3.1 Aula de Microbiologia2m (1)

Prévia do material em texto

Curso Prático para 
Auxiliar de Análises 
Clínicas 
Microbiologia 
Laboratório de Microbiologia 
 
 
Nas aulas práticas de microbiologia o objetivo é ensinar 
os princípios e os métodos utilizados em um 
laboratório de microbiologia. 
Pelo fato de se trabalhar com uma diversidade de 
bactérias, sendo algumas delas patogênicas ao homem, 
é essencial seguirmos as normas de segurança 
estabelecidas em um laboratório de microbiologia, a 
fim de evitarmos a contaminação dos 
estudantes,professores e funcionários. 
Desta forma algumas normas iniciais devem ser 
estabelecidas antes de iniciarmos as nossas atividades: 
1- Desinfetar a bancada de trabalho no início e término de cada 
aula prática. Para isso, utilizamos o álcool comercial (70%). Tal 
prática diminui a contaminação das nossas culturas na área de 
trabalho; 
 
 
 
2- Não comer, beber, ou fumar no laboratório. 
Se a bancada, equipamentos ou instrumentos tiverem sido 
contaminados acidentalmente com quaisquer microrganismos, 
comer ou fumar é um meio eficiente para autocontaminação; 
 
 
 
 
 
3- Usar sempre um jaleco. Este não deve ser utilizado fora do 
laboratório, pois pode estar contaminado; 
4- Lavar as mãos antes de iniciar as atividades no laboratório e 
ao término das mesmas; 
 
 
 
5- Avisar ao professor ao a pessoa responsável em caso de 
contaminação acidental; 
 
 
 
6- Não colocar materiais contaminados (pipetas, lâminas, etc) 
sobre a bancada ou na boca. 
Esses materiais devem ser descartados em locais ou 
recipientes apropriados que serão dispostos em cada bancada, 
contendo ou não uma solução descontaminante; 
 
 
7- Cada aluno será responsável pelo material que receber; 
8- Seguir as normas de uso dos aparelhos. O microscópio é um 
instrumento de trabalho valioso e deve ser manipulado 
cuidadosamente. Desta forma o aluno deverá saber como 
manipulá-lo. 
 
 
9- Deve-se ter cuidado ao acender o bico de Bunsen. Substâncias 
inflamáveis não podem estar por perto. 
 
 
10- Alças, agulhas e pinças devem ser flambadas antes e após o 
uso. 
 
 
 
Preparo dos corantes do Gram 
 
 
A finalidade da coloração é facilitar a 
observação microscópica das bactérias e 
diferenciá-las de acordo com as suas 
características morfotinturiais. 
Na prática, os corantes são divididos em dois 
grupos: 
 ácidos 
 básicos. 
 
 
Técnica do preparo dos corantes 
 
1) Cristal violeta: 1g de cristal violeta; 2g de ácido fênico; 10 mL de álcool 
absoluto; 100mL de água destilada. Diluir o cristal violeta no álcool e 
juntar aos pouco o ácido fênico, misturando sempre, de modo a obter 
uma mistura bem homogenia. Juntar a água, pouco a pouco, misturando 
bem. Filtrar em papel de filtro após 24h de repouso. 
 
2) Lugol: 1g de iodo: 2 g de iodeto de potássio; 300 mL de água destilada. 
Diluir o iodo com o iodeto de potássio em água e misturar bem. Preparar 
a solução em quantidade que seja usada antes de 30 dias. 
 
3) Álcool acetona: 800 mL de álcool; 200 mL de acetona. Misturar as duas 
soluções. Éter acetona: 500 mL de éter e 500 mL de acetona. Misturar as 
duas soluções. Guardar em um recipiente com vedação já que as duas 
substâncias são voláteis. 
 
4) Fucsina: 2,5g de fucsina; 100mL de álcool etílico; 90 mL de água 
destilada. A solução estoque (fucsina e álcool etílico) deve ser 
prepaparada unindo-se os dois componentes e Gram-negativa (E. coli) 
Gram-positiva (S. aureus)‏misturando bem. Para usar juntar 10mL da 
solução estoque em 90 mL de água destilada, ou seja, diluir 10% em água 
destilada. Todos os corantes devem ser armazenados em frasco de vidro 
âmbar em local com a temperatura entre 20 e 25oC (TA) e sem umidade. 
Meios de Cultura 
 
Os meios de cultura destinam-se ao cultivo artificial dos microrganismos. 
Eles fornecem os nutrientes indispensáveis ao seu crescimento 
bacteriano 
Meio líquido: 
 
 é aquele em que os nutrientes estão envolvidos em 
uma solução aquosa; 
Meio semi-sólido: 
 
 este meio possui na sua composição, além dos nutrientes, uma 
pequena porcentagem de agar; 
Meio sólido: 
 
