Adryel de Sousa Barros

Prévia do material em texto

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ – UFPI 
CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE 
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E FARMACOLOGIA 
MEDICINA VETERINÁRIA 
BIOQUÍMICA BÁSICA 
PROFESSOR: OSMAR DE OLIVEIRA CARDOSO 
 
 
 
 
 
 
 
DETERMINAÇÃO QUALITATIVA DOS AMINOÁCIDOS 
 
 
 
 
 
Aluno: Adryel de Sousa Barros 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Teresina 
2018 
Reação de Biureto 
 
Introdução 
Proteínas uma das mais importantes macromoléculas biológicas compõem mais da 
metade do peso seco de uma célula, e encontram-se presentes no sistema imunológico. Entre 
outras funções as proteínas são grandes polipeptídios, ou seja, os resíduos de aminoácidos que 
estão ligados entre si, chamados de ligação Peptídica. O propósito das experiências descritas é 
a determinação qualitativa de aminoácidos bem como a pesquisa da ligação peptídica. As 
proteínas de um modo geral refletirão as propriedades químicas de seus aminoácidos. Muitas 
reações coloridas das proteínas dependem da presença de um determinado aminoácido. 
As proteínas e seus produtos de hidrólise que contenham mais de duas ligações 
peptídicas são reagentes positivos para a Reação do Biureto. As soluções alcalinas com 
biureto apresentam uma coloração violeta na presença de sulfato de cobre (CuSO4). Isso 
ocorre pela formação de um complexo entre o íon Cu
+2
 e os átomos de nitrogênio da molécula 
do biureto. 
Objetivo 
Detectar a presença de ligações peptídicas, dando positiva para proteínas e peptídeos 
com três ou mais resíduos de aminoácidos. 
Método 
Foram dissolvido 1,5g de sulfato de cobre (CuSO4.5H2O) e 6,0g de tartarato de sódio 
e potássio (KNaC4H4O6.4H2O) em 500 mL de água destilada. Adicionou-se, sob agitação 
constante, 300 mL de solução de hidróxido de sódio (NaOH) 10%. Após o feito, completou-
se o volume para 1L com água destilada e guarde o reagente em frasco âmbar. Conservamos 
por tempo indefinido. 
Resultados 
Notou-se que no tubo I (ovoalbumina e biureto) a solução ficou com a coloração 
violeta. No tubo II (água destilada e biureto) a solução ficou com a cor azul com uma 
tonalidade enfraquecida. No tubo III (solução de gelatina e biureto) a solução a presentou a 
coloração azul. 
Conclusão 
Conclui-se, portanto que a presença de proteínas em materiais biológicos em 
especificas reações com determinados reativos, que absorvem luz na região visível e originam 
substâncias coloridas. 
 
 
 
 
Reação de Ninhidrina 
 
Introdução 
Ninhidrina é um produto químico usado para a detecção de amônia ou aminas 
primárias e secundárias. Ao reagir com essas aminas livres, um de cor azul escuro ou roxo 
conhecido como Ruhemann de roxo é evoluído. Nas condições apropriadas, a intensidade da 
cor violeta produzida é relacionada à concentração das espécies presentes. A prolina, que é 
um aminoácido, forma um composto amarelo. 
Objetivo 
O objetivo desta prática foi possibilitar a detecção de concentração do grupo amina 
livre na solução de ovoalbumina. 
Método 
Preparou-se o tubo com as seguintes soluções: 1 mL de solução de ovoalbumina 2% 
adicionado 10 gotas da solução de ninhidrina [C6H4COCO.C(OH)2] 1 %. Após tal feito 
agitou o tubo e o mesmo foi aquecido em banho maria durante 2 minutos. 
Resultados 
A Ninhidrina possibilita a detecção de concentração do grupo amino em proteínas 
formando um composto chamado “Púrpura de Rühemann”. Ao final do experimento a solução 
apresentou coloração violeta muito intensa. 
Conclusão 
Com o seguinte experimento possibilitou averiguar que a solução apresentava alta 
concentração de grupo amina livre. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Precipitação com Sais de Metais 
 
