.
Ser resistente às condições do trato gastrointestinal 
Inibição à patógenos
Ter um grande número viável de
colônias vivas no sistema
Fig 4 – Fonte: http://trampodemicro.wixsite.com/peixesmicrobiologia/single-post/2013/12/01/DIGEST%C3%83O
Estômago
Intestino
Boca
Reto
Cecos Pilóricos
Esôfago
 Avaliação de aptidão de um probiótico 
Fig 16 – Fonte :http://cicascience.blogspot.com.br/2012/06/digestao.html
Fig 18 – Fonte :http://www.mfrural.com.br/detalhe/probiotico-db-aqua-da-imeve-tilapias-camaroes-lagos-226332.aspx
Fig 17 Fonte :http://www.aquarismopaulista.com/tilapia-oreochromis-niloticus/
 Não patogênica 
Adesão ao muco intest.
Crescimento
Material e Métodos
Coleta de amostras em pisciculturas
Fig 22 – Fonte: Microbiologia Tortora 10° ed.
AM
Amostras provenientes de 3 regiões (nordeste,sudeste e sul)
Fig http://www.labm.com/products/transport-swab-amies-clear-plastic-shaft.asp
Fig https://www.ciencor.com.br/catalogo/paginas/criotubos1.htm
Material e Métodos
Teste de resistência ao pH (in vitro)
Diluição seriada até 10⁶
Fig 22 – Fonte: Microbiologia Tortora 10° ed.
Fig 19 – Fonte: Gustavo S. Osti, IP-SP
Fig 21 – Fonte: Gustavo S. Osti, IP-SP
Fig 20 – Fonte: Gustavo S.Osti IP-SP
AM
Método Perelmuter (2008)
modificado
Teste de resistência a bile 
Material e Métodos
Diluição seriada até 10⁶
Fig 25 – Fonte: Mariene M. Natori, IP-SP
Fig 23 – Fonte: Gustavo S. Osti, IP-SP
Fig 24 – Fonte: Gustavo S. Osti, IP-SP
AM
Método Perelmuter (2008)
modificado
Material e Métodos
Teste de inibição à bactérias patogênicas
Halo de inibição medidos por meio de paquímetro
Fig 28 Fonte: https://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwjdj4CIkbLXAhVCC5AKHepXA6UQjRwIBw&url=http%3A%2F%2Fpaquimetro.reguaonline.com%2F&psig=AOvVaw1tPXpUx4Jj8LXyhpU9CXIV&ust=1510338903772474
Fig 25– Fonte: Gustavo S. Osti, IP-SP
Fig 27 – Fonte: Gustavo S. Osti, IP-SP
Fig 26 – Fonte: Gustavo S.Osti IP-SP
Método de Gram et al. (1999)
com modificações 
Ajuste de concentração em 0,500 a 0,700 de absorbância
Poços de 3mm onde o probiótico foi inoculado após prévia incubação da bactéria patogênica
Fig 29 Fonte https://www.microbiologyinpictures.com/bacteria-micrographs/gram-stain/gram-positive/streptococcus-group-b.html
Fig 30 e 31 Fonte http://www.acquaimagem.com.br/docs/Pan107_Kubitza.pdf
Bacteriose: Estreptococose
Streptococcus agalactiae
Fig 32 Fonte https://pt.wikipedia.org/wiki/Aeromonas_hydrophila
Fig 33 Fonte http://www.panoramadaaquicultura.com.br/paginas/Revistas/89/AntecipandoDoencasTilapicultura89.asp
Fig 34 Fonte https://www.researchgate.net/figure/279387374_fig1_Figure-6-6-Extensive-surface-haemorrhaging-on-tilapia-infected-with-Aeromonas-sp
Bacteriose: Septicemia 
Aeromonas hydrophila
 Nódulos no baço e rim cefálico, palidez branquial
 Múltiplos nódulos em todo o rim 
 Múltiplos granulomas em secção histológica
Fig 35 Fonte http://www.aquaculturebrasil.com/2016/03/28/franciselose-o-novo-desafio-sanitario-para-a-tilapicultura-brasileira/
Bacteriose: Franciselose (maior atividade
em clima temperado)
Francisella noatunensis
a
a
b
c
 Exoftalmia
 Nado errático
Emagrecimento
Palidez Branquial
Fig 35 Fonte http://www.aquaculturebrasil.com/2016/03/28/franciselose-o-novo-desafio-sanitario-para-a-tilapicultura-brasileira/
Bacteriose: Franciselose (maior atividade em clima temperado)
Francisella noatunensis
a
Sintomas iniciais
Resultados
Gráfico 1: Avaliação dos resultados da seleção de bactérias 
De 1402 amostras: 
202 foram testadas;
37 foram aprovadas nos testes de pH e bile;
12 foram aprovadas na inibição às patogênicas;
3 bactérias identificadas por sequenciamento gênico
Teste de pH mostrou maior fator de seletividade.
Bactérias probióticas identificadas
Amostra
Bactéria
Probabilidade
Halo de inibição
Bactéria patogênica
Cepa nº 15036 B
>350µg/mL
300µg/mL
250µg/mL
250µg/mL
Bacillustequilensis
 
99%
 
04,00 mm
 
Aeromonashydrophila 
Cepa nº 15037A
Enterococcushirae
98%
04,00 mm
Francisellanoatunensis
Cepa nº 15037 F
Enterococcushiraeou
Enterococcusfaecium
99%/97%
05,00mm
Francisellanoatunensis
Resultados
Fig 36 Fonte Gustavo S.Osti 
Discussão 
*Uso de bactérias ácido-láticas (BAL)
Conclusão
As metodologias adotadas se mostraram eficazes na seleção e triagem de bactérias probióticas , qualitativamente ao identificar ao menos 3 bactérias probióticas e quantitativamente ao identificar um fator de seletividade em testes de resistência ao ph proporcionando a triagem de grande quantidade de amostras , otimizando assim tempo e custos nos experimentos. 
FIM
Muito Obrigado a todos !!! Dou por encerrada minha participação ! 
AGRADECIMENTOS
Dra. Danielle de Carla Dias
Dra.Mariene M.Natori/Pamela Garbim
Dr. Leonardo Tachibana
 e toda a equipe .
 
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