IC Testes sorologicos

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Testes 
sorológicos 
Acs 
monoclonais 
 Quantidade de 
Acs homogêneos 
e totalmente 
caracterizáveis 
Pesquisa de Ags, 
hormônios, fármacos 
Testes sorológicos 
Estrutura de 
componentes 
antigênicos 
Ags 
importantes 
para detecção 
de Acs 
Produzidos 
em larga 
escala 
 
Especificidade 
na pesquisa de 
Acs 
Testes sorológicos 
•  Sensibilidade 
•  Confiabilidade 
• Testes mais rápidos e simples 
• Adaptáveis à automomação 
• Ensaios point-of-care 
• Métodos multiparamétricos 
 
Aperfeiçoamento e 
consolidação dos 
testes existentes e 
emprego de 
tecnologias 
emergentes 
Teste diagnóstico 
Fatores que interferem na ligação Ag-Ac 
Afinidade 
Avidez 
Fatores que interferem na ligação Ag-Ac 
• Concentração dos anticorpos 
• equilíbrio entre concentração de Ag e Ac 
• pH do meio de reação 
• Temperatura de reação 
• Tempo de reação 
Fatores que interferem na ligação Ag-Ac 
Fatores que interferem na ligação Ag-Ac 
• Ph ácido = desfaz a reação 
Ph do meio da 
reação 
•  Temp = reação + rápida 
• Cuidado com a desnaturaçaõ dos 
componentes 
• Reações com complemento: baixa Temp 
Temperatura da 
reação 
•  Tempo =  força de ligação Ag-Ac 
•  Chance de um resultado positivo 
• Minutos, horas – depende da 
quantidade de reagentes 
Tempo de reação 
Título 
Máxima diluição na qual um teste continua dando reação positiva 
Título 
• Soro deu um título de 1:5000 para toxoplasmose 
• significa que mesmo diluindo-se a amostra 5000 vezes, a 
reação continua positiva. 
 
• Uma mesma amostra pode ter título de 1:100 em um tipo de 
teste (por exemplo no teste de precipitação) e título de 1:10.000 
em outro teste (por exemplo ELISA). 
• Isso dependerá do limiar de detecção de cada ensaio. 
• Ensaios com reagentes não marcados 
• Princípio da precipitação 
•  Sensibilidade 
• Grandes complexos Ag-Ac 
• Ensaios com reagentes marcados 
• Amplificação do sinal 
•  Sensibilidade 
• Marcadores: radioativos, enzimáticos, 
fluorescestes e quimioluninescentes 
Testes sorológicos 
Aglutinação 
• Formação de agregados visíveis: interação Ac-determinantes 
antigênicos 
Teste de aglutinação direta 
• Utiliza partículas antigências íntegras ou fragmentadas 
• Hemácias 
• Bactérias 
• Fungos 
• Protozoários 
Teste de aglutinação direta 
• Detecção de Ac específico 
• Diluições seriadas do Ac 
• Quantidade constante do Ag 
• Incubação: 
• Aglutinação se completa 
• Resultado expresso como o título do antissoro 
(o inverso da máxima diluição em que ocorre a aglutinação) 
Teste de aglutinação direta 
Teste de inibição de 
hemaglutinação direta 
• Base do teste: 
• Capacidade de certos Ags virais espontaneamente aglutinar 
certos tipos de hemácias 
• Acs presentes na amostra revestem as partículas virais 
• Inibe a aglutinação – teste positivo para presença de Acs 
• Não distingue IgM e IgG 
• Acs contra: rubéola, sarampo, influenza e certos enterovírus 
Teste de aglutinação passiva ou 
indireta 
• Hemácias ou partículas inertes (látex, bentonita, etc) 
• Sensibilizadas por: 
• Adsorção passiva – contato direto com os Ags solúveis 
• Adsorção via agentes químicos (ácido tânico e cloreto de 
cromo) 
• Conjungação do Ag por meio de ligações químicas 
covalentes 
 
• Aplicação do teste bastante variada 
• Diversidade de Ags 
Teste da aglutinação passiva 
Teste de hemaglutinação 
passiva 
• Hemácias tratadas com ácido tânico: adsorvem proteínas 
• Diversos Ags se ligam à superfície da hemácia 
• Células podem ser aglutinadas por Acs epecíficos 
• Testes em placas: permite a determinação direta do ponto final da 
reação 
• São de fácil obtenção: hemácias de carneiro ou humanas grupo O 
• Estocadas por longo período 
Teste de hemaglutinação 
passiva 
• Positivo: formação de um tapete cobrindo o fundo da cavidade 
• Negativo: fromação de um “botão” compacto 
• IgM 
• IgG 
• 0,01μg/ml 
• Trypanossoma cruzi 
• Treponema pallidum 
• Toxoplasma gondii 
Teste de inibição de 
hemaglutinação passiva 
• Sensível e específico para detecção de pequenas qdes: 
• Ags solúveis 
• Haptenos 
• molécula de baixo peso molecular 
• reconhecida por Ac 
• Não imunogênica 
• Ac 
• Competem com a substância homóloga com que a hemácia foi 
sensibilizada 
Teste de inibição de 
hemaglutinação passiva 
• Requer pequenas qdes de reagentes 
• Detecta Ag na ordem de 0,1 a 10μg/ml 
•  especificidade 
• Pode ser utilizado em sistemas em que Ags solúveis ainda não 
foram obtidos 
• Hepatite e hemofilia 
Teste de aglutinação em látex 
• Base de sistemas comerciais 
• Qualitativos 
• Quantitativos 
• Automatizados 
 
