4° Aula Cultivo de microorg parte 1 2017.2

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Profa. Dra. Lílian Pantoja 
Técnicas de Isolamento/Cultura Pura 
População Mista 
Cultura Pura 
Meios de Cultivo 
Condições de Incubação ? 
Fonte de Energia 
Técnicas de Isolamento/Cultura Pura 
População Mista 
Cultura Pura 
Meios de Cultivo 
Condições de Incubação ? 
Fonte de Energia 
Química Luminosa 
Fatores necessário ao cresc. 
Físicos Químicos 
Fazer crescer e manter viáveis Cultivo - 
Onde os microrganismos são cultivados? 
 
Inóculo – Qdo o microrganismo 
é colocado no meio de 
crescimento 
 
Cultura – São microrganismos 
que crescem provenientes do 
inóculo. 
 
Ágar – Polissacarideo complexo 
extraído de algas 
Meio de Cultura 
Consiste em um material 
nutritivo, preparado em 
laboratório, que se destina ao 
cultivo artificial dos 
micro-organismos, devendo, 
portanto, fornecer os 
nutrientes indispensáveis ao 
seu crescimento. 
Meio de Cultura 
Material nutriente preparado para o crescimento de microrganismos 
Quimicamente Naturais Artificiais 
Meio de Cultura (Qto à Origem) 
Fonte de energia 
Fonte de Carbono, nitrogênio, enxofre, fósforo 
Aquele que já existem 
prontos na natureza 
Aqueles elaborados 
Meio de Cultura 
Material nutriente preparado para o crescimento de microrganismos 
Quimicamente Definido Complexos 
Meio de Cultura (Qto à Composição) 
Fonte de energia 
Fonte de Carbono, nitrogênio, enxofre, fósforo 
É aquele em que a 
composição química 
exata é conhecida 
(sintético) 
É aquele em que a 
composição química 
pode conter pequenas 
variações 
Meio quimicamente definido (sintético) 
 
Componentes Quantidade 
Glicose 5,0 g 
Fosfato de amônia monobásico (NH4H2PO4) 1,0 g 
Cloreto de Sódio (NaCl) 5,0 g 
Sulfato de magnésio (MgSO4.7H2O) 0,2 g 
Fosfato de potássio dibásico (K2HPO4) 1,0 g 
Água 1 L 
E. coli (Bactéria quimioautotrófica típica ) 
(Meio Pobre) 
Prototróficos/auxotrófica 
C 
N 
P 
S 
Sem exigência nutritiva 
Depende de vários 
Fatores 
de Crescimento 
a.a/vit/Bases Nitrogenadas (purinas, pirimidinas) 
Meio Complexo 
 
Componentes Quantidade 
Glicose 15,0 g 
Extrato de levedura 5,0 g 
Peptona 5,0 g 
Fosfato de Potássio (KH2PO4) 0,2 g 
Água 1 L 
(Leuconostoc mesenteroides) 
Componentes Quantidade 
Peptona 5,0 g 
Extrato de levedura 3,0 g 
Cloreto de Sódio 8,0 g 
Agar 15,0 g 
Água 1 L 
Meio Agar nutriente para crescimento 
de bactérias heterotróficas 
E. coli 
Meios de Cultivo (Qto ao estado físico) 
Sólido Líquido 
Agar (polissacarídeo): 1,5 % (gelatina ou a sílica gel) 
Semi-sólido 
Meios de Cultivo (Qto ao estado físico) 
Sólido 
Agar (polissacarídeo): 1,5 % (gelatina ou a sílica gel) 
Consiste em um Polímero, o ác. 
Poligalacturônico, extraído das 
algas marinhas, que é capaz de 
se fundir a 100ºC, e ao se 
resfriar, solidifica a 40ºC. 
Meios de Cultivo 
Agar (polissacarídeo): 1,5 % (gelatina ou a sílica gel) 
Q
u
an
to
 à
 F
in
al
id
ad
e
 
Meios Gerais ou Básicos 
Meios Enriquecidos 
Meio Seletivos 
Meios Diferenciais (indicadores) 
Meios de Transporte ... 
Meios de Cultivo 
Meios Gerais ou Básicos 
São aqueles que 
permitem o crescimento 
de um grande número 
de espécies 
microbianas 
Meios de Cultivo 
 Seletivo e Diferencial 
Objetivo de favorecer o 
crescimento da bactéria 
de interesse e impedir o 
crescimento de outras 
indesejáveis 
Meios de Cultivo 
 Seletivo e Diferencial 
Utilizado para fácil 
identificação da colônia 
de interesse qdo existem 
outras bactérias 
crescendo na mesma 
placa 
Ex: ágar sangue – Streptococcus pyogenes infecção de garganta 
Família Streptococcaceae – alfa, beta e gama hemólise 
Ex. Seletivo-Diferencial 
Ágar MacConkey - Isolamento Enterobactérias e outros bastonetes 
Gram-neg. 
Agente seletivo: Sais biliares e cristal violeta. 
Agente diferencial: Lactose e vermelho neutro 
Ex. Seletivo-Diferencial 
Meio CLED (Cisteina, lactato, eletrólito deficiente) 
• Contém indicador azul de bromotimol. Bactérias Gram-positivas conseguem virar 
o indicador , originalmente verde em pH neutro para amarelo em decorrência da 
produção de ácido. 
Ex. Seletivo-Diferencial 
Ágar Salmonella-Shigella (ágar-SS) 
• Possui altas concentrações de sais biliares e citrato de sódio. Altamente seletivo... 
Meios Enriquecidos 
? 
Nutrientes 
Meio Líquido 
Favorece o crescimento do 
microrganismo desejado 
Fonte 
De 
Carbono 
E 
Energia 
“Transferências Sucessivos” 
Salmonella 
Nº pequeno de micro-
organismo – amplia o nº de 
organismo 
Ex: Fenol – fonte carbono 
Seletivo 
Cultivo 
Semeadura por esgotamento 
O método de isolamento mais comumente utilizado para obter 
culturas puras é o método de esgotamento por estria 
Cultura Pura: Em que todas as células na população 
são idênticas no sentido de que elas se originaram de 
uma mesma células parental 
Dentre as técnicas conhecidas para 
isolamento de micro-organismos em 
cultura pura , as mais comumente 
utilizadas são 
Técnica de esgotamento 
por estria 
 
Técnica das diluições 
em placas 
Se baseiam no principio de que uma célula microbiana isolada 
Agrupamento visível chamado 
COLÔNIA 
Qdo em meio de cultura 
O sucesso do Procedimento 
Realizar o maior número de estrias possíveis 
Não perfurar ou rasgar o meio de ágar 
Não voltar com a alça sobre as estrias, 
sobrepondo-as 
Iniciar a semeadura com uma pequena quantidade de 
material na alça de inoculação. 
Métodos de preparação das 
placas para contagem. 
 
(a) Método de incorporação 
em placa. Pour plat 
 
 
(b) Método de espalhamento 
em placa. Espalhamento em 
superfície 
 
Meios e Métodos para o Crescimento de Anaeróbios 
Meios Redutores – Esse meio contem reagentes como TIOGLICOLATO de SÓDIO 
+ 
O2 
O2 
Figura 6.5 
Mycobacterium leprae 
Placa de Petri 
Técnicas Especiais de Cultura 
CAPNOFÍLICOS 
Micro-organismos 
que crescem 
melhor em altas 
concentrações de 
CO2