dosagem de triacilglicerol

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Título da aula prática: Dosagem de TGC
Professora: Juliana
2. Introdução	
Os triacilgliceróis são lipídios formados pela ligação de 3 moléculas de ácidos graxos com o glicerol, um triálcool de 3 carbonos, através de ligações do tipo éster. São absolutamente hidrofóbicos, sendo também chamados de "gorduras neutras" ou triglicerídeos. Os ácidos graxos que participam da estrutura de um triacilglicerol são geralmente diferentes entre si.
A principal função dos triacilgliceróis é a de reserva de energia, e são armazenados nas células do tecido adiposo, principalmente. São armazenados em uma forma desidratada quase pura, e fornecem por grama aproximadamente o dobro da energia fornecida por carboidratos.
A molécula de triacilglicerol (TAG – três moléculas de ácidos graxos associados a uma molécula de glicerol) representa a forma como a gordura é estocada. Em seres humanos, a maior parte do TAG está armazenada no tecido adiposo (~9 a 15kg em um homem adulto pesando ~70kg), mas este também está presente em pequenas quantidades no plasma e no músculo esquelético(KLEIN, 2000).
3. Parte Experimental 
Na parte experimental foram usados os seguintes instrumentos: Três tubos de ensaio, o primeiro identificado como “B” (branco), o segundo identificado como “T” (teste) e o terceiro identificado como “P”(padrão). Também utilizou se pipeta, ponteiras descartáveis, espectrofotômetro, cubeta, beckers (para descarte das ponteiras), Banho-maria , reagente de cor (contendo tampão 50 mmol, pH 7,0, fenol 24,0 mmol/L, colato de sódio 500 (mol/L, azida sódica 15 mmol/L, 4 aminoantipirina 500 (mol/L, lipoproteína lipase (250 U/L, glicerol 3- peroxidase (250 U/L e peroxidase (1000 U/L.), solução padrão contendo 200mg/dL de triacilglicerol e para análise soro sanguíneo (JEJUM DE 12-14 HORAS, REFEIÇÃO LEVE DIA ANTERIOR E NÃO INGERIR BEBIDA ALCOOLICA AO MENOS 48HORAS ANTES DA COLETA).
Procedimento: No tubo “B” foram pipetados 2,0ml de reagente de cor, no tubo “T” 20 μl da amostra e 2,0ml do reagente de cor e, por fim, no tudo “P” 2,0ml de reagente de cor e 20 μl da solução padrão contendo 200mg/dL de tracilglicerol (Após a dosagem todos tubos foram homogenizados).
	TUBO
	REAGENTE DE COR
	AMOSTRA
	SOLUÇÃO PADRÃO
	B
	2,0 ml
	-
	-
	T
	2,0ml
	20 μl
	-
	P
	2,0ml
	-
	20 μl
 
Após a pipetagem os tubos foram levados ao banho-maria a 37º C por 10 minutos, em seguida foram levados para leitura no espectrofotômetro a 505nm primeiramente o conteúdo do tubo “B” foi colocado na cubeta e zerado. O segundo conteúdo a ser medido foi o mais claro visualmente tubo “T” que o valor registrado foi 0,164 nm e por ultimo o tubo “P” que registrou 0,227nm.
	TUBO
	LEITURA NO ESPECTROFOTÔMETRO
	B
	ZERADO
	P
	0,227nm
	T
	0,164nm
4. Resultados e Discussão
Os resultados obtidos no espectrofotômetro foram utilizados para se chegar ao resultado final do tubo “T” (teste) da seguinte maneira: 
[P] = 200 mg/dL
 Absorbância do teste (0,227)
 Colesterol mg/dL = 				 x 200
 Absorbância do padrão (0,164)
 [T] mg/dL = 144mg/dL de triacilglicerol.
Esse resultado só possível através das reações enzimáticas contidas no reagente de cor que realizam o seguinte mecanismo:
 
a) Triacilglicerol Glicerol + Ácidos Graxos
 Colesterol esterase 
	
b) Glicerol 3.P + O2 Dihidroxiacetona + H2O2
 Colesterol oxidase
c) 2H2O2 + 4-AAP + Crolafeonol Produto Corado 
 Peroxidase
 
