Bloco 1 Aula 3 Resposta Gradual

Prévia do material em texto

Rio de Janeiro, 14/09/2016 
Aula 3: Relação dose-efeito em métodos de resposta quantitativa (gradual). 
O controle de qualidade visa atender uma serie de aspectos como o controle da identidade do fármaco, pureza, 
inocuidade (segurança), teor, potencia e também a eficácia. Então esses ensaios de segurança biológica buscam garantir 
principalmente a potencia e ficacia sendo que para algumas classes é possível determinar o teor. Muitas vezes a 
farmacopeia usa termos diferentes para determinar a potencia, muitas vezes fala de dosagem mas pensem assim, para 
garantir uma determinada potencia, você precisa garantir um determinado teor, então as vezes essas ensaios de resposta 
gradual procuram garantir que o teor esteja adequado, consequentemente a potencia seria garantida. 
Então o ensaio de controle de qualidade envolve uma serie de aspectos analíticos e eles são umpouco mais complexos 
especificamente quando se envolve uma classe de produtos que não pode ser caracterizada pelo ensaios ensaios físico 
químicos, e esses produtos são de origem biológica. As características físico químicas desses produtos não nos permite 
carcaterizar esses produtos no ponto de vista do controle de qualidade, isso porque são moléculas demasiadamente 
complexas, então é muito difícil estabelecer solubilidade, pH, ponto de fusão etc. Portanto quando se pensa em ensaios 
biológicos se pensa principalmente em produtos de origem biológica. 
So ressaltando essa historia da complexidade, aqui a gente tem uma comparação de duas moléculas, uma molécula de 
anticorpo e uma molécula da aspirina, então isso ilustra a complexidade de uma molécula de origem biológica, é uma 
molécula muito maior, com um peso molecular muito maior, consequentemente as características físico químicas são 
difíceis de serem determinadas. Isso porque eles são derivados de organismos vivos e consequentemente possuem uma 
estrutura bastante complexa e de alto peso molecular, então eles requerem esses controles que são esses ensaios 
biológicos. Então quando se fala em produto biológico se refere tanto a produtos que se originam de um material 
biológico e tanto a produtos que são originados de um processo biológico. Qual a diferença dessas duas situações? Um 
produto originado de um material biológico seria a insulina do pâncreas por exemplo. Qual seria a diferença da insulina 
isolada de um processo biológico? Seria a insulina recombinante. Aqui alguns exemplos de produtos biológicos (slide). 
 
Em relação as respostas biológicas elas podem ser divididas em duas categorias, as respostas do tipo gradual ou 
quantitativa e as respostas do tipo quantal ou qualitativa. Na resposta gradual a gente tem um aumento do efeito ne, a 
resposta biológica ela aumenta de intensidade a medida que se aumenta a concentração ou a dose da substancia teste, 
do fármaco, então o efeito é crescente em função de uma dose crescente. Consequentemente o que se mede nesses 
ensaios é a intensidade daquele efeito, ou seja, a intensidade daquela resposta biológica. Enquanto que no ensaio do tipo 
quantal o que se mede é a frequência com que o efeito ocorre, porque é um ensaio de tudo ou nada, ou aquela resposta 
esta presente ou ela não esta. Então um exemplo de um ensaio do tipo quantal seria a DL50 que é a dose letal para 
causar 50% de mortalidade, qual é a resposta biológica que se observa no ensaio para se determinar a mortalidade? A 
morte ne, ou morre ou não morre, é tudo ou nada, você não consegue quantificar a intensidade de morte. Já a resposta 
do tipo gradual um exemplo é uma droga que tem efeito analgésico, é possível se quantificar esse efeito, em humanos 
por exemplo você pode estabelecer um questionário onde o individuo responde uma serie de questões quanto a 
intensidade de analgesia ou dor que ele esta sentindo, isso você faria uma comparação entre a pessoa que recebeu o 
analgésico e a que não recebeu, baseado nesse questionário você pode chegar a uma pontuação e ai você consegue 
quantificar. Em animais de experiemntação também é possível quantificar um efeito analgésico ou antinflamtorio por 
exemplo, então em animais você consegue estimular um processo inflamatório na pata por exemplo que pode levar ao 
edema, quando a droga é administrada a tendência é a lesão sumir e ai dependendo do diâmetro você pode quantificar 
essa resposta, então quanto menor o edema maior o efeito do fármaco. 
Esses ensaios tem uma grande variabilidade de resposta e por isso é necessário o uso de padrões de referencia. 
 
