Marcadores Organelle

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01/03/2018 Marcadores Organelle
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Resumo
Resumo de Inglês
Proteína Nome completo Número
de
acesso
Uniprot
ID do
gene
Não. Os 3
principais
fornecedores
Golgi
GM130 Subfamília Golgin Um membro 2(Membro 2 da família A de Golgin)
Q08379 2801 46
BD
Biosciences
(39), Abcam
(2), Enzo Life
Sciences (1)
TGN38
proteína de membrana integral da rede
Trans-Golgi 2 (proteína de membrana
integral 2 da rede trans golgi)
O43493 10618 15
AbD Serotec
(Bio-Rad) (7),
BD
Biosciences
(6), EMD
Millipore (1)
RCAS1
antígeno de câncer de ligação ao
receptor expresso em células SiSo
(antígeno cancerígeno que se liga ao
receptor expresso em células SiSo)
O00559 9166 5
MBL
International
(3), EMD
Millipore (1)
alfa-manosidase 2 (alfa manosidase 2) Q16706 4124 4
BioLegend (2),
EMD Millipore
(2)
Sintaxina 6 (sintaxina 6) O43752 10228 3
Biosciências
BD (3)
FTCD formimidoyltransferase-cyclodeaminase(formimidoiltransferasa-ciclodeaminasa) O95954 10841
b4Gal beta1,4-galactosyltransferase 6 (beta1,4-galactosiltransferasa 6) Q9UBX8 9331 1
DOI //dx.doi.org/10.13070/mm.es.3.181
Data Data: 2016-10-14; versão original: 2013-03-24
Cite como MATER METHODS é 2013; 3: 181
Marcadores Organelle
Nikos Parisis (nnparisis at gmail dot com)
Instituto Nacional de Pesquisa Agrícola, Montpellier, França
Tradutor
Agustin Carbajal (quiocarbajal at gmail dot com)
Córdoba, Argentina
Uma compilação exaustiva em marcadores de organelas.
Uma compilação abrangente de marcadores de organelas.
As células não são simplesmente sacos de protoplasma. Eles contêm várias organelas e estruturas,
cada uma com funções específicas. Para uma caracterização de uma organela e sua composição, sua
purificação é geralmente um requisito. Além disso, a caracterização de uma nova proteína requer
conhecimento de sua localização. O uso de outras proteínas de referência cuja localização está bem
estabelecida (marcadores) é uma estratégia útil. Nesta revisão, são discutidas estas proteínas
utilizadas como marcadores de organelas em imunofluorescências e imunotransferências. Na segunda
parte desta revisão, são descritos vários métodos para o fracionamento subcelular e a purificação de
organelas.
Marcadores
de Golgi
As
principais
funções
do
aparelho
de Golgi
são o
home > materiais e métodos > marcadores de organelas
 pesquisa
01/03/2018 Marcadores Organelle
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Mitocondria
AIF apoptosis-inducing factor (factor deinducción de apoptosis) O95831 9131 7
EMD Millipore
(3), Santa Cruz
Biotechnology
(2), Epitomics
(2)
COX
cytochrome c oxidase subunit 1
(subunidad 1 de la oxidasa de citocromo
c)
P00395 4512 5
EMD Millipore
(1), Thermo
Scientific (1),
Abcam (1)
VDAC1
outer mitochondrial membrane protein
porin 1 (proteína de membrana
mitocondrial externa porina 1)
P21796 7416 2
EMD Millipore
(1), Thermo
Scientific (1)
CPS1 carbamoyl-phosphate synthase(carbamoil-fosfato sintasa) P31327 1373 1 Abcam (1)
prohibitin (prohibitina) P35232 5245 1 ThermoScientific (1)
hexokinase-1 (hexoquinasa 1) P19367 3098
Cromatina
histone H3.1 (histona H3.1) P68431 8968 35
EMD Millipore
(27), Cell
