Introdução à Cromatografia

Prévia do material em texto

Estudo dirigido de cromatografia
1 –Responda todas as perguntas abaixo: de forma objetiva:
Como funciona a separação cromatográfica por adsorção?
 A cromatografia de adsorção é baseada em uma fase estacionária sólida que adsorve algumas moléculas em seu meio da parte móvel que deve ser líquida. Essa adsorção é devida a interações entre os constituintes da parte líquida e da sólida. As separações ocorrem através de forças de Van Der Waals e interações eletrostáticas entre a fase estacionária que é sólida e os componentes que vão ser separados da fase móvel que pode ser liquido ou gasoso. A fase estacionária pode ser muito variada, conhecida como sílica gel, alumina ou celulose. 
Na separação por bioafinidade, uma única substância fica retida na matriz de ancoragem enquanto as outras são retiradas com facilidade. Qual a explicação desse método?
Na cromatografia de bioafinidade é a técnica cromatográfica baseada no isolamento seletivo de macromoléculas biológicas, por meio de interação com as fases estacionária e móvel. Condições de pH, diferença de afinidade e de força iônica do meio podem alterar a interação entre o componente e a fase estacionária, ligando ou liberando a molécula. Esse tipo de cromatografia se difere das demais por basear-se em métodos biológicos de interação e separação das moléculas.
2 - Por que a cromatografia é um método de análise onde a mistura a ser analisada não pode interagir quimicamente com as duas fases (móvel e estacionária)?
Porque a separação depende da diferença entre o comportamento das substâncias em amostra entre a fase móvel e a fase estacionária. A interação dos componentes da mistura com estas duas fases é influenciada por diferentes forças intermoleculares, incluindo iônica, polar-apolar, e efeitos de afinidade e solubilidade. A chave da separação está na diferença de afinidade entre a substância em amostra analisada, a fase móvel e a fase estacionária. O observador é representado pelo detector usado em uma série de formas de cromatografia. 
3 – a) Que substâncias poderiam ser se separadas através da Cromatografia por Troca Iônica?
A Troca iônica é a técnica cromatográfica utilizada para a separação e a purificação de biomoléculas tais como, proteínas, ácidos nucleicos, polipeptídeos e polinucleotido. Sua finalidade difundida, capacidade e simplicidade, e sua alta resolução são as razões chaves para seu sucesso como um método de separação. A cromatografia da Troca iônica é largamente utilizada em diversas aplicações industriais como por exemplo na separação e purificação de componentes do sangue como a albumina, fatores de crescimento de recombinação e enzimas. E na fermentação , as resinas da troca de Cátion são usadas para monitorar o processo de fermentação durante a produção da ß-galactosidase.
Como funciona esta técnica?
cromatografia de troca iônica a separação ocorre devido diferentes tendências dos componentes iônicos ou ionizados permutarem com íons da fase estacionária, que, assim, são deslocados para a fase móvel. A afinidade entre os íons da fase móvel e o suporte pode ser controlada por alteração do pH e da força iônica do elute.
4 – Assinale as alternativas com V (verdadeiro) ou F (Falso) e Justifique a ÚNICA resposta falsa:
 ( ) A variável físico-química utilizada na cromatografia por partição é o coeficiente de partição e fornece o grau de afinidade de cada componente da amostra com a fase móvel neste tipo de cromatografia.
( ) Um anticorpo é um exemplo de substância que é separado a partir da matriz de ancoragem ( fase estacionária) das colunas na Cromatografia por Afinidade. 
( ) O tempo de retenção é uma variável físico química que apresenta a afinidade das substâncias com a fase móvel e com a fase estacionária na Cromatografia em Coluna
 ( ) A cromatografia por exclusão contém um gel com propriedades elásticas, como fase estacionária que contém poros de tamanhos devidamente selecionados para separação de grupos específicos, responsáveis pela separação das substâncias.
 ( x ) Um dos parâmetros mais importantes numa CCD é o tempo de retenção (TR) que é a distância percorrida pela substância em questão e a distância percorrida pela fase móvel.
( ) A Cromatografia Centrífuga é uma técnica cromatográfica onde as substâncias são separadas de forma radial.
( ) Reveladores são agentes físicos (ultravioleta, por exemplo) ou químicos (AlCl3, por exemplo) que tornam visíveis as substâncias separadas em placas cromatográficas.
( ) Bioafinidade é uma técnica de separação cromatográfica onde uma única substância fica retida na matriz de ancoragem enquanto as outras são retiradas com facilidade.
JUSTIFICATICA DA ÚNICA RESPOSTA FALSA:
A justificativa esta falsa, pois o tempo de retenção é quanto tempo a fase demora na coluna e não a distancia entre uma fase e outra.
5 - A cromatografia que utiliza a coluna de Sephadex G-200 separa compostos com diferentes pesos moleculares. Olhando o cromatograma abaixo, responda com suas próprias palavras:
O que você entende por Cromatografia por exclusão molecular?
cromatografia de exclusão molecular, denominada também como filtração em gel ou separação por peneiros moleculares, separa os componentes segundo o tamanho efetivo (raio hidrodinâmico) das moléculas, isto é, moléculas grandes não penetram no interior do suporte (partículas porosas de gel) e movem-se mais rapidamente ao longo da coluna de onde emergem primeiro, enquanto as moléculas pequenas vêm a sua velocidade de deslocamento retardada porque penetram no gel, portanto, emergem da coluna mais tardiamente.
O primeiro composto (Fração I) tem maior ou menor tamanho molecular?
________________________________ .