aula 6 Metodos de estudo

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO
INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOMÉDICAS
CURSO: FARMÁCIA (NOTURNO)
BIOLOGIA MOLECULAR DA CÉLULA
BMH126
PROF.ª MARIANA CABANEL
2017/02
Microscopia
Microscópio óptico
Base
Mesa
Braço
Fonte de luz
Filtro
Diafragma
Revólver
Canhão
Oculares
Objetivas
Condensador
Micrométrico
Macrométrico
Charriot
Propriedades da luz
Microscopia de campo claro
 Fixação: 
Formol: preserva as células.
 Coloração das células
Hematoxilina: corante básico que 
se liga a componentes ácidos da 
célula, como o DNA e RNA 
(núcleo).
Eosina: corante ácido que se liga a
componentes básicos da célula,
como proteínas (citoplasma).
Microscopia de contraste de fase
 Técnica ideal para visualizar células vivas e
não coradas, como cultura de células.
 Quanto maior o atraso da luz, menor o
brilho.
Microscopia de contraste de fase
Microscopia eletrônica
http://advanced-
microscopy.utah.edu/education/super-res/
Poder de resolução do microscópio eletrônico
O microscópio óptico utiliza luz visível com comprimento de onda médio de 400nm. Isso
significa que o microscópio óptico tem a resolução máxima de aproximadamente 200nm.
O microscópio eletrônico utiliza elétrons que também se movimentam em ondas. No
entanto, o comprimento de onda é 200X menor que o comprimento de onda da luz
visível. Por isso, microscópios eletrônicos são capazes de detectar objetos de até 0,1nm.
Luz Elétrons
Luz
Microscopia eletrônica
Microscópio eletrônico
Microscópio eletrônico
Microscopia eletrônica de Transmissão
Os elétrons incidentes interagem com a amostra, e passam através dessa e são
transmitidos produzindo a imagem detectada por uma câmera.
Os sinais produzidos pelo MET são: elétrons transmitidos
Microscopia eletrônica de Transmissão
Microscopia eletrônica de Varredura
Os elétrons incidentes interagem com os elétrons da amostra, produzindo vários sinais
que são detectados e contém informações sobre a superfície ou topografia da amostra.
Os sinais produzidos pelo MEV são: elétrons secundários, Raio-X e elétrons
retroespelhados.
Microscopia eletrônica de Varredura
MET X MEV
Microscopia de fluorescência
Uso de anticorpos na imunofluorescência
Anticorpos conjugados com fluorocromos
Excitação e emissão do fluorocromo
Princípio básico da MI
Microscopia de Fluorescência
Microscopia de Fluorescência
Microscopia de Fluorescência
 Fluoróforo ou fluorocromo: composto químico que
absorve luz em um específico comprimento de onda e
reemite luz em um comprimento de onda maior.
Fluoróforos são adicionados na amostra para funcionar
com sonda.
Microscopia de Fluorescência
O comprimento de onda da luz emitida é maior que o comprimento de onda da luz
de excitação.
Microscopia de Fluorescência
Microscopia de Fluorescência
Microscopia de Fluorescência
Microscopia de Fluorescência
Princípio básico da MI
Microscópio de fluorescência
Princípio básico da MI