bacterias

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE
DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
RELATATÓRIO DE ENZIMOLOGIA INDUSTRIAL
BACTÉRIAS
Recife
2018
1 INTRODUÇÃO
As bactérias são organismos bastante simples. São formadas por uma única célula (unicelulares), normalmente de 2 a 5 µm de comprimento, e podem ou não formar colônias. Esses organismos possuem material genético disperso no citoplasma, sendo, portanto, denominados de procariontes.
Na grande maioria das bactérias, além da membrana plasmática encontrada em todas as células, é possível observar externamente uma parede celular constituída, principalmente, por peptideoglicano. Essa parede celular apresenta como principal função manter a forma das células bacterianas e garantir proteção. Além disso, é possível perceber em algumas espécies uma cápsula polissacarídica envolvendo a parede.
No citoplasma da célula bacteriana, é possível perceber a presença de apenas um tipo de organela: os ribossomos. Esses ribossomos são menores que aqueles encontrados em células eucarióticas, mas desempenham a mesma função, que é a síntese de proteínas. Em algumas bactérias, é possível encontrar ainda estruturas de locomoção conhecidas como flagelos, que são compostos por uma proteína denominada de flagelina. Existem ainda estruturas mais finas e mais curtas que os flagelos denominadas de pili e fímbria. Estes estão relacionados com a fixação das bactérias em superfícies (fimbrias) ou ainda com a fixação no momento da reprodução (pili).
Hans Christian Gram, um bacteriologista dinamarquês, estudou e definiu a técnica para corar bactérias, a coloração Gram, em 1884. Nesta ocasião, experimentalmente, corou lâminas com esfregaços com violeta de genciana e percebeu que se as bactérias existentes nestes esfregaços uma vez coradas não desbotavam com álcool, se previamente fossem tratadas com iodo.
Avançando e aprimorando o método, adicionou ainda outros corantes denominados “contra-corantes”, tais como safranina e fucsina básica. As bactérias contidas no esfregaço podem ser classificadas como Gram-positivas (aproximadamente de cor roxa) ou Gram-negativas (aproximadamente de cor vermelha), isto dependerá da parede celular da bactéria. Se for estruturalmente simples a coloração será positiva, se for estruturalmente complexa a coloração será então negativa.
Existe um protocolo que se segue para fazer a coração de um esfregaço, com etapas bem definidas e com misturas de substâncias: solução de cristal violeta; solução de lugol (iodeto de potássio - KI); solução de safranina e solução de álcool, que resultarão na coloração positiva ou negativa.
2 OBJETIVO
Identificar se há contaminação da carne e queijo com bactérias do grupo caliciformes. E após a identificação,ver se as bactérias são Gram positivas ou negativas através da coloração de Gram. 
3 METODOLOGIA
3.1 Isolamento de bactérias do grupo caliciformes
Material: Amostra de queijo e carne de sol
	 Tubos de ensaio com meio de VB
	 1 balão com meio de Agar nutritivo
	 Tubos de ensaio com caldo lactosado
	 Placas de Petri com meio EMB
 	 Tubos de ensaio com meio Agar Nutritivo
Técnica:
1° dia: Inocular o tubo de verde-brilhante com o material a ser pesquisado e incubar a 35 °C por 48 horas.
2° dia: Inocular o tubo fermentado em placas de Petri com o meio EMB. E após incubar a 35 °C por 48 horas.
3° dia: Observar se as colônias cresceram e escolher por observação macroscópica colônias típicas de coliformes. Na escolha da colônia devem ser anotados aspectos macroscópicos. Transferir com alça de platina parte da colônia para um tubo com AN e para um tubo com caldo lactosado. Incubar a 35 °C por 48 horas. 
4° dia: Observar se o tubo de caldo lactosado fermentou e então se o tubo tiver dado resultado positivo (presença de bolha de ar no tubo de Durham) prosseguir a analise do tubo de cultura com meio Agar Nutritivo. Realizar a coloração de Gram e anotar os resultados.
3.2 Coloração de Gram
1. Fazer um esfregaço bem espalhado de uma suspensão bacteriana;
2. Depois de frio cobrir o esfregaço com solução de cristal de violeta (1 min);
3. Cobrir com solução de lugol (1 min);
4. Lavar me água corrente;
5. Descorar com álcool absoluto;
6. Lavar me água corrente;
7. Contrastar, rapidamente com safranina (30 segundos);
8. Lavar me água corrente;
9. Secar com papel fino;
10. Colocar uma gota de óleo de imersão sobre a preparação e examinar na objetiva de imersão
4 RESULTADOS E DISCUSSÃO
Foram feitos os procedimentos de acordo com as metodologias com a amostra de carne de sol e queijo.
Resultados de Camylla, Rayane e Eloiza: A amostra utilizada foi queijo onde a colônia foi verde brilhante, com tamanho médio e consistência algodonosa e sem pigmento solúvel. No tubo com caldo lactosado o resultado foi positivo com a presença de bolha de ar no tubo de Durham.
Resultados de Samuel, Eduarda e Simone: A amostra utilizada foi carne onde a colônia foi verde metálico, com tamanho médio e com pigmento solúvel. No tubo com caldo lactosado o resultado foi positivo com a presença de bolha de ar no tubo de Durham.
Os grupos fizeram a coloração de Gram da amostra, onde foi observado no microscópio na objetiva de imersão. Foi encontrados em todas as lâminas a bactéria Gram negativa já que estavam corados em vermelhos, exceto uma lâmina (Camylla) foi encontrado contaminação com Gram positiva também, ou seja a cultura não estava pura mesmo o meio sendo seletivo (EMB) para coliformes.
As bactérias eram moveis. 
5 CONCLUSÃO
Percebe-se que há uma importância dos procedimentos feitos para identificação to tipo de bactéria, para um possível tratamento com antibióticos, para uma possível contaminação em indústrias.
O procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias retenham a cor com base nas diferenças nas propriedades químicas e físicas da parede celular. O uso dos corantes permite aumentar o contraste e evidenciar a estrutura bacteriana.