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1 Universidade de São Paulo Curso de Licenciatura em Química Danilo José Ferreira Pinto e Karitas Correia Gusmão PLANO DE AULA São Paulo, 06 de novembro de 2013 I) DADOS DE IDENTIFICAÇÃO Escola: Escola de Aplicação FEUSP Professores: Danilo José Ferreira Pinto e Karitas Correia Gusmão Orientadores: Agnaldo Arroio, Caio Nagayoshi e Valéria Campos dos Santos Horas aula (90 minutos): 1 Série:______ Turma: ______ Turno: _________ Data de aplicação: ___/___/_______ II) TEMA DNA e separação de misturas IIIa) OBJETIVO GERAL Conhecer os princípios básicos da extração do material genético. IIIb) OBJETIVOS ESPECÍFICOS: Investigar quais conceitos químicos, especificamente de separação de misturas foram internalizados pelos alunos no curso de bioquímica. IV) CONTEÚDOS: DNA, separação de misturas e solubilidade V) PROCEDIMENTOS, RECURSOS E ESTRATEGIAS Investigação das concepções prévias: O que vocês sabem sobre DNA? Onde encontramos DNA? Quais seres vivos possuem DNA? Como é a estrutura do DNA? É possível isolar o DNA? Vocês se lembram de quando fizeram isso no curso de bioquímica? Problema proposto: Utilizando os dados fornecidos (Tabela 1 e Tabela 2) e dos materiais disponíveis no laboratório, proponha um método para extrair o DNA do morango. Justifique, com base nos dados da tabela e nos seus conhecimentos, cada etapa do processo. Especifique quais materiais deverão ser utilizados e o tempo estimado para cada etapa. Tabela 1 – Tabela de solubilidade DNA Membrana plasmática e membrana nuclear Demais resíduos Meio aquoso Insolúvel Insolúvel Insolúvel NaCl (aq) Insolúvel Insolúvel Insolúvel Detergente Insolúvel Pouco solúvel Insolúvel NaCl(aq) + Detergente 25ºC Insolúvel Solúvel Insolúvel NaCl(aq) + Detergente 60ºC Insolúvel Muito solúvel Insolúvel Solução alcoólica 25% Insolúvel Insolúvel Insolúvel Solução alcoólica 5% Muito insolúvel Insolúvel Insolúvel Tabela 2 – Tabela de densidade DNA Demais resíduos Meio aquoso Menos denso que o meio Mais denso que o meio Solução alcoólica Menos denso que o meio Mais denso que o meio Os professores deverão mediar a elaboração dos procedimentos auxiliando na análise das tabelas e realizando os seguintes questionamentos: Onde encontramos o DNA? Quais são as “barreiras” que deveremos ultrapassar para retirá-lo de lá? Resposta esperada: Dentro das células.É necessário quebrar ou dissolver a membrana plasmática e a nuclear. Como faremos para retirá-lo de lá? Resposta esperada: utilizando solução aquosa de detergente e NaCl à 60ºC, pois, de acordo com a tabela, a membrana plasmática é solúvel neste meio. É necessário amassar/moer o morango primeiro? Por quê? Resposta esperada: sim, pois aumenta da superfície de contato. Qual o papel do detergente? Resposta esperada: Como as membranas plasmática e nuclear são compostas principalmente por lipídios, as moléculas de detergente as desestruturam e provocam a sua ruptura, deixando assim o DNA disperso na solução. Qual o papel do NaCl? Resposta esperada: Os íons do sal neutralizam as cargas do DNA favorecendo a sua aglomeração. Por que, na primeira etapa do procedimento, você escolheu uma temperatura alta e noutra uma temperatura baixa? Justifique. Resposta esperada: O aumento da temperatura aumenta a energia cinética entre as moléculas, favorecendo o processo de solubilização das membranas pelo detergente. Além disso, a alta temperatura provoca a desnaturação térmica de várias proteínas e enzimas, dentre elas as DNAses que podem degradar o DNA. O choque térmico, processo responsável pela diminuição rápida da temperatura do sistema, serve para manter “inativadas” as proteínas e as enzimas. A diminuição brusca da temperatura desfavorece ainda a interação entre as fitas da molécula de DNA, mantendo-as abertas no meio. A adição do etanol gelado faz com que ocorra a precipitação do DNA devido a sua baixa solubilidade nesse solvente (quanto mais gelado, menor a solubilidade e melhor o processo extrativo). Nele também o DNA aumenta sua compactação e tende a formar fibras. Qual(is) o processo(s) de separação utilizado(s)? Qual(is) propriedade(s) física/química você está explorando ao adotar esse(s) procedimento(s)? Resposta esperada: Filtração: separação entre partículas sólidas e líquidas. Catação: utilizando um bastão de vidro, o DNA é pescado com movimentos circulares. A propriedade explorada é a solubilidade dos compostos em meios distintos. O tempo estimado para cada uma das etapas foi suficiente? Justifique. Resposta esperada: não dá para saber qual será a discrepância do tempo estimado com o tempo realmente necessário, mas o aluno deverá justificar que é necessário certo tempo para a dissolução da membrana plasmática e precipitação do DNA. Enquanto o procedimento elaborado pelos alunos é executado, haverá exibição de vídeo para problematizar o tema. http://www.youtube.com/watch?v=C5x073iElaA Tempo: 22min 46s Enfoque: histórico Discussão ao final da execução do procedimento. O procedimento elaborado foi bem sucedido? Se não, aponte as prováveis fontes de erro. Resposta esperada: Vai depender das discrepâncias entre oq eu foi planejado, o que foi executado e os resultados obtidos. O importante é permitir que o aluno “erre”. DNAse é uma enzima essência para a metábole da molécula de DNA. Qual o papel da enzima nesse processo? Resposta esperada: Enzimas funcionam como catalisadores acelerando a reação de metábole do DNA. No seu procedimento, como você fez para evitar a ação desta enzima? Resposta esperada: Enzimas sofrem desnaturação de suas estruturas em altas e baixas temperaturas. Em 60 ºC e a 5 ºC, espera-se que a atividade destas enzimas seja reduzida. VIa) AVALIAÇÃO DO ALUNO - Avaliação dos conteúdos factuais; - Avaliação dos conteúdos conceituais; - Avaliação de conteúdo atitudinal. VIa) AVALIAÇÃO DO PROFESSOR E DO PLANO DE AULA Por meio de gravação em áudio da intervenção. VII) BIBLIOGRAFIA Lima, R.; Fraceto L.F.. Abordagem Química na Extração de DNA de Tomate. Revista Química Nova na Escola. N° 25, maio de 2007.
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