Signaling
Technology
(4), Abcam (2)
TERF1 telomeric repeat-binding factor (factor deunión a repetición telomérica 1) P54274 7013 3
Santa Cruz
Biotechnology
(1), EMD
Millipore (1),
Sigma-Aldrich
(1)
histone H2A (histona H2A) Q7L7L0 92815
histone H4 (histona H4) P62805 8359 1 EMD Millipore(1)
TERF2IP
telomeric repeat-binding factor 2-
interacting protein 1 (proteína 1 de
interacción con el factor de unión a
repetición telomérica 2)
Q9NYB0 54386 1 Bethyl (1)
histone H2B (histona H2B) P33778 3018
Envoltura nuclear
prelamin-A/C (prelamina-A/C) P02545 4000 13
Santa Cruz
Biotechnology
(6), AbD
Serotec (Bio-
Rad) (2), Cell
Signaling
Technology (2)
lamin B1 (lamina B1) P20700 4001 3
Santa Cruz
Biotechnology
(2), EMD
Millipore (1)
nuclear pore complex protein Nup98
(proteína del complejo de poro nuclear
Nup98)
P52948 4928 1
Nucleolo
Nop1p fibrillarin (fibrilarina) P22087 2091 8
Abcam (5),
Cytoskeleton
(2), Individual
Researcher (1)
DNA-directed RNA polymerase I subunit
RPA34 (subunidad RPA34 de la
polimerasa de ARN I dirigida por DNA)
O15446 10849
Nop2p
ribosomal RNA methyltransferase NOP2
(metiltransferasa de RNA ribosomal
NOP2)
P46087 4839
Endosomas
EEA1 early endosome antigen 1 (antígeno 1
de endosoma temprano)
Q15075 8411 61 BD
Biosciences
(41), Santa
Cruz
Biotechnology
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(8), Thermo
Scientific (6)
clathrin heavy chain 1 (cadena pesada 1
de clatrina) Q00610 1213 13
BD
Biosciences
(6), Santa Cruz
Biotechnology
(2), Thermo
Scientific (2)
Rab5
Ras-related
protein Rab5 (proteína
relacionada a Ras, Rab5)
P20339 5868 11
BD
Biosciences
(9), Santa Cruz
Biotechnology
(1)
Rab11 Ras-related protein Rab-11A (proteínarelacionada a Ras, Rab-11A) P62491 8766 4
Thermo
Scientific (1),
Santa Cruz
Biotechnology
(1), Abcam (1)
Rab9 Ras-related protein Rab-9a (proteínarelacionada a Ras, Rab-9a) P51151 9367 2
Thermo
Scientific (2)
Rab7 Ras-related protein Rab-7a (proteínarelacionada a Ras, Rab-7a) P51149 7879 1
Santa Cruz
Biotechnology
(1)
clathrin light chain B (cadena liviana B
de clatrina) P09497 1212
AP-2 AP-2 complex subunit sigma (subunidadsigma del complejo AP-2) P53680 1175
Exosomas
HSPA8 Q96IS6 3312 5
Enzo Life
Sciences (3),
Abcam (1),
Thermo
Scientific (1)
CD81 antigen (antígeno CD81) P60033 975 5
BD
Biosciences
(4), Santa Cruz
Biotechnology
(1)
(antígeno CD81) P21926 928 4
Retículo endoplasmático
calnexin (calnexina) P27824 821 30
Enzo Life
Sciences (17),
BD
Biosciences
(4), Santa Cruz
Biotechnology
(3)
calreticulin (calreticulina) P27797 811 19
Enzo Life
Sciences (8),
EMD Millipore
(4), Santa Cruz
Biotechnology
(2)
GRP78
78 kDa glucose regulated protein
(proteína de 78 kDa regulada por
glucosa)
P11021 3309 18
Enzo Life
Sciences (10),
BD
Biosciences
(4), Santa Cruz
Biotechnology
(3)
PDI Protein disulfide-isomerase (proteínadisulfuro isomerasa) P07237 5034 4
Enzo Life
Sciences (4)
Microtúbulos
alpha tubulin (alfa tubulina) Q71U36 7846 32
BD
Biosciences
(39), Abcam
(2), Enzo Life
Sciences (1)
beta tubulin III (beta tubulina III,
microtúbulo neuronal)
Q13509 10381 28 BD
Biosciences
(39), Abcam
(2), Enzo Life
Sciences (1)
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Centrosoma
gamma tubulin ( gama tubulina) P23258 7283 23
