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Sds Page 05fev2018 FINAL

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Prévia do material em texto

SDS-Page Technique
Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide
Laboratory of Molecular Biology and Endemic Diseases
Created by: Lara Riguetti
Introduction
SDS-PAGE separates molecules according to your molecular weight, based on 
their differential rates of migration through a sieving matrix (a gel) under the influence 
of an electric field applied.
1
2
3
4
Estudar para explicar sobre a imagem.
Principle
SDS coats the protein 
with a uniform negative charge, which masks the intrinsic charges on the R-groups. 
Role of SDS
Denaturant Gel X Native Gel
Adicionar explicação sobre o mercaptoetanol.
Polyacrylamide Gel
 
A mixture of two polymers: 
acrylamide and bis-acrylamide. 
 The acrylamide is a linear molecule, while the BIS-acrylamide is present in the form of "T".
Destacar a acrilamida e a bis dentro da imagem.
TEMED and APS 
 Ammonium Persulfate and TEMED are the initiators of the polymerization.
APS
(Ammonium Persulfate)
TEMED
(N,N,N’,N’ - tetramethylethane
- 1,2 - diamine)
Falar o nome Amônio de Persulfato.
The gel used is divided in
Buffer system and gel steps
Tris-Gly ph 8.3
Tris-HCL ph 6.8
Tris-HCL ph 8.8
What happens in the stacking and running gels?
Stacking Gel
Running Gel
Migration 
The molecules migrates differently along the gel.
Tomar cuidado com a expressão ”correm mais rápido”
After the submission of electrophoresis, the proteins "laid down" to gel with acetic acid.
 The most commonly used dyes having different protein detection limits are:
Silver Stain Kit Coomassie Brilliant Blue
R-250
G-250
Silver Stain
Coomassie Blue

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