A 1 - Aula prática Lei de lambert beer

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AULA
	Aula Prática – Bioquímica Aplicada
	Data ___/___/____
	01
	Tema: Lei de Lambert-Beer
	Prof. Fernando Borges Araújo
1. Implicação teórica
	O termo espectro foi utilizado inicialmente por Newton, quando este descobriu que a luz branca, ao atravessar um prisma, é dividida em várias cores. A luz é, portanto, definida como uma forma de energia eletromagnética, formada por ondas que apresentam comprimentos diferentes. O comprimento de onda (λ) é medido em nm onde 1,0 nm equivale a 10-9 m. A tabela abaixo mostra as regiões do espectro em relação ao comprimento de onda:
	REGIÃO
	(λ) EM nm:
	Raios X
	0,1-100
	Ultravioleta 
	100-400
	Visível 
	400-800
	Infravermelho
	800-5000
	Microonda
	5000-30000
	O princípio básico da fotometria é baseado no fato de que: partículas dispersas ou dissolvidas em uma solução interferem seletivamente com um raio de luz que passa através desta solução. Esta interferência depende dos seguintes fatores:
a) cor do composto ou do tipo de ligação química presente;
b) tamanho da partícula;
c) transparência da solução;
d) combinação dos fatores acima.
	Deste modo, as partículas podem absorver e transmitir parte do espectro, dependendo da sua concentração, da sua natureza química e/ou da sua cor. Se pudermos medir o total de luz que incide (Io ) sobre a solução de uma determinada substância e o total da luz transmitida (It), podemos avaliar o quanto a substância absorveu (absorvância: A). Transmissão = It / Io (luz transmitida / luz incidente): 
	A = log 1/T
	A absorvância é, desta forma, medida em uma escala de 0 (log 1/1) a infinito (log 1/0). A relação da A com a concentração da substância pode ser compreendida pelas Leis de Lambert-Beer: a absorvância de uma solução é proporcional à concentração da substância na solução e à distância percorrida pelo feixe luminoso que atravessa a solução (caminho óptico): A = (. l.c, onde: (= coeficiente extinção molar, que é constante para cada substância, e definido como a absovância (A) de uma solução l molar da substância em um determinado comprimento de onda (λ), numa cubeta de caminho óptico l = l cm (largura da cubeta) e c = à concentração da solução.
2. Objetivos
	• Determinar o espectro de absorção de uma solução de permanganato de potássio;
	• Caracterizar o comprimento de onda (λ) onde ocorre a absorção máxima;
	• Construir uma curva padrão do permanganato de potássio;
3. Procedimento Operacional	
3.1 Reagentes
	Solução de KMnO4 3 mg /100 mL.
 3.2 Procedimentos gerais de ajuste do fotômetro
1) Ligar o aparelho;
Selecionar o comprimento de onda adequado.
Ajustar o zero de transmitância;
Introduzir a cubeta com o branco (água destilada) e
ajustar a 100% de transmitância, no botão
correspondente;
Repetir os ajustes acima.
3.3 Obtenção do espectro de absorção:
Ajustar o comprimento de onda inicialmente em 450 nm;
Ajustar o 100% de transmitância com o branco. Isto coincide com o 0 de absovância;
Colocar a cubeta com a solução de permanganato de potássio à concentração de 3 mg/100 mL;
Ler a absorvância e registrá-la;
Ajustar o λa 490 nm, repetir o ajuste do branco,
recolocar a solução de Permanganato e ler, novamente, a absorvância correspondente a este λ;
Repetir estas operações para os seguintes valores de λ: 530, 570 e 610;
Fazer o gráfico do espectro de absorção do Permanganato em papel milimetrado, relacionando absorvância (ordenada) contra  λ (abcissa);
Determinar o λ de absorção máxima;
3.4 Curva Padrão – Obtenção
Ler as absorvâncias das diferentes soluções de permanganato (λ: Melhor absorção) e registrá-las;
Construir, em papel milimetrado, a curva padrão (absorvâncias na ordenada e concentrações na abcissa), considerando os pontos zero de absorção e de concentração.
	Concentração deKMnO4
(mg/100mL)
	Absorvânci
	3
	
	2
	
	1,5
	
	1,0
	
	0,75
	
	0,5