Introdução 
Os cátions de metais como Hg2+, Pb2+, Cu2+, Fe2+, Cd2+ e Zn2+ formam 
precipitados insolúveis de proteínas pela formação de sais insolúveis de metal com as 
proteínas negativamente carregadas, forma em que se encontra em meio alcalino. Essa 
precipitação é mais intensa quando o pH está acima do ponto isoelétrico (pI) porque nessa 
circunstância, a carga total sobre a proteína é negativa, o que favorece a interação com os 
cátions metálicos. 
Objetivo 
Reconhecer as proteínas como moléculas eletricamente carregadas e analisar a 
influência do pH sobre essas cargas 
Método 
Depois de numerado os tubos de ensaio prepararam-se os tubos com as seguintes 
soluções: 
Tubo I: 2 mL de solução de ovoalbumina 2% adicionado à 7 gotas de HgCl2 
5%; 
Tubo II: I 2 mL de solução de ovoalbumina 2% adicionando à 5 gotas de 
(CH3COO)2Pb.3H2O 10%; 
Após o preparo das soluções agitou-se levemente por tempo indeterminado 
Resultados 
No tubo I nota-se a presença de uma coloração marrom com um substancia 
esbranquiçada no fundo do tubo, acompanhada de uma precipitação. 
No tubo II nota-se a presença de uma precipitação menos evidente que a do tubo I. 
Conclusão 
O tubo I apresentou uma maior precipitação em relação ao tubo II. Nota-se, portanto 
que o Mercúrio (HgCl2 5%;) reagente do tubo I, possui um pH superior ao Chumbo 
[(CH3COO)2Pb.3H2O 10%;], (reagente do tubo II. 
 
 
 
 
 
 
 
Precipitação pelos Ácidos Fortes 
 
Introdução 
Estes ácidos desnaturam as proteínas transformando-as em metaproteínas insolúveis. 
Essa precipitação é mais intensa quando o pH está abaixo do ponto isoelétrico (pI). Isso 
porque, abaixo do pI, a carga líquida sobre a proteína é positiva, favorecendo a interação com 
os ânions provenientes dos ácidos fortes. Pode ocorrer a ressolubilização se o pH for 
corrigido.. 
Objetivo 
Detecção da desnaturação proteica quando na presença de um ácido forte resultando 
na formação de uma metaproteína. 
Método 
Prepare-se o tubo com a seguinte solução com1 mL de solução de ovoalbumina 2% 
adicionado a 3 mL de água destilada. Logo inclina-se o tubo e acrescente lentamente pelas 
paredes 0,5 mL de ácido nítrico concentrado (HNO3), sem agitar. 
Resultados 
A solução de Ovoalbubina comportasse mudando de tonalidade uma vez que o ácido 
nítrico foi adicionado, formando uma metaproteína. 
Conclusão 
A solução de Ovoalbubina desnatura quando adicionado um ácido forte formando uma 
metaproteina insolúvel em água, que vai causando uma pequena precipitação no tubo. Isso 
porque, abaixo do pI, a carga líquida sobre a proteína é positiva, favorecendo a interação com 
os ânions provenientes dos ácidos fortes. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Reação Xantoproteica 
 
Introdução 
 Devido às ligações peptídicas e à presença de diferentes aminoácidos, as proteínas 
reagem com uma variedade de reagentes, formando produtos coloridos A reação 
xantoproteica: teste para a tirosina e triptofano, ou proteínas que contenham estes 
aminoácidos baseado na reação de nitração dos anéis aromáticos pelo ácido nítrico 
concentrado. 
Objetivo 
 Perceber os aminoácidos de cadeias laterais conforme a alteração de coloração. 
Método 
 Preparou-se um tubo com 1 ml de solução de ovoalbumina 2%, logo após foi 
acrescentado 10 gotas de ácido nítrico concentrado (HNO3). Em seguida deixou-se o tubo no 
banho Maria até ser aquecido. Retirou-se do banho Maria e adicionou-se 4 ml de solução de 
hidróxido de sódio (NaOH) 2N, observou-se os resultados obtidos. 
Resultado 
Os reagentes triptofano, tirosina que após os procedimentos obtiveram a coloração 
amarela. Quando se acrescentou a base hidróxido de sódio (NaOH) 2N na reação, a coloração 
ficou em uma cor mais intensa, um vermelho alaranjado. 
Conclusão 
Nota-se a detestação de aminoácidos de cadeias laterais uma vez que há alteração de 
cor. Os aminoácidos fundamentaisque compõem as proteínas apresentam características 
estruturais diferentes e diferem uns dos outros pelo radical, ainda assim é capaz de 
identificarmos esse aminoácido com a mudança de coloração. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Reação de Millon 
 
