reproducao assistida

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Conceitos Básicos de 
Reprodução Assistida 
 Mariana Antunes Ribeiro
 
 
ribeiro.mantunes@gmail.com 
Tratamentos 
§  IIU - Inseminação intra-uterina 
§  FIV - Fertilização in vitro convencional 
§  ICSI - Intracytoplasmic sperm injection 
Qual tratamento escolher??? 
Inseminação Intra-uterina 
Indicações 
§  Integridade tubária 
§  Concentração de espermatozóides móveis 
 pós-processamento > 5 milhões 
§  Não ter como antecedente terapêutico 
 falhas de 4 ou mais ciclos de IIU 
Inseminação intra-uterina 
Volume inseminado: 0,5 mL de sêmen processado 
Gradientes 
Pellet sptz 
Espermato
zóides em 
meio de 
cultura 
Fertilização in vitro 
Fertilização in vitro 
convencional 
ICSI 
§  Punção folicular via transvaginal com auxílio da ultra-
sonografia 
§  Localizar, classificar e preparar os ovócitos recuperados sob a 
lupa simultaneamente a punção folicular 
FIV – Coleta de Ovócitos 
§  O líquido folicular é examinado no estereomicroscópio à 37°C 
e 5 % CO2; 
Indicações 
 
Fertilização in vitro convencional 
§  Fator tubário 
§  Oligozoospermia 
moderada 
§  ESCA 
§  Fator ovulatório 
Fertilização in vitro Convencional 
Inseminação dos ovócitos 
§  Os ovócitos são colocados em microgotas de 30µl em 
placa de Petri sob óleo mineral; 
§  Cada microgota deve receber 100.000 
espermatozoides móveis por ovócito; 
§  Estufa 5% CO2 à 37°C; 
§  Verificação da fertilização 
 em 16-18h. 
 
 
Injeção Intracitoplasmática 
 de Espermatozoide 
Indicações 
§  Fator masculino grave 
§  Falha de fertilização in 
vitro convencional 
§  Falha de IIU 
Preparação do oócito para ICSI 
§  Incubação de 2-8 h a 37º C e 5% CO2. 
§  Denudação: mecânica e hyaluronidase 
§  Classificação de acordo com a maturação nuclear: GV, MI, 
MII 
Injeção Intracitoplasmática 
 de Espermatozoide 
GV 
MI MII 
Classificação 
Ovocitária 
Injeção Intracitoplasmática 
 de Espermatozoide 
Micromanipulador 
§  Os ovócitos são transferidos para placa de 
 Petri com meio de cultura, colocados 
 na estufa 5% CO2 a 37°C; 
 
§  Verificar a fertilização depois de 16-18h 
 da injeção intracitoplasmática. 
 
Injeção Intracitoplasmática 
 de Espermatozóide 
Verificação da Fertilização 
 Etapa Pronuclear 
1PN 2PN 
3PN 
Classificação embrionária 
Número de Blastômeros 
Dia 2 – embriões de 2-4 células 
Dia 3 – embriões de 6-9 células 
Dia 4 – mórula (células compactadas) 
Dia 5 - Blastocisto 
Avaliação dos embriões 
 Morfologia embrionária 
§  Simetria e tamanho dos blastômeros 
§  Presença de fragmentos citoplasmáticos 
Classificação Embrionária 
Grau I 
 Sem fragmentação; 
blastômeros simétricos. 
Grau II 
< 10% fragmentação; 
blastômeros simétricos. 
Classificação Embrionária 
Grau III 
Fragmentação variável; 
blastômeros com tamanhos 
irregulares. 
Grau IV 
> 10% fragmentação; 
blastômeros assimétricos. 
Classificação Embrionária 
Veeck, 1999 
Grau V 
> 50% de fragmentação; 
blastômeros de 
tamanhos 
diferentes. 
Blastocistos 
Expandido Hatching Inicial 
Morfologia dos Blastocistos 
§  Blastocele expandida 
§  Massa celular interna bem definida 
§  Células da trofectoderme regulares e lisas 
Assisted Hatching 
§  Químico : Ácido Tyrode’s 
§  Laser 
§  Esta técnica foi introduzida em 1980 
§  Realiza-se um furo artificial na zona pelúcida 
 antes da transferência intra-uterina 
§  Aumenta a taxa de implantação 
Critérios de avaliação para indicação do AH 
Assisted Hatching 
§  idade da paciente 
§  nº de tentativas feitas sem implantação 
§  grau de fragmentação do embrião 
§  espessura da zona pelúcida 
Transferência embrionária 
§  Idade Materna 
§  Número de falhas 
§  Causa da 
infertilidade 
§  Qualidade 
embrionária 
Criopreservação 
Sêmen 
Indicações: 
§  Pré-tratamento: quimio e radioterapia 
§  Ausência do paciente 
§  Sêmen de doador 
§  Pré-vasectomia 
§  Profissões de alto risco 
Criopreservação 
Oócitos 
 
Histórico 
1986, Chen - Primeira gravidez de oócito 
descongelado 
Indicações 
§  Mulheres sem parceiro 
§  Pré-tratamento quimioterápico 
§  Banco de oócitos 
Técnicas 
§  Congelamento lento (Fabbri, 2001) 
§  Vitrificação (Kuwayama, 2005) 
 
 
 
 
 
 
CRIOPRESERVAÇÃO 
Embriões 
Histórico 
§  1984, Trounson - Primeira gravidez de embrião descongelado 
Indicações 
§  Embriões excedentes 
§  Síndrome do Hiperestímulo Ovariano 
§  Pesquisa de células-tronco 
§  Doação 
Técnicas 
Congelamento lento 
Congelamento Ultra-rápido 
Vitrificação 
 
Criopreservação 
MECANISMO DE DESIDRATAÇÃO 
 
 H2O 
 
 
 
 CRIOPROTETOR 
 
Armazenamento 
Palheta 
Cryotop - 196o C 
Criotubo 
Preimplantation genetic diagnosis 
(PGD) 
Indicações: 
§  Idade materna 
§  Histórico de doença familial 
§  Aborto de repetição 
§  Falhas de implantação 
 
Direcionamento 
§  Doenças mendelianas 
§  Doenças cromossômicas 
 
Preimplantation genetic diagnosis 
(PGD) 
 Análise genética aCGH 
 
 Embrião: 45,XY,-16