Aula - Identificação dos tipos de fibra

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Fisiologia da Atividade Motora I - EEFE USP 
Laboratório de Fisiologia Celular e Molecular do Exercício 
 
 
Identificação dos Tipos de Fibras 
Aline Villa Nova Bacurau 
	
SUMÁRIO 
 Fragmentos de biópsia ou extração de tecido; 
 Congelamento; 
 Cortes em Criostato; 
 Histoquímica para Miosina ATPase; 
 Imunofluorescência; 
Biópsia ou Extração do tecido 
Animais de experimentação Humanos 
Congelamento do tecido: 
Tecido congelado em -20oC Nitrogênio líquido -196o C 
Congelamento do tecido: 
Cortes em criostato 
Enzima 
miosina ATPase 
 
Substrato 
 ATP 
 
Produto 
 
 ADP + Pi 
O Pi não é detectável histoquimicamente 
Histoquímica para miosina ATPase 
Pré tratamento com diferentes pHs 
 
I- 
II- 
Pi + Ca++ → CaPO4 
 
Para deixá-lo menos solúvel e mais visível, o CaPO4 é 
convertido em Sulfato de cobalto 
 
COS4 
IIB
IIA
I
pH 10.3 
- Pi 
+ Pi 
Histoquímica para miosina ATPase 
 
 
pH 4.3 
 
pH 4.6 
 
pH 10.3 
 
Tipo I 
 
 
 
 
 
 
 
Tipo IIA 
 
 
 
 
 
 
 
Tipo IIB 
 
 
 
 
 
 
 
Coloração para miosina ATPase com pré-incubação a pH=10.3 (A) e 4.3 (B) 
 B 
I I 
IIB IIB 
A 
IIA IIA 
IIX IIX 
Tipo IIX 
 
 
 
 
 
 
 
pH = 4.6 
IIA IIB 
I 
IIX 
Histoquímica para miosina ATPase 
Fibra Tipo I MHCIβ 
Fibra Tipo IIA MHCIIa 
Fibra Tipo IIB (IIX/D) MHCIId/x 
Características moleculares das fibras musculares 
MHCI 
MHCIIa 
MHCIIb 
MHCIId/x 
Miosina ATPase 
MHCIIx 
MHCIIa 
MHCIIb 
MHCIβ 
1990, Staron & Pette 
Tipagem de Fibras por Imunofluorescência 
Laminina MHCI Núcleo IIA IIB I IIX 
Imunofluorescência é uma técnica que permite a visualização de 
antígenos nos tecidos utilizando corantes fluorescentes, que 
absorvem luz e a emitem num determinado comprimento de onda. 
Tipagem de Fibras por Imunofluorescência 
Prática! 
Fibras puras: fibras cuja característica é única e expressam somente um 
tipo de MHC 
 
Ex: I = MHCIβ 
 IIA = MHCIIa 
 IIX/D = MHCIIx/IId 
Fibras híbridas: fibras que expressam mais de uma isoforma de MHC 
Fibras “puras” e Fibras “híbridas” 
% Fibras híbridas alta em músculos em 
transformação. 
“Natureza transitória”