Sigma-Aldrich
(21), Santa
Cruz
Biotechnology
(1), Abcam (1)
pericentrin (pericentrina) O95613 5116 7
BioLegend (2),
Abcam (2),
Individual
Researcher (1)
ninein (nineina) Q9Y2I6 22981
Filamentos de actina
actin alpha (actina alfa, músculo liso) P62736 59 30
Sigma-Aldrich
(13), Dako
(12), Epitomics
(1)
Autofagosomas y lisosomas
LAMP1 lysosome Associated Membrane Protein1 (proteína asociada a lisosoma 1) P11279 3916 35
BD
Biosciences
(13),
Developmental
Studies
Hybridoma
Bank (9),
Santa Cruz
Biotechnology
(6)
LAMP2 lysosome Associated Membrane Protein2 (proteína asociada a lisosoma 2) P13473 3920 15
Developmental
Studies
Hybridoma
Bank (7),
Santa Cruz
Biotechnology
(3), Abcam (2)
LC3
microtubule-associated proteins 1A/1B
light chain 3A (cadena liviana 3Ade
proteínas asociadas a microtúbulos
1A/1B)
Q9H492 84557 6
MBL
International
(3), Abgent (2),
Nanotools (1)
beta-galactosidase (beta galactosidasa) P16278 2720 4
Abcam (1),
Thermo
Scientific (1),
Fitzgerald
Industries (1)
Apg12 ATG12 autophagy related protein 12(proteína relacionada a autofagia 12) C1IDX9 9140 1
Cell Signaling
Technology (1)
Apg5 autophagy protein 5 (proteína deautofagia 5) Q9H1Y0 9474 1
Santa Cruz
Biotechnology
(1)
Melanosomas
OA1
Melanoma antigen recognized by T-cells
1 (antígeno de melanoma reconocido
por células T 1)
Q16655 2315 5
Dako (3),
BioLegend (1),
Nichirei
Biosciences
Inc. (1)
Gp100 melanocyte protein PMEL (proteína demelanocito PMEL) P40967 6490 2
Enzo Life
Sciences (1),
Thermo
Scientific (1)
TYRP1 tyrosinase-related protein 1 (proteína 1relacionada a la tirosinasa) Q6LES1 7306 1
Santa Cruz
Biotechnology
(1)
Dct /
TYRP2
tyrosinase-related protein 2 (proteína 2
relacionada a la tirosinasa) P40126 1638
Peroxisomas
catalase (catalasa) P04040 847 1 FitzgeraldIndustries (1)
acyl-coenzyme A thioesterase 8
(tioesterasa 8 de acetilcoenzima A) O14734 10005
PEX3 peroxin factor 3 (factor peroxina 3) P56589 8504
Ribosomas
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rpS6 ribosomal protein s6 (proteína ribosomal
s6)
P62753 6194 9 Cell Signaling
Technology (9)
60S ribosomal protein L7a (proteína
ribosomal L7a de 60S) P62424 6130
60S ribosomal protein L26 (proteína
ribosomal L26 de 60S) P61254 6154
Proteosomas
20S proteasome alpha-subunit
(subunidad alfa 20S del proteosoma)s P25786 5682 5
EMD Millipore
(3), Sigma-
Aldrich (1),
Affiniti (1)
proteasome subunit beta type-5
(subunidad beta tipo 5 del proteosoma) P28074 5693
26S protease regulatory subunit 4
(subunidad regulatoria de proteasa 26S) P62191 5700
Rpn2
26S proteasome non-ATPase regulatory
subunit 1 (subunidad regulatoria de
proteasa 26S no ATPasa)
Q99460 5707
Cim5
26S protease regulatory subunit 7
(subunidad regulatoria de proteasa 7
26S)
P51665 5713
Mitosis
phosphohistone H3 (fosfohistona H3) P68431 8968 35
EMD Millipore
(27), Cell
Signaling
Technology
(4), Abcam (2)
Citocinese
Aurora B quinase (Aurora B quinase) Q96GD4 9212 13
BD
Biosciences
(9), Abcam (3),
Rockland
Imunoquímicos
(1)
Tabela 1 . Marcadores Organelle e suas estatísticas na revisão Labome de mais de 10.000
publicações. Num: número de publicações com aplicações de anticorpos em experiências de imuno-
histoquímica e imunocitoquímica.
