Técnicas de Biologia Molecular

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Técnicas de Biologia Molecular
Profa . Danielle Rocha
A partir de 1972, a descoberta das enzimas que modificam o DNA permitiu diversos avanços, em áreas variadas.
Isolamento e clonagem de genes
Inserção em outros organismos
Usadas pela indústria farmacêutica,
 química e agrícola
No desenvolvimento de
Métodos de diagnóstico e terapia;
Produção de transgênicos;
Produção de medicamentos.
Como isolar DNA?
Lise das células (detergente)
Associação do DNA com o sal
Precipitação com álcool
Extração de DNA de morangos
Enzimas e Clonagem
Reconhecem sequências específicas de nucleotídeos e clivam o DNA nestas regiões.
Enzimas e Clonagem
Enzimas e Clonagem
Se duas moléculas forem cortadas com a mesma enzima, podem ser unidas, utilizando também a enzima LIGASE.
A inserção de um fragmento de DNA em um vetor (plasmídeo, BAC, YAC) é denominada CLONAGEM.
Sequenciamento de DNA
Sequenciamento de DNA
O DNA que será sequenciado é desnaturado (separação das fitas)
É adicionado DNA polimerase, nucleotídeos e um primer
Esta mistura é adicionada a quatro tubos com dideoxinucleotídeos A, T, C, G (quando são adicionados interrompem a síntese gerando fragmentos de diferentes tamanhos)
Sequenciamento de DNA
Os fragmentos são separados por eletroforese 
A sequencia é lida base a base
Eletroforese 
Reação em cadeia da polimerase
(PCR)
O DNA alvo é inserido junto com primers específicos e nucleotídeos; 
São repetidos ciclos de:
Desnaturação
Anelamento
Extensão
O DNA alvo é amplificado exponencialmente.
Reação em cadeia da polimerase
(PCR)
Discussão de artigo
Discussão de artigo
Qual o papel da Biologia Molecular no esporte de alto rendimento? (p. 2)
O que é mutação? E polimorfismo? (p. 4)
Como as diferenças genéticas podem ser usadas no esporte de alto rendimento? (p. 4-5)
O que é Doping genético? (p.5)
Cite e explique um dos exemplos de alvos de doping genético mencionados nas páginas 10-13.