As respostas biologicas ocorrem em função da reação do composto, do farmaco e um alvo biologico. Farmacocinetica é o 
que o corpo faz com a droga e farmacodinamica o que a droga faz com o corpo. Normalmente um farmaco não causa um 
efeito mas sim modifica algum que já ocorra. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Um exemplo de enzima alvo de fármaco é a ECA. 
Esses princípios da interação droga-receptor foram propostos em 1926 atraves de trabalhos que levaram a esse 
mecanismo geral de ação das drogas. Atraves de experimentos utilizando rã ele postulou esses princípios. Nesse 
experimento ele utilizou dois tipos de tecido, musculatura esquelética e também musculatura cardíaca. Esses 
experimentos foram realizados in vitro, coletou pequenas tiras do tecido e fez experimentos coma adição de um 
mediador, a acetilcolina. A acetilcolina na musculatura esquelética causa contração e na cardíaca causa relaxamento. 
Nessa época ele utilizou um sistema que chamamos de órgão isolado, esse equipamento consegue registrar a contração 
dos tecidos contrateis. O experimentou consistiu no seguinte, isso azul aqui representa uma cuba contendo meio 
nutriente e esse meio nutriente recebe temperatura e oxigenação para manter o tecido vivo, ele é amarrado ao fio da 
cuba e ao transdutor de pressão que é conectado ao software que ai consegue medir a concentração. A medida que ele 
foi adicionando concentrações crescentes de acetilcolina ele observou uma resposta contrátil. Ele utilizou um 
experimento semelhante so que agora com a musculatura cardíaca, quando add acetilcolina na musculatura cardíaca sem 
uma contração previa não se observa efeito algum, para que ele observa-se um efeito ele primeiro pr-e contraiu esse 
tecido e então estabeleceu uma tensão inicial e ai sim adicionou acetilcolina em concentrações crescentes e viu um efeito 
oposto, ao invés de ocorrer contração se observou um relaxamento. Quando ele passa esses resultados para um gráfico 
ele observa efeitos bastante semelhantes para acetilcolina tanto quando se usa a cardíaca quanto a esquelética, a curva 
concentração efeito é muito semelhante, de forma que a potencia em ambas as preparações é a mesma, nesse caso 
potencia é a CE50 (concentração efetiva para causar 50% de resposta). 
 
 
 
Para que o grafico tenha uma aparencia sigmoide é importante que a concentração da substancia sendo testada seja 
expressa em log, ou seja determinar o log dessas concentrações, se não se observa uma hiperbole. A vantagem de se 
trabalhar com essa escala logaritima é que voce consegue estabelecer uma região de linearidade.Uma escala linear não se 
apresenta um grafico tão linear como em uma escala logaritimica. Alguns parametros determinados por esse grafico são 
eficacia e potencia. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Esse grafico, a droga circulo vamos comparar com o losango, qual delas tem maior eficacia? As duas são eficazes mas a 
mais eficaz é a circulo, porque eficaz significa capacidade de gerar resposta maxima. E agora vamos falar de potencia, 
vamos comparar a droga circulo com a quadrado, a quadrado é mais potente, porque tem o mesmo efeito maximo com a 
menor concentração, não esta errado mas toda as vezes que se procura comparar potencia a gente não olha oefeito 
maximo, a gente olha a CE50, se olha a respota de 50%, o grafico que apresentar uma menor CE50 vai ser a com a maior 
potencia, nesse caso o que voces falaram não esta errado porque elas tem o mesmo efeito maximo mas isso nem sempre 
acontece. Um antagonista não tem eficacia, ele tem afinidade mas não tem atividade intrinseca. 
 
Considerando que o padrão é o gráfico preto e a amostra o rosa, o que vocês diriam em relação a amostra lilás? Estaria 
reprovada ou aprova no controle de qualidade nos quesitos eficácia e potencia? Estaria reprovada, a eficácia esta muito 
diferente, não da para admitir mais de 10% de diferença. Em relação a potencia ela também ficou muito difernete, 
inferior a 10% de diferença e seria reprovada. 
 
 
 
Aqui nos temos um experimento na aorta de ratos e a aorta se contrai na presença de agonistas alfa adrenergicos e sofre 
dilatação na presença de agonistas muscarinicos, então a gente tem aqui uma curva concentração efeito para adrenalina 
nessa preparação, concentrações crescentes de adrenalina são adicionas e se observa uma resposta contratil. Aqui para 
determinar a potencia se determina a CE50, concentração efeitva para 50% da resposta. Vamos supor que ao inves da 
adrenalina a gente usa um agonista muscanico e o objetivo do controle de qualidade é determinar a potencia, ele não 
causa contração mas se sabe que ele causa relaxamento, então se previamente essa preparação for contraida, por 
exemplo com adição de adrenalina, então adiciona previamente, vai contrair e ai adiciona a droga de interesse. Nesse 
caso concentrações crescentes do agonista muscarinico causa uma redução da resposta contratil e ai nesse caso a gente 
chama de CI50. Se fosse in vivo seria TI. 
 
Como eu falei para vocês existe uma serie de ensaios na farmacopeia, uns in vitro, alguns ex vivo, in vivo. Um exemplo de 
ensaio ex vivo é faz o tratamento por exemplo com o fármaco antiflamatorio e depois se coleta o tecido para quantificar o 
nível de mediadores inflamatório, mas isso não é um ensaio farmacopeico. In vivo são ensaios farmacopeicos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Aqui eu mostro alguns ensaios que estão descritos na farmacopeia a maioria deles de resposta gradual: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Falou que não vai precisar fazer gráfico na prova mas que tem que saber interpretar! 
Passou um exercício nessa aula, aquele que tinha que fazer gráfico e tinha o protocolo do experimento com histamina.