[ampliar]
dobramento adequado de macromoléculas e sua secreção no ambiente extracelular (exocitose através
da rede trans de Golgi) ou seu transporte, juntamente com outras proteínas e lipídios, no ambiente
intracelular (pilhas de Golgi). Os dispositivos Golgi também podem sintetizar proteoglicanos e
carboidratos. Eles geralmente são desmontados durante a mitose e reassemblados após a mitosis em
cada célula filha [ 1 ].
RCAS1 ou EBAG9
El antígeno canceroso
que une receptor
expresado en células
SiSo es una proteína
transmembrana tipo III
residente del Golgi [2] y
más específicamente
localizada en el
compartimiento
intermedio entre el RE y
el Golgi y en el cis Golgi
[3].
Sintaxina 6
Se encuentra
principalmente en el
Golgi y está involucrada
en el tráfico de
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Figura 1. Marcadores Organelle - Resumo geral. (Crédito e permissão para a imagem
original da célula: Servier Medical Art )
[agrandar]
vesículas intracelulares
[4].
Formimidoiltransferasa
ciclodeaminasa (del inglés,
FTCD)
es una enzima de 58
kDa con actividad
transferasa y
deaminasa. Se localiza
en el Golgi y facilita el
empaquetamiento de
vimentina empezando
en el Golgi, pero
recientemente también
se la encontró en el
centrosoma [5].
Miembro 2 de la sufamilia A
de Golgin (GM130)
es un autoantígeno de
Golgi el cual
probablemente tiene una función en el transporte RE-Golgi [6].
Alfa manosidasa II
se localiza en la membrana del aparato de Golgi y se encuentra involucrada en la glucosilación de
proteínas, ya que regula pasos en la síntesis de N-glicanos.
beta 1,4-galactosiltransferasa 6 (b4Gal-T6)
se encuentra involucrada en la biosíntesis de glucoesfingolípidos y es otro marcador de membrana
interna de Golgi.
TGN38
regula el tráfico de membrana desde la red del trans Golgi (el mecanismo secretorio) a la membrana
plasmática. Tras el tratamiento con Brefeldina A, los apilamientos de Golgi se desordenan y la red del
trans Golgi colapsa junto al centrómero. Por ende, la tinción del TGN38 distingue la red de trans Golgi
de los apilamientos de Golgi [7].
Marcadores mitocondriales
La mitocondria (del griego mitos, μίτος = hilo + condrion, χονδρίον = gránulo) es una organela de 0.5-
1.0 μm de diámetro. Son consideradas las plantas de energía de la célula ya que sintetizan energía en
la forma de adenosina trifosfato (ATP) pero también tienen otras funciones. La mitocondria se
encuentra compuesta por una membrana interna y una externa, el espacio intermembranoso, las
crestas y la matriz y contienen su propio ADN separado del nuclear. En humanos se han encontrado
mas de 600 proteínas diferentes [8] y algunas de ellas se utilizan como marcadores.