 é um meio que possui na sua composição nutrientes e uma 
quantidade de agar maior do que o semi-sólido. Em torno de 
1,5% (1,5g em 100mL); 
Meio enriquecedor: 
é aquele que permite o crescimento de microrganismos 
exigentes que necessitam fatores de crescimento, mas não 
inibem o crescimento de outros. Este meio, além das fontes 
nutritivas usuais, mencionadas anteriormente, pode possuir 
sangue, soro, carne moída, etc; 
Agar sangue 
Meio contendo 
carne moída 
(chopped meat)‏ 
Meio seletivo: 
é aquele que contém substâncias que inibem o crescimento 
de certos microrganismos, porém seleciona aquele de 
interesse. Dentre as substâncias inibidoras estão o cristal 
violeta, cloreto de sódio, etc.; 
Agar manitol salgado 
Meio diferencial: 
 
 este meio possui substâncias que evidenciam uma 
característica que permite separar um grupo ou espécie de 
microrganismo. Como por exemplo, carboidratos (lactose; Meio 
MacConkey); 
MacConkey 
Meios de triagem : 
 meios que avaliam determinadas atividades metabólicas 
permitindo caracterização e identificação perfunctória ou 
presuntiva de muitos microrganismos (ágar tríplice açúcar e 
ferro, meio Instituto Adolfo Lutz, uréia, etc.); 
A maioria dos meios de cultura são vendidos na forma de pó ou 
granulados. Após misturar cada um dos ingredientes, estes 
devem ser bem misturados e terem o pH aferido. Só então 
devem ser esterilizadas em uma autoclave (121oC por 15 min). 
Os meios líquidos devem ser distribuídos antes de serem 
Autoclavados. 
 
Dentre os termos utilizados para a limpeza dos 
materiais estão: 
 
Sanitação: é o tratamento que leva à diminuição da vida 
microbiana nos utensílios alimentares e equipamentos de 
manipulação de alimentos até os níveis seguros de saúde 
pública. Este processo é realizado com agentes químicos que 
podem ser sabão ou detergentes e desinfetantes do tipo 
sanitizantes. 
Esterilização: é a eliminação total dos microrganismos e 
endoesporos (esporos). Métodos químicos e físicos podem 
ser usados. 
 
Desinfecção: é a eliminação parcial (ou redução) do número de 
microrganismos (principalmente patogênicos) presentes em um 
material inanimado. A desinfecção é feita por agentes químicos – 
os desinfetantes. Pode também, como na descontaminação, ser 
realizada por método físico com água em ebulição e máquina 
automática de água quente (60oC-90oC)‏ 
 
 
 
Descontaminação: é a limpeza realizada com agentes físicos 
ou químicos com o objetivo de remover agentes contaminantes, 
como fluidos e secreções corporais com agentes infecciosos. Pode 
ser feita também por fricção com esponja, pano ou escova, 
embebidos em produtos químicos. Após a limpeza por 
desinfecção, os artigos devem ser secos, guardados ou 
processados para esterilização. 
 
NORMAS DE SEGURANÇA 
AULAS PRÁTICAS DE MICROBIOLOGIA 
 
É indispensável o uso de jaleco no laboratório. 
O jaleco deve ser comprido, de mangas compridas e 
estar abotoado; 
 
Não comer (inclusive balas e chicletes), 
 Não beber e fumar no laboratório; 
 
O Material pessoal (bolsas cadernos, mochilas, 
agasalhos, etc.) deve ser mantido longe das bancadas 
de trabalho. 
 
Utilizar na bancada somente o material necessário 
ao trabalho prático, como: 
roteiro de aula, 
 papel 
 lápis ou caneta para anotações; 
 
Em caso de qualquer acidente: 
 (derramamento de culturas, quebra de placas, 
ferimentos, aspiração de culturas, etc) comunicar 
imediatamente o professor ou o técnico responsável 
pela aula prática; 
 
 
 Descarte de material: 
 Materiais contaminados devem ser colocados 
nos recipientespróprios, existentes nos 
laboratórios. NUNCA deixá-los nas bancadas ou 
pias; 
 Placas de petri deverão ser deixadas tampadas 
sobre a bancada; 
 Lâminas fornecidas para visualização deverão 
ser deixadas sobre as bancadas; 
Tubos com culturas deverão ser deixados nas 
estantes. 
Prestar atenção às atividades dos colegas ao lado 
para evitar acidentes. 
Terminados os trabalhos práticos: 
a)Esterilizar alças e fios de platina; 
b) Verificar se as torneiras de água e gás estão 
fechadas; 
c) Desligar lâmpadas e microscópios; 
d) Limpar microscópios e cobri-los com a capa; 
e) Tirar o avental e guardar; 
f) Lavar cuidadosamente as mãos com água e 
sabão ou anti-séptico. 
 Cultivando bactérias de forma didatica. 
 
Objetivo 
 
Mostrar a existência de micróbios e como eles contaminam o meio de 
cultura. 
 
Material (para o meio de cultura)‏ 
• 1 pacote de gelatina incolor 
• 1 xícara de caldo de carne 
• 1 copo de água 
Dissolver a gelatina incolor na água, conforme instruções do pacote. 
Misturar ao caldo de carne 
Material (para a experiência)‏ 
• Duas placas de petri (ou duas tampas de margarina ou dois potinhos 
rasos), com o meio de cultura cobrindo o fundo 
• Cotonetes 
• Filme plástico 
• Etiquetas adesivas 
• Caneta 
Obrigado!