Coloração de Gram

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Lauana Almeida Monteiro 
Biomédica 
 
 
COLORAÇÃO DE GRAM 
Disse meu professor na primeira aula de microbiologia “GRAM É O 
CARRO CHEFE DA BACTERIOLOGIA” e depois de algumas aulas consegui 
entender o motivo. Em 1884, um médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim 
Gram, observou que as bactérias adquiriram coloração diferente de acordo 
com o corante que eram tratadas e isso permitiu que ele as classificasse como 
Gram positiva (coloração roxa) e Gram negativas (coloração rosa/vermelhas), 
durante os anos a técnica de coloração usada por Gram sofreu algumas 
modificações até chegar na que é utilizada nos dias de hoje. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Essa técnica classifica as bactérias com base na morfologia e nas 
diferenças de composição da parede celular, as Gram-positivas possuem uma 
espessa camada de peptideoglicano e ácido teicóico, e as Gram-negativas, 
uma fina camada de peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada 
composta por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos. 
A importância da técnica serve para um diagnóstico rápido e o 
monitoramento de infecções até o diagnostico final. É uma técnica simples e de 
baixo custo que segue o protocolo que padroniza essa coloração e pode sofrer 
algumas variações de acordo com o laboratório ou profissional que a utiliza. 
Procedimentos 
Preparo do esfregaço: 
 
a- Pegar uma lâmina limpa no recipiente, secar e flambar rapidamente na 
chama do bico de Bunsen; 
 
b- Identificar o lado da lâmina onde será feito o esfregaço; 
 
c- Flambar a alça bacteriológica deixá-la esfriar e colocar na lâmina uma gota 
de solução salina fisiológica; 
 
d- Flambar a agulha bacteriológica, deixar esfriar próximo a chama, abrir a 
placa com a cultura teste e tocar a colônia escolhida para retirada da amostra; 
 
e- Esfregar o material com movimentos de rotação da alça bacteriológica, 
para se obter um esfregaço de forma oval, bem fino e uniforme; 
 
f- Deixar secar nas proximidades da chama; 
 
g- Fixar o esfregaço passando a lâmina (lado oposto ao esfregaço) 5 vezes 
na chama do bico de Bunsen (rapidamente). 
 
Esfregaço amostra de fezes: 
a- Colocar uma gota de solução fisiológica em uma lâmina e emulsionar uma 
pequena amostra de fezes sobra a gota; 
b- Deixar secar perto do bico de Bunsen ou dentro da cabine de segurança e 
fixar no calor antes de corar. 
 
Método de Coloração de Gram: 
 
1) Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo), aguardar um 
minuto; 
 
2) Lavar rapidamente em água destilada; 
 
3) Cobrir a lâmina com solução de Iugol (mordente) por um minuto; 
4) Lavar em água destilada; 
 
5), Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona ou álcool absoluto (cerca 
de 15 segundos). Lavar a lâmina rapidamente em água destilada; 
 
6) Cobrir com fucsina de gram e aguardar 30 segundos; 
 
7) Lavar a lâmina em água destilada e secar (sem esfregar); 
 
8) Colocar uma gota de óleo de cedro sobre a lâmina e observar em objetiva 
de imersão (IOOX). 
 
 
 
 
 
 
RESULTADO: 
 
bactérias Gram-positivas: roxo 
bactérias Gram-negativas: rosa/vermelho 
 
 
 
Referencias: 
OPLUSTIL, Carmen Paz; ZOCCOLI, Cássia Maria; BARBERINO, Maria Goreth 
M. de A. Microbiologia Clínica:156 Perguntas e Respostas. São Paulo, Sarvier, 
2012. 
OPLUSTIL, Carmen Paz; et al (Org.). Procedimentos Básicos 
em Microbiologia Clínica. 3 ed. São Paulo, Sarvier. 2010.