Carbamoil-fosfato
sintasa I (CPS1)
es la isozima
mitocondrial de
163 kDa de esta
enzima, la cual
está involucrada
en el ciclo de la
urea y remueve
el exceso de
amoníaco de la
célula. CPS1 es
un marcador de
mitocondrias de
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Figura 2. (A) Adaptado de [22], en donde se demostró que PTTG1 se asocia con el aparato
de Golgi, tal como revelado por su colocalización con GM130 en células RPE1. (B) Adaptado
de [23], en donde se demostró que ZnT2 se localiza en los endosomas tardíos y en el RE,
por colocalización con M6PR y PDI, respectivamente. (C) Adaptado de [24] en donde la
localización de ATZ en el RE se demostró en células Hepa 1-6, utilizando calnexina como
marcador. (D) Inmunofluorescencia de ADN, microtúbulos y centrosoma por DAPI, alfa
tubulina y gama tubulina, respectivamente - Adaptado de Abcam. (E) Inmunofluorescencia en
células HeLa en mitosis con tinción de los cromosomas con DAPI, de los centrómeros con
CREST y los cromosomas mitóticos con H3S10ph. Adaptado de [25].
hígado y de
riñón.
Prohibitina
Es una proteína
de 30 kDa de la
membrana
mitocondrial
interna y
probablemente
regula la
respiración
mitocondrial. Se
encuentra
involucrada en
varias
actividades
incluida la
apoptosis, la
regulación del
ciclo celular y la
senescencia. La
prohibitina es
mas abundante
durante la fase
G1 del ciclo
celular y tras el
tratamiento con tianfenicol (en inglés thianphenicol), un inhibidor de la síntesis de proteínas
mitocondriales [9].
Citocromo C oxidasa (COX)
es un complejo proteico de la membrana mitocondrial interna [10]. Se encuentra involucrado en la
translocación de protones y en la catálisis del oxígeno a agua requerida para la síntesis de ATP.
Factor de inducción de apoptosis (AIF, PDCD8)
es una proteína de 67 kDa del espacio intermembranoso y es de expresión ubicua. En la mitocondria,
el AIF funciona como una oxidoreductasa y tiene actividad antiapoptótica. Sin embargo, durante las
señales apoptóticas, el AIF es liberado al citoplasma y transloca al núcleo para inducir apoptosis
nuclear.
Hexoquinasa
es una quinasa de la membrana mitocondrial externa que cataliza el primer paso de la glucólisis. La
hexoquinasa fosforila hexosas (un azúcar de seis carbonos) paraformar fosfatos de hexosa (por ej.
glucosa a glucosa-6-fosfato).
VDAC1
(proteína de membrana mitocondrial externa porina 1) es el receptor de la membrana mitocondrial
externa para la hexoquinasa y para BCL2L1.
Marcadores nucleares
Existen varias proteínas utilizadas para distinguir estructuras nucleares entre ellas:
Cromatina:
La molécula de ADN se encuentra condensada y envuelta alrededor de 4 histonas centrales (H2A,
H2B, H3, H4 - las cuales forman un octámero) y forma el nucleosoma. La histona H1 es un enlazante
de proteínas el cual se une a áreas distales de cromatina y la compacta aún mas. El ADN, junto con
las histonas y otras proteínas que se le asocian (para regular la transcripción, replicación, reparación
del ADN, etc.) es llamado cromatina.
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Por ende, cualquier colorante que una ADN puede ser utilizado como un marcador de cromatina. Por
ejemplo, el 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) y los colorantes Hoechst 33258 y Hoechst 33342 son los
mas comunes. Bromodeoxiuridina (BrdU) es un nucleósido sintético utilizado para detectar células en
proliferación. La tinción con 5-etinil-2'-deoxiuridina (EdU) es igual de efectiva.