O método aplicado na dosagem realizada foi o de Beer, em que se analisa a luz incida sobre as amostras presentes no espectrofotômetro onde o conhecimento da absorção de luz pela matéria é a forma mais usual de determinar a concentração de compostos presentes em solução. A maioria dos métodos utilizados em bioquímica clínica envolve a determinação espectrofotométrica de compostos corados (cromóforo) obtidos pela reação entre o composto a ser analisado e o reagente (reagente cromogênico), originando um produto colorido.
Os métodos que se baseiam nesse princípio são denominados métodos colorimétricos, os quais geralmente são específicos e muito sensíveis. A grande vantagem em utilizar compostos coloridos deve-se ao fato de eles absorverem luz visível (região visível do espectro eletromagnético).A espectrofotometria portanto, é a medida de absorção ou transmissão de luz que vem a ser uma das mais valiosas técnicas analíticas amplamente utilizadas em laboratórios de área básica, bem como em análises clínicas. Por meio da espectrofotometria, componentes desconhecidos de uma solução podem ser identificados por seus espectros característicos ao ultravioleta, visível, ou infravermelho.
Quando um feixe de luz monocromática atravessa uma solução com moléculas absorventes, parte da luz é absorvida pela solução e o restante é transmitido. A absorção de luz depende basicamente da concentração das moléculas absorventes e da espessura da solução indicando se a concentração da solução é maior ou menor.
5. Conclusões
	Hoje em dia na prática clínica e laboratorial é solicitado o perfil lipídico do pacientes para a prevenção de várias patologias relacionadas principalmente a disfunções cardíacas. riglicerídeos são formados pela combinação de glicerol com três moléculas de ácido gordo. Álcoois possuem grupo hidroxilo e se unem para formas esteres. A molécula de glicerol tem três hidroxilo (HO-).Os comprimentos das cadeias dos ácidos gordos variam de maneira natural, A maioria contém entre 16-20 átomos de carbonos. Os naturais são encontrados em plantas e animais, compostos por apenas números pares de átomos de carbono, o que reflete a via para a biossíntese a partir de dois carbonos de blocos de construção.
As enzimas lipases pancreáticas atuam com a ligação éster. Na forma de triglicérides, os lipídeos não podem ser absorvidos pelo duodeno. Ácidos gordos, monoglicéridos e alguns diglicéridos absorvidos por duodeno se os triglicerídeos forem quebrados. No intestino, após a secreção de lipases e biliares, os triglicerídeos são divididos em ácidos gordos livres em processo chamado de lipólise, movido para absorção de células que revestem o intestino. Os triglicerídeos são reconstruídos nos fragmentos e embalados em conjunto com o colesterol e proteínas para formar quilomícrons. Estes são excretados pelas células, recolhidas pelo sistema linfático e transportadas para os grandes vasos perto do coração antes de ser misturado com o sangue.
Vários tecidos podem capturar quilomícrons libertando triglicerídeos para serem usados em fonte de energia. Gordura e células do fígado podem sintetizar e armazenar. Quando o corpo necessita de ácidos gordos como fonte de energia, a hormona glucagon sinaliza o colapso dos triglicerídeos para acontecer à liberação. À medida que o cérebro não pode utilizar ácidos gordos como fonte de energia, o componente glicerol de triglicerídeos pode ser convertido em glicose, via glicólise por conversão em fosfato. As células de gordura também podem ser divididas caso as necessidades do cérebro superem o corpo. Triglicerídeos não podem passar de maneira livre através das membranas celulares. Enzimas especiais nas paredes dos vasos sanguíneos, chamadas lipases de lipoproteína, devem quebrar triglicerídeos em ácidos graxos e glicerol. Podem ser absorvidas por células através do transportador de ácidos gordos (FAT). Triglicerídeos, como principais componentes de muito baixa densidade de lipoproteína (VLDL) e quilomícrons, desempenham papel importante no metabolismo, como fontes de energia e transportadores de gordura na dieta. Eles contêm mais do que o dobro da energia, como os hidratos de carbono.
6. Bibliografia
 
Colesterol e Triglicerideos(http://www.labpasteur.med.br/clientes/artigo/colesterol-e-triglicerides).
Lenhinger, Albert Lester; Princípios de Bioquímica.3.ed. Guanabara Koogan, Rio de Janeiro:1992. cp.3.
Fundamentos de Química Analítica - West, Donald M.; Holler, F. James; Skoog, Douglas A.
Práticas de Laboratório de Bioquímica e Biofísica, Guanabara Koogan, Compri-Nardy M., Stella M.B., Oliveira C. (2009), 200 págs.
Relatórios de aula Prática das disciplinas do Departamento de Biofísica, IBIO, Ufrgs.
Triglicerídeos características (http://www.culturamix.com/saude/doencas/triacilglicerois-caracteristicas-gerais/)
Transporte de lipídeos (http://bioquimicadanutricao.blogspot.com.br/2011/06/transporte-de-lipidios.html)
Lipideos (http://www.dbm.ufpb.br/DBM_bioquimica_monitoria.htm)