RADIOIMUNOENSAIO ppt

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Obtenção de Ac específico 
 
Marcação com I131
Medição da concentração no soro
Técnica de Dosagem de Insulina
Vantagens
 De competição com Ag marcado.
 De competição com Ac marcado.
 Sanduíche ou captura de Ag.
 Para detecção de IgE:
 Paper Radioimmunosorbent Test (PRIST).
 
TIPOS DE RIA
Inicialmente, antígenos adicionados
A seguir, acrescenta-se a amostra do paciente.
Os anticorpos específicos e marcados com o radioisótopo são acrescentados.
Se a amostra for positiva, haverá a formação do complexo Ag/Ac com o Ag do soro.
Quanto maior a quantidade de antígeno na amostra, maior será a ligação destes aos anticorpos, formando imunocomplexos, que serão retirados por lavagem e assim reduzindo a leitura da radioatividade.
DE COMPETIÇÃO COM Ac MARCADO
 Antígeno marcado
 Antígeno do soro
 Y Anticorpo marcado
Y
Y
Y
Inicialmente, uma quantidade conhecida de anticorpos específicos é adicionado
Y
Em seguida, adiciona-se o antígeno marcado com 125 I. 
Uma amostra de soro de um paciente suspeito é então acrescentada.
O antígeno, se presente no soro, compete com o antígeno radioativo pelos sítios de ligação nos anticorpos. 
A quantificação é feita em aparelho específico para a leitura de radioatividade. A concentração das moléculas antigênicas presentes na amostra é inversamente proporcional à leitura de radioatividade. 
DE COMPETIÇÃO COM Ag MARCADO
Y
Y
 Antígeno marcado
 Antígeno do soro
 Y Anticorpo específico
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Teste realizado em duas etapas:
Primeira etapa:
	1) Fixação de Acs não marcados na fase sólida.
	 
	4) Deverá ocorrer uma primeira lavagem para eliminação de componentes não específicos.
Segunda etapa:
	1) Acrescenta-se um segundo anticorpo específico e marcado, que formará o “sanduíche”.
	2) A formação do imunocomplexo será revelada por este segundo anticorpo. 
SANDUÍCHE OU CAPTURA DE Ag
	2) Adição da amostra (que contém Ag específicos contra o Ac fixado e outros componentes não específicos).
	3) Os Ac capturam os Ag específicos da amostra.
 Antígeno do soro Y Ac marcado
 Y Ac não marcado Componentes não
 específicos 
Y
Y
Y
Y
Anticorpos anti-IgE e não marcados são fixados na fase sólida.
Acrescenta-se o soro a ser pesquisado para a presença de IgE. Em caso positivo, haverá a união do anticorpo IgE + anticorpo anti-IgE.
Após lavagem para retirada do excesso de Ac não ligado, acrescenta-se anticorpos anti-IgE marcados com isótopo para que haja a revelação da amostra.
Após lavagem, procede-se com a leitura. A determinação da concentração de IgE total presente na amostra ocorrerá através de cálculo que relacionará os valores obtidos com uma determinada curva padrão.
PAPER RADIOIMMUNOSORBENT TEST (PRIST)
 Y Ag IgE da amostra 
 Y Ac anti-IgE marcado
 Y Ac anti-IgE não marcado
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
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Fim