Todas las histonas centrales son requeridas para la formación del nucleosoma. Por ende, anticuerpos
anti histonas marcarían principalmente cromatina. Anticuerpos específicos contra modificaciones de
histonas pueden distinguir entre eucromatina (por ej. H2Kme3 o H3K36me3) y heterocromatina (por ej.
H4K20me3). Fosfohistona H3 también puede ser utilizada para indicar el estado mitótico de las celulas
[11].
El factor de unión a repetición telomérica 1 (TERF-1, RAP1) se encuentra localizado en los telómeros y
regula el largo de los mismos.
Envoltura nuclear:
La envoltura nuclear es la estructura membranosa de bicapa lipídica que rodea al núcleo y lo separa
del citoplasma. La membrana interior está compuesta de una red de filamentos intermedios, la lámina
nuclear, mientras que la membrana exterior se encuentra conectada físicamente con el retículo
endoplásmico, por ende compartiendo algunas proteínas. Pequeños orificios en la envoltura nuclear
constituyen los complejos de poros nucleares de alrededor de 100 nm de diámetro y conectan las
membranas nucleares externa e interna y también exportan e importan proteínas hacia y desde el
núcleo.
Lamina A (74 kDa) y lamina C así como lamina B (68 kDa) pueden ser detectadas por anticuerpos
para revelar la envoltura nuclear, la cual se desensambla durante la mitosis. Durante la apoptosis,
lamina A y C se dividirán en dos fragmentos de 40-50 y 28 kDa.
La nucleoporina 98 (NUP98) pertenece al complejo de poros nucleares.
Nucleolo:
El nucleolo es una estructura no membranosa dentro del núcleo de la célula, el cual transcribe y
ensambla ARN ribosomal. Los componentes proteicos de los nucleolos pueden ser utilizados como
marcadores, tales como la ARN polimerasa PAF49, la proteína nucleolar 1 (Nop1p/Fibrillarin), Nop2p,
Nop5p y Nsr1p.
Marcadores endosomales
Los endosomas son compartimentos citoplásmicos los cuales rodean moléculas y las transfieren
desde la membrana a otras partes dentro de la célula. Generalmente, los complejos endocitados (por
ej. ligando y receptor) son separados en endosomas tempranos y cada componente puede ser
transferido a su nuevo destino (por ej. lisosomas, Golgi, etc.) a través de los endosomas tardíos.
Rab5, Rab7, Rab9 y Rab11
Rab5 es una GTPasa pequeña (24 kDa) de la familia Ras, la cual viaja desde la membrana plasmática
a los endosomas tempranos y regula el tráfico vesicular y la fusión de la membrana plasmática con los
endosomas tempranos, a través de su interacción con otras proteínas. De manera similar, Rab7, Rab9
y Rab11 son marcadores proteicos endosomales igualmente buenos.
EEA1
Una de las proteínas que interaccionan con Rab5 es el antígeno endosomal temprano 1(EEA1). Es
una proteína de 162 kDa y participa del tráfico endosomal.
Clatrina y proteína adaptadora 2 (AP-2)
Otras estructuras para la endocitosis y la transferencia de moléculas son las microcavidades
recubiertas de clatrina (o vesículas). Estas vesículas consisten de una cubierta proteica la cual
empaqueta los receptores de membrana y otras moléculas. La clatrina y la proteína adaptadora 2 (AP-
2) son excelentes marcadores para vesículas recubiertas por clatrina.
Marcadores exosomales
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Algunas veces los endosomas se fusionan con la membrana plasmática y son secretados al espacio
extracelular, siendo estos un mecanismo de secreción. Los exosomas son importantes ya que
contienen proteínas citoplasmáticas y proteínas de membrana así como lípidos y moléculas de ARN
que pueden ser potenciales biomarcadores de enfermedades particulares.
HSPA8, y las proteínas de cuádruple paso transmembrana, CD81 y CD9, son buenos marcadores
para exosomas [12].
