4 Aglutinação

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Imunoensaios de 
aglutinação 
Imunologia Clínica 
Profa Elisa Flávia Bailão 
Universidade Estadual de Goiás 
UnUCET 
IMUNOAGLUTINAÇÃO 
¢  Semelhante a técnicas de precipitação; 
¢  Diferença: o antígeno ou o anticorpo é adsorvido a 
micropartículas insolúveis ou células à leitura 
visual e rápida; 
¢  Permite a detecção de pequenas quantidades de 
anticorpos; 
¢  Os agregados Ag-Ac formam-se em minutos ou 
horas; 
¢  A leitura pode ser feita a olho nu ou com o auxílio de 
lupa contra luz indireta; 
¢  Pode ser realizada em tubo, lâmina ou placa de 
microcavidades. 
IMUNOAGLUTINAÇÃO 
¢  Fatores envolvidos na formação de agregados: 
¢  Classe do anticorpo envolvido; 
¢  Concentração iônica ou pH do meio; 
¢  Presença de macromoléculas, íons, enzimas e 
conservantes; 
¢  Tempo e temperatura; 
¢  Padronização adequada da suspensão de 
micropartículas ou células; 
¢  Concentração ótima do anticorpo ou do antígeno a 
ser fixado; 
¢  Estabilidade do complexo Ag-Ac e acessibilidade. 
IMUNOAGLUTINAÇÃO 
¢  Vantagens: 
¢  Elevada sensibilidade; 
¢  Baixo custo; 
¢  Leitura visual; 
¢  Facilidade de execução; 
¢  Desvantagens: 
¢  Reprodutibilidade dos lotes de reagentes; 
¢  Acessibilidade molecular para a interação Ag-Ac; 
¢  Estabilidade da ligação Ag-Ac no suporte; 
¢  Podem gerar resultados falso negativos. 
IMUNOAGLUTINAÇÃO 
¢  A IgM apresenta maior eficiência de aglutinação; 
¢  A técnica não diferencia a classe do anticorpo 
aglutinante. 
 
AGLUTINAÇÃO DIRETA 
¢  O antígeno faz parte 
naturalmente da 
c é l u l a e s e r ã o 
utilizados anticorpos 
específicos contra 
um determinado 
a n t í g e n o p a r a 
aglutinar as células. 
 
AGLUTINAÇÃO DIRETA 
¢  Células bacterianas podem ser utilizadas como 
antígenos para a pesquisa de anticorpos em soros de 
pacientes à leptospirose, brucelose e salmonelose. 
 
30 – 90 min 
INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO DIRETA 
¢  A l g u n s a n t í g e n o s v i r a i s a g l u t i n a m 
espontaneamente determinados tipos de hemácias 
à hemaglutinina; 
¢  Identificação da presença de anticorpos que são 
inibidores dessa aglutinação e estão presentes no 
soro do paciente com a infecção; 
¢  Detecção de anticorpos contra o vírus da rubéola, 
sarampo, influenza e enterovírus. 
 
INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO DIRETA 
¢  O teste não distingue IgM de IgG à tratamento da 
amostra com 2-mercaptoetanol à redução de pelo 
menos dois títulos da inibição da hemaglutinação 
em relação ao soro não tratado; 
¢  Título é a maior diluição do soro estudado em que 
ocorre a visualização da reação Ag-Ac; 
 
 
Soro do paciente + 
A n t í g e n o v i r a l 
( h e m a g l u t i n i n a ) à 
incubação à adição da 
suspensão de hemácias 
à incubação à presença 
d e a n t i c o r p o s q u e 
impedem que o Ag de 
aglutinar as hemácias. 
AGLUTINAÇÃO INDIRETA 
¢  Adsorção de anticorpos ou de antígenos na 
superfície de micropartículas inertes (suporte) que 
não interferem na interação Ag-Ac; 
¢  Suporte: poliestireno (látex: carga –), gelatina, 
carvão e hemácias formolizadas ou taninizadas. 
 
 
AGLUTINAÇÃO INDIRETA 
¢  A aglutinação do látex pode ser observada a olho nu 
após dois a cinco minutos de homogeneização; 
¢  Métodos automatizados quantitativos podem ser 
utilizados: turbidimetria e nefelometria à perda da 
luz refletida pela superfície de uma partícula 
aglutinada. 
 
 
MICROAGLUTINAÇÃO 
¢  É realizada em meio líquido, em pequenos volumes, 
sendo comum o ensaio em microplacas de fundo U 
ou V; 
 
 
“tapete” “botão” 
¢  H e m a g l u t i n a ç ã o : 
hemácias de aves ou de 
mamíferos tratadas com 
ácido tânico (exposição 
de cargas residuais) + 
glutaraldeído (agente 
polimerizador); 
¢  S e m i q u a n t i t a t i v o : 
diluição seriada à 30 – 
90 min de incubação. 
 
 
MICROAGLUTINAÇÃO 
¢  Vantagens da hemaglutinação: 
 
 
¢  Fácil obtenção; 
¢  Baixo custo; 
¢  Boa estabilidade; 
¢  Superfície complexa que facilita a ligação de 
muitos antígenos; 
¢  Soluções estabilizadoras evitam reações 
inespecíficas; 
¢  Desvantagens da hemaglutinação: 
 
 
¢  Dificuldade de produzir lotes homogêneos; 
¢  Bioética. 
TESTE DE COOMBS 
¢  Os testes que utilizam a hemaglutinação indireta 
em imunohematologia; 
¢  Pesquisa e identificação de anticorpos contra 
antígenos eritrocitários à incompatibilidade 
sanguínea materno-fetal, anemias hemolíticas auto-
imunes , provas de compat ib i l idade pré -
transfusionais; 
¢  Baseia-se na capacidade de sensibilização das 
hemácias pelo anticorpo à a aglutinação só 
acontece com a adição de anti-IgG humana (soro de 
Coombs). 
 
 
TESTE DE COOMBS 
INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO INDIRETA 
¢  Adição de antígeno solúvel à amostra contendo 
anticorpos, visando o bloqueio dos respectivos sítios 
de ligação. 
 
 
FLOCULAÇÃO 
¢  Variante da aglutinação indireta; 
¢  A interação direta de anticorpos específicos com o 
antígeno pesquisado leva à formação de 
imunocomplexos em meio líquido, detectáveis com o 
auxílio de lupa ou microscópio óptico. 
 
 
Suspensão antigênica de 
cardiolipina, lecitina e 
colesterol à pesquisa de 
A c à a g r e g a d o s à 
colesterol é refringente. 
 
 
Atenção com o fenômeno pró-zona! 
DÚVIDAS???