citogenico clinico

Prévia do material em texto

Técnicas utilizadas para estudo 
citogenético clínico 
Prof. Dr. Bruno Lazzari de Lima 
Citogenética Clínica 
• Estudo do cromossomo aplicado à prática da 
genética médica. 
 
• 40 anos atrás – Distúrbios cromossômicos 
microscopicamente visíveis associados à 
doenças humanas. 
 
• Atualmente – Análises cromossômicas de alta 
resolução. 
 
Citogenética Clínica 
• Importante categoria da genética médica. 
 
• Contribuem para: 
– Perdas reprodutivas. 
– Malformações congênitas. 
– Retardo mental. 
 
• Mais de 100 síndromes identificáveis. 
– Em termos coletivos, superior aos distúrbios mendelianos monogênicos. 
 
• Distúrbios citogenéticos: 
– 1% dos nativivos. 
– 2% gestações de mulheres com mais de 35 anos. 
– 50% de todos os abortos espontâneos. 
Citogenética Clínica 
• Indicações para a Análise Cromossômica: 
– Problemas de crescimento e desenvolvimento 
iniciais. 
• Retardo no desenvolvimento. 
• Malformações múltiplas. 
• Baixa estatura. 
• Genitália ambígua. 
• Retardo mental. 
Citogenética Clínica 
• Indicações para a Análise Cromossômica: 
– Natimorto e morte neonatal. 
 
• 10% dos natimortos (0,7% nativivos). 
 
• 10% morte neonatal. 
 
Citogenética Clínica 
• Indicações para a Análise Cromossômica: 
– Problemas de fertilidade. 
• Mulheres com amenorreia. 
 
• Casais com história de infertilidade. 
 
• Abortos recorrentes. 
 
• 3% até 6% dos casais. 
Citogenética Clínica 
• Indicações para a Análise Cromossômica: 
– História familiar. 
• Anomalia cromossômica suspeita ou confirmada em 
um parente de primeiro grau. 
 
– Neoplasia. 
• Todos os cânceres estão associados a uma ou mais 
anomalias cromossômicas. 
 
Citogenética Clínica 
• Indicações para a Análise Cromossômica: 
– Gestação em uma mulher com idade avançada. 
• Mulheres com mais de 30-35 anos de idade. 
 
• Análise cromossômica fetal deve ser oferecida como 
uma parte rotineira dos cuidados pré-natais. 
– Células fetais derivadas do líquido amniótico. (amniocentese). 
– Biópsias das vilosidades coriônicas. 
– Países onde o aborto é possível ? 
Hibridização In Situ com Fluorescência 
• FISH (Fluorescent In Situ Hybridization). 
 
• DNA nos cromossomos metafásicos fixados em 
lâminas é desnaturado no local. 
 
• Sondas marcadas, são utilizadas na hibridização. 
 
• Lâmina é avaliada em um microscópio de 
fluorescência. 
 
Hibridização In Situ com Fluorescência 
• Sondas: 
– Sequências específicas de DNA. 
– É marcada de tal forma que permita ser detectada 
a sua presença. 
• Átomos radioativos . 
• Corantes fluorescentes. 
• Cromogênicos (substâncias incolores que produzem cor 
ao interagirem com um determinado meio). 
Hibridização In Situ com Fluorescência 
Hibridização In Situ com Fluorescência 
• Localização de um fragmento específico. 
 
• Localização de um braço ou de um 
cromossomo inteiro. 
 
• Hibridação genômica comparativa. 
 
• Cariotipagem espectral (SKY). 
Hibridização In Situ com Fluorescência 
• Localização de um fragmento específico. 
 
Hibridização In Situ com Fluorescência 
• Localização de um braço ou de um 
cromossomo inteiro. 
 
Hibridização In Situ com Fluorescência 
• Hibridação genômica comparativa. 
 
Hibridização In Situ com Fluorescência 
• Cariotipagem espectral (SKY). 
Hibridização de Células Somáticas 
• Técnica baseada no mapeamento por 
transferência cromossômica. 
– Segmentos inteiros de um cromossomo são 
transferidos de uma célula doadora para uma 
célula receptora. 
 
• Metodologia realizada em culturas celulares. 
 
Hibridização de Células Somáticas 
• Uma mistura de células somáticas de espécies 
diferentes é exposta a agentes que promovem 
fusão das membranas celulares. 
– Ex.: Células humanas e de camundongo. 
• Inicialmente o núcleo permanece separado. 
– Heterocárions. 
– Homocárions. 
• Após a mitose, temos a fusão dos núcleos. 
Hibridização de Células Somáticas 
• As posteriores divisões resultam na perda 
números variáveis de cromossomos humanos. 
 
• Assim teremos células filhas contendo números 
diferentes de cromossomos humanos. 
 
• Estudo por mandeamento permite definir quais 
cromossomos permaneceram em cada célula. 
Hibridização de Células Somáticas 
• Montagem de painéis de mapeamento de 
células somáticas híbridas. 
 
 
 
Hibridização de Células Somáticas 
• O painel pode ser usado para o mapeamento 
de um gene ou um segmento de DNA 
humano. 
• Assim é possível determinar em qual 
cromossomo encontra-se um determinado 
gene. 
 
 
Hibridização de Células Somáticas 
Sistema Internacional de Nomenclatura de 
Citogenética Humana 
• Em 1976, no Congresso Internacional de 
Genética Humana que ocorreu no México, foi 
criado um comitê internacional o “ISCN” – 
International System For Human Cytogenetic 
Nomenclature (Sistema internacional de 
nomenclatura dos cromossomos humanos). 
Sistema Internacional de Nomenclatura de 
Citogenética Humana 
• ISCN 1978 que resumiu todas decisões tomadas nas reuniões de 
Denver, Londres, Chicago e Paris. 
 
• ISCN 1981 que incorporou as técnicas de alta resolução. 
 
• ISCN 1991 com as recomendações para a citogenética das 
neoplasias. 
 
• SCN 1995 incluindo a nomenclatura para a técnica molecular de 
Hibridação in situ fluorescente (FISH). 
 
• ISCN-2005 com a inclusão de ideogramas com diferentes níveis de 
resolução e a nomenclatura da técnica de Hibridação in situ foi 
modernizada e a explicação simplificada. 
Sistema Internacional de Nomenclatura de 
Citogenética Humana 
• Classificação dos cromossomos em 7 grupos 
(A a G). 
 
• Descrição do cariótipo e das anomalias 
cromossômicas. 
 
• Identificação dos cromossomos individuais 
pelos métodos de bandeamento. 
 
 
Sistema Internacional de Nomenclatura de 
Citogenética Humana 
• A cada cromossomo é dado um número 
correspondente ao tamanho decrescente dos 
mesmos (exceção aos cromossomos 21 e 22). 
 
• identificados pela sua morfologia, 
correspondente as bandas de cada um. 
Sistema Internacional de Nomenclatura de 
Citogenética Humana 
Sistema Internacional de Nomenclatura de 
Citogenética Humana 
Sistema Internacional de Nomenclatura de 
Citogenética Humana 
• Cariótipo normais - 46,XX ou 46,XY. 
• Haplóide - 23,X ou 23,Y. 
• Monossomia - 45,XX,-7. 
• Trissomia - 47,XX,+21. 
• Mosaico - 46,XX/47,XX,+21. 
• Deleção - del(5)(q12q33). 
• Inserção - ins(3;3)(q21q26). 
• Translocação - t(9;22)(q34.1;q11).