• Partículas de látex 
• Esferas de poliestireno 
• Utilizadas como suporte de adsorção de proteína solúvel e 
Ags polissacarídicos 
• Sitema de indicação da reação Ag-Ac 
Pesquisa de Ag ou Ac 
Teste de aglutinação em látex 
Aplicações: 
• Detecção do fator reumatóide (autoanticorpo à porção Fc de IgG) 
• Doenças autoimunes 
• Processos agudos ou crônicos 
• Doenças reumáticas, infecciosas, degenerativas 
 
• Detecção de Ags polissacarídicos bacterianos 
• Estreptococos do grupo B 
• Soro, urina, liquor 
 
Teste de aglutinação em látex 
Aplicações: 
• Detecção de fármacos, hormônios, proteínas, Acs 
• β-gonodotrofina coriônica humana 
• Acs na rubéola 
• Proteína C 
Teste de floculação 
Teste VDRL (venereal disease research laboratory) 
• Cristais de colesterol sensibilizados com lecitina e cardiolipina 
• Pesquisa de Acs na sífilis 
• Detecta Acs antilipídicos formados pelo hospedeiro em 
resposta ao material de natureza lipídica 
• Liberado por células lesadas no início da infecção 
• Do próprio treponema 
Ensaio de neutralização de 
hemólise 
• Estreptococos beta-hemolíticos do grupo A 
• Toxinas extracelulares 
• estimulam procução de Ac 
• Lisam hemácias (hemolisinas) 
• Pesquisa de antiestreptolisina O – Teste ASLO 
Ensaio de neutralização de 
hemólise 
Soro 
paciente 
Hemolisina 
específica 
Adiciona 
hemácias 
do grupo O 
Positivo 
Hemácias não 
lisam 
Negativo 
Hemácias lisam 
1ª Etapa 2ª Etapa 
Imunodifusão 
• Difusão de uma substância solúvel em meio fluido 
 
• Detecta reação Ag-Ac por meio da formação de precipitado 
 
• Pode ser: 
• Simples – Ag ou Ac pemanecem fixados ao suporte 
enquanto o outro de difunde 
• Dupla – Ag e Ac se movem 
Reação de precipitação 
OUCHTERLONY 
Imunodifusão dulpla de 
OUCHTERLONY 
Determinanates 
antigênicos idênticos 
Determinanates antigênicos 
identidade parcial 
Determinanates antigênicos 
não relacionados 
Reação de precipitação - 
MANCINI 
Imunodifusão radial de 
MANCINI 
Teste de imunofluorescência 
• Pesquisa de Acs 
• Pesquisa de microrganismos e seus componentes em espécimes 
clínicos 
Ac fluorocromos 
Ligação 
covalente 
Substâncias que 
apresentam o 
fenômeno da 
fluorescência 
Teste de imunofluorescência 
Fluorocromos 
• Isotiocianato de fluoresceína 
• Lisamina-rodamina B 
• Vermelho Texa 
• Ficoeritrina 
• Ácido dimetil naftalenossulfônico 
• Isotiocianato de tetrametilrodamina 
 
Teste de imunofluorescência 
Teste de imunofluorescência 
Teste de imunofluorescência 
Técnicas com marcadores 
radioativos 
Radioimunoensaio 
• Método muito sensível – detecção Ag-Ac 
• Quantificação: hormônios, fármacos, substânciasilícitas, 
marcadores tumorais, alergênios e Acs associados à alergia 
• Ag e Ac associados à infecção viral 
Técnicas com marcadores 
radioativos 
Técnica imunoenzimática 
Ag ou Ac marcados com enzimas 
• Permitem a detecção, titulação e quantificação de substâncias 
• Diversos métodos: 
• Localização de constituintes celulares 
• Medidade pequenas qdes de Ags, haptenos e Acs 
• Detecção de imunoprecipitados 
Técnica imunoenzimática 
• Método quantitativo 
• Reação Ag-Ac monitorada pela medida da atividade enzimática 
• Elevada sensibilidade 
• Utiliza reagentes estáveis 
• Testes simples ou automáticos 
Técnica imunoenzimática 
Enzima 
• Alta especifidade 
• Produto da reação enzimática estável 
• Fácil de quantificar 
• Ser estável 
• Ser facilment conjugada a vários Ags, Acs e haptenos 
• Peroxidase / Fosfatase alcalina 
Técnica imunoenzimática 
ELISA 
 
Enzyme-linked 
 Immunosorbent Assay 
Técnica imunoenzimática 
Método indireto 
Técnica imunoenzimática 
Método captura ou sanduíche 
Técnica imunoenzimática 
Captura para IgM 
 Ensaio imunocromatográfico 
• Soro diluído: pesquisa de Ac 
• Soro, sangue, saliva, urina ou fezes: pesquisa de Ags 
 Ensaio imunocromatográfico 
 Western blotting 
• Identifica proteínas e glicoproteínas 
• Proteínas separadas de acordo com o tamanho 
• Método qualitativo 
• Pesquisa de Ags ou Acs 
• Doenças infecciosas 
 Western blotting