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1. Princípio do Teste
	Os reagentes causam aglutinação direta macroscópica das hemácias que carregam os antígenos correspondentes.
	As hemácias possuidoras do antígeno A se aglutinam quando misturadas ao reagente Anti-A; igualmente, hemácias possuidoras do antígeno B se aglutinam na presença do reagente Anti-B.
	
2. Aplicação Clínica
Determinação do tipo sanguíneo pelo sistema ABO, importante para doações e compatibilidade materno-infantil, transfusões de sangue, testes de paternidade e transplantes.
	
3. Amostra
	Não há necessidade de qualquer preparação prévia do paciente ou doador para a coleta do material. O sangue deve ser coletado através de técnica asséptica, com anticoagulante (EDTA, heparina ou citrato).
Preparar a suspensão de hemácias a 3-5% em solução salina isotônica com a seguinte técnica:
Dispensar 0,5 mL de salina isotônica no tubo de suspensões.
Pipetar 25 µL de concentrado de hemácias ou 50 µL (1 gota) de sangue total; homogeneizar.
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4. Padrões, Controles, Reagentes, Insumos
Anticorpos monoclonais Anti-A;
Anticorpos monoclonais Anti-B;
Solução salina isotônica 0,9%;
Tubos para suspensão; 
Suporte para tubos;
Pipetas;
Lâminas.
5. Equipamentos
Centrífuga de imuno-hematologia;
Aglutinoscópio.
6. Procedimento Detalhado
6.1Teste em Lâmina
1. Identificar 2 lâminas como A e B e com o nome ou número do doador ou paciente.
2. Pipetar 50 µL (1 gota) do Anti-A e Anti-B nas respectivas lâminas.
3. Pipetar 50 µL (1 gota) da suspensão de hemácias à 3-5% em cada lâmina.
4. Homogeneizar o reagente com a suspensão de hemácias em uma área de 2x3 cm. Movimentar gentilmente a lâmina para promover a mistura e examinar a presença ou não de aglutinação macroscópica. Aglutinação se inicia em poucos segundos. Não observar a lâmina por mais de dois minutos quando não houver aglutinação.
6.2 Teste em Tubo
1. Identificar 2 tubos como A e B e com o nome ou número do doador ou paciente.
2. Pipetar 50 µL (1 gota) do Anti-A e Anti-B nos respectivos tubos.
3. Pipetar 50 µL (1 gota) da suspensão de hemácias à 3-5% em cada tubo.
4. Homogeneizar.
5. Centrifugar por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400 rpm.
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6. Ressuspender suavemente as suspensões de hemácias e observar a aglutinação macroscópica.
Tubos com reações negativas: centrifugar e fazer leitura novamente após 5 minutos afim de detectar antígenos fracos.
7. Cálculos
	Não aplicável.
8. Controle de Qualidade
	Testar em paralelo, amostras conhecidas, positivas e negativas, para assegurar a validade do teste.
9. Valores de Referência, Interpretação, Valores Críticos
	Positivo: presença de aglutinação; representa reação entre o anticorpo e as hemácias, indicando assim a presença do antígeno correspondente.
	Negativo: sem aglutinação macroscópica; indica ausência de reação entre o anticorpo e as hemácias, indicando a ausência do antígeno correspondente.
	Anti-A
	Anti-B
	Grupo Sanguíneo
	+
	-
	A
	-
	+
	B
	+
	+
	AB
	-
	-
	O
10. Linearidade e Limite de Detecção
	Não aplicável.
11. Limitações do Método
	Bactérias ou outras formas de contaminação do material utilizado podem causar reações falso-positivas ou falso-negativas.
	
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É essencial que os procedimentos e a utilização dos equipamentos sejam rigorosamente observados. Os equipamentos devem ser periodicamente checados e controlados de acordo com as normas BPL (Boas Práticas de Laboratório).
	Suspensões de hemácias muito concentradas ou muito diluídas podem causar falsos resultados.
	Resultado falso-negativo ou reações fracamente positivas podem ocorrer com amostras de sangue de subgrupos A e B ou após estocagem prolongada.
Resultado falso-positivo pode ocorrer com hemácias colhidas do cordão recém-nascidas.
12. Referências Bibliográficas
Bula Kit. Anti-A, Anti-B, Anti-AB: monoclonal murino IgM. São Paulo: Prothemo Produtos Hemoterápicos Ltda, 2006.
Bula Kit. DiaClon Anti-A (ABO1), DiaClon Anti-B (ABO2), DiaClon Anti-AB (ABO3): anticorpos monoclonais IgM, para teste em tubo para classificação ABO. Lagoa Santa – MG: DiaMed Latino América S. A.
Laboratório Criesp medicina Diagnóstica. Disponível em: www.criesp.com.br. Acesso em: 24/04/2008.
Laboratório Álvaro. Disponível em: www.alvaro.com.br. Acesso em: 14/06/2012.
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Código
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TIPAGEM SANGÜÍNEA ABO
INSTRUÇÃO DE TRABALHO
Nome: 
Cargo: Farmacêutica Bioquímica
Elaboração
Aprovação e 
Liberação
Visto:
Visto:
Data: 30/04/2008
Data: 28/04/2008
Nome: 
Cargo: Farmacêutica Bioquímica
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