Marcadores del retículos endoplasmático
El retículo endoplasmático (RE) es una estructura citoplasmática que contiene chaperonas que ayudan
a que los polipéptidos se plieguen correctamente y que se ensamblen en complejos proteicos. La
mayoría de las proteínas del RE contienen un motivo KDEL (lisina-aspartato-glutamina-leucina) y son
retenidas mediante la interacción con el receptor interno del RE de KDEL. Por ende, un anticuerpo anti
KDEL que reconozca el motivo es utilizado como un marcador positivo del RE.
Calnexina
es una proteína integral de membrana del RE de 90 kDa la cual se une a proteínas no plegadas y las
retiene en el RE.
Calreticulina
es una chaperona de 48 kDa del RE con el motivo KDEL en el extremo C terminal y une proteínas
monoglucosiladas sintetizadas en el RE.
GRP 78
La proteína relacionada a glucosa de 78 kDa (del inglés, GRP 78) contiene un motivo KDEL en el
extremo C terminal y facilita el ensamblaje de complejos proteicos en el RE. Es esencial para la
viabilidad celular.
Proteína disulfuro isomerasa (PDI)
El hábitat de PDI es el RE debido a su motivo KDEL. PDI tiene varias funciones, incluyendo la
formación de puentes disulfuro en proteínas no plegadas.
Marcadores de citoesqueleto
Microtúbulos:
Los microtúbulos son filamentos elongados constituidos por tubulinas. Las tubulinas alfa y beta son
proteínas globulares de 55 kDa que forman heterodímeros y que polimerizan para formar el
microtúbulo cilíndrico. Se encuentran involucrados en numerosas funciones celulares y especialmente
en el mantenimiento de la estructura celular, el transporte intracelular o la formación del huso mitótico
que separa las cromátidas hermanas durante la división celular. La polimerización de la tubulina
comienza en el centrosoma, el cual constituye el centro organizador de microtúbulos (COM) en la
interfase y los polos del huso durante la mitosis, en donde diferentes complejos proteicos constituyen
el andamiaje necesario para la iniciación de la polimerización de tubulina. Estos complejos contienen γ
tubulina. El centrosoma contiene solo una copia por célula, el cual se duplica durante la mitosis.
Anticuerpos contra α o β tubulina son buenos marcadores de microtúbulos.
Anticuerpos contra γ tubulina muestran el centrosoma. Otros marcadores de centrosoma son la
pericentrina y la nineina. Pericentrina es una proteína de 220 kDa involucrada en la formación inicial
(nucleación) del microtúbulo. Nineina es una proteína centrosomal involucrada en la nucleación y el
encapuchado de los extremos mas y menos.
Filamentos de actina:
De manera similar a los microtúbulos, los filamentos de actina son tubos delgados cilíndricos de doble
hélice compuestos por actina α o β. Sus ciclos dinámicos de polimerización y depolimerización regulan
el movimiento celular, la polarización y el andamiaje de la célula. Además, varias proteínas de unión a
actina controlanla polimerización de actina.
Los anticuerpos anti actina que unen monómeros de actina o la toxina faloidina marcada
fluorescentemente que une actina filamentosa.
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Autofagosomas y lisosomas
Autofagosomas son organelas intracelulares formadas por elongación de pequeñas estructuras
membranosas, los precursores de autofagosomas, en una doble membrana que rodea organelas
dañadas. El autofagosoma luego se une con un lisosoma, el cual contiene hidrolasas y otras enzimas
de degradación, y es destinado a la degradación [13].
Apg12 y Apg5 se encuentran asociados de manera covalente y funcionan como una unidad. Por ende,
el conjugado Apg12-Apg5 se encuentra localizado en la membrana autofagosómica durante la
elongación. Por lo tanto es un buen marcador para la iniciación de la autofagia. Otras isoformas de
Apg regulan la formación del fagosoma y su fusión con lisosomas y pueden ser utilizados como
marcadores autofagosomales.