Introdução 
A reação de Million se dá devido à presença do grupamento hidroxifenil nas 
moléculas de proteínas e peptídeos. A reação é positiva para tirosina com o aparecimento de 
cor avermelhada com ou sem precipitado. As proteínas são precipitadas pelos ácidos minerais 
fortes e pelo mercúrio, os quais com aquecimento tornam uma coloração avermelhada. 
Objetivo 
 Identificar a presença ou não de Tirosina na amostra, através da reação de Millon 
Método 
Numerado os tubos de ensaio, preparou-se os tubos com as seguintes soluções: 
1 mL de solução de ovoalbumina 2% adicionado à 5 gotas do reativo de 
Millon; 
1 mL de solução de gelatina 1% adicionado à 5 gotas do reativo de Millon; 
Agitando levemente é realizado um primeiro diagnóstico. Após o tubo com a solução 
de ovoalbumina com reativo de Millon foi aquecido em banho maria. 
 
Resultado 
 Observa-se que após o banho-maria ocorreu a mudança de cor, onde a solução do 
tubo ovoalbumina, (meio alaranjado) , enquanto a solução de gelatina adquiriu um tom 
avermelhado. Em ambas as soluções, alcançou-se um resultado positivo, porém na 
solução do tubo I, houve a formação de um precipitado denso devido a albumina 
apresentar uma maior concentração de proteínas e a solução do tubo II é menos 
concentrada, em decorrência da gelatina não possuir grandes concentrações proteicas. A 
reação se dá devido à presença do grupamento hidroxifenil nas moléculas de proteínas 
e peptídeos. 
 
Conclusão 
 Conclui-se, portanto que o Million permite a caracterização da proteína na solução 
realizada, isso se deve a alteração na coloração da mesma promovendo uma análise de suas 
propriedades químicas e físicas, como ligações peptídicas, estrutura molecular e solubilidade. 
 
 
 
 
 
Reação do Grupo Sulfidrila 
 
Introdução 
Dos aminoácidos que apresentam enxofre em sua constituição apenas a cisteína e a 
cistina são capazes de liberá-lo à quente e no meio alcalino. O enxofre liberado forma sulfeto 
de sódio que reage com o acetato de chumbo, formando o sulfeto de chumbo precipita na cor 
preta ou castanha. O enxofre da metionina não é liberado em meio básico. 
Objetivo 
 Identificar a presença do aminoácido cisteina através da elevação de temperatura. 
Método 
Foi colocado num tubo de ensaio uma pequena quantidade de cabelo, junto com 5 
gotas de solução de acetato de chumbo 10% e 2mL de solução de NaOH 50%.Posteriormente, 
a solução foi levada a fervura durante 5 minutos. 
Resultado 
A proteína do cabelo, chamada queratina, se quebrou, caracterizando a presença do 
aminoácido cisteina. Isso se deu devido a desnaturarão da proteína em decorrência da 
elevação da temperatura, assim sendo a solução ficou com uma coloração escura. 
Conclusão 
Mais uma vez nota-se que a coloração permite a detecção de algumas proteínas. 
Através de reações especificas com determinados reativos, essas originam substâncias 
coloridas que absorvem luz na região visível. No entanto, as reações de coloração não alteram 
a estrutura da proteína.