La cadena liviana 3 de la proteína asociada a microtúbulos 1 (del inglés, LC3) también se localiza en la
membrana pero cuando se encuentra completamente formada se encuentra también en las
membranas de aislamiento. LC3 puede ser encontrado en lisosomas pero en menor abundancia [13].
Se ha cuestionado si Western blots de LC3 y su proteína asociada sequestosoma 1 (SQSTM1,
también conocida como p62) puede reflejar acertadamente el estado de los autofagosomas,
especialmente en el caso de p62 [14].
Las proteínas de membrana asociadas a lisosomas 1 y 2 (del inglés, LAMP1 y LAMP2) son
componentes de la membrana lisosomal y por ende constituyen excelentes marcadores lisosomales.
Han sido utilizados recientemente para confirmar que el miembro 1 de la superfamilia transmembrana
7 (del inglés, TM7SF1) es una proteína integral de la membrana del lisosoma [15].
La beta galactosidasa es una de las glucosidasas que pueden ser utilizadas como marcador de
lisosomas. El receptor de manosa-6-fosfato dependiente de cationes (del inglés, M6PR) se encuentra
involucrado en el transporte de enzimas lisosomales desde el Golgi y la superficie celular hacia los
lisosomas.
Una lista completa de alrededor de 77 proteínas que se encuentran principalmente en lisosomas
puede ser encontrada en Lübke et al., [16], aunque no todas ellas son marcadores establecidos.
Marcadores melanosomales
Los melanosomas son organelas de los melanocitos, células de la piel y del epitelio retinal. Los
melanosomas contienen el pigmento melanina el cual protege a las células de la dañina radiación
ultravioleta (UV) .
Marcadores de melanosomas pueden ser la tirosinasa, Tyrp1, Dct, OA1, gp100, y MART1 [17].
Marcadores peroxisomales
Los peroxisomas son estructuras que albergan reacciones oxidativas, tales como la beta oxidación de
ácidos grasos, y protegen de los peróxidos [18].
Fox2p y Fox5p son receptores de membrana peroxisomales.
La catalasa es una proteína peroxisomal que protege a las células de los efectos tóxicos del peróxido
de hidrógeno.
La acil-coenzima A tioesterasa 8 pertenece a un grupo de enzimas que catalizan la hidrólisis de acil-
CoA a ácidos grasos libres y coenzima A (CoASH), proveyendo el potencial para regular los niveles
intracelulares de acil-CoA, ácidos grasos libres y CoASH.
Las peroxinas (una clase de 24 genes) son partes integrales del desarrollo de los peroxisomas.
Marcadores ribosomales
Los ribosomas son complejos moleculares de proteínas y moléculas de ARN (ribonucleoproteína) en el
cual se sintetizan las proteínas. Están compuestos de una subunidad pequeña 40S y una grande 60S.
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Varias proteínas específicas de ribosomas pueden ser utilizadas como marcadores.
Anticuerpos contra las proteínas ribosomales L7a, L26 (componentes de la subunidad 60S), S3, S6,
S10, S11 (subunidad 40S) son ejemplos característicos.
Marcadores proteosomales
Los proteosomas son complejos multiproteicos y su función es la de degradar proteínas por proteólisis.
Cada proteosoma consiste de cuatro anillos apilados formando un poro central, el núcleo. Un complejo
heptaproteico (subunidades β) de enzimas proteolíticas forman los dos anillos en el interior mientras
que siete subinidades α forman la entrada por la cual ingresan las proteínas y acceden al núcleo.
Las subunidades del proteosoma, proteosoma 20S [19], proteosoma 26S, α7 y Rpn2 [20], Pre6, Cim5
y Scl1 [21] son utilizados comúnmente como marcadores proteosomales.
Marcadores del ciclo celular
Marcadores de mitosis
La histona H3 se fosforila en la serina 10 (H3S10ph) y es esencial para el inicio de la mitosis [11].
Marcadores de citocinesis
La quinasa aurora B [11]
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