relatorio DETERMINAÇÃO POR BRADFFORD

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Data: 14/09/2016
Bioquímica Fundamental e Experimental 21106NI_1
ALUNOS: Drielli Bubniak, Jéssica Muchinski, Maria Carolina e Michele Lau.
DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNA POR BRADFORD
1. OBJETIVO
Montar uma curva padrão utilizando concentração de proteína e encontrar a
absorbância utilizando o método de leitura de espectro a 450 nm e 595 nm.
2. METODOLOGIA
Albumina de soro bovino (BSA) é uma proteína globular (~ 66.000 Da) que é usada
em numerosas aplicações bioquímicas, devido à sua estabilidade e falta de interferência 
dentro de reações biológicas.
Figura 1: Tipos de BSA da Sigma-Aldrich, definidos pelos métodos de preparação.
.Fonte: Sigma-Aldrich.
Devido a sua alta estabilidade e por ser uma proteína com composição e peso bem
definidos, BSA é frequentemente utilizada como referência para quantificação de outras 
proteínas de peso desconhecido. (ANJOS, 2012)
O método de Bradford é baseado na interação entre o corante BG-250 e
macromoléculas de proteínas que contém aminoácidos de cadeias laterais básicas ou
aromáticas. No pH de reação, a interação entre a proteína de alto peso molecular e o
corante BG-250 provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para a forma aniônica,
que absorve fortemente em 595 nm. (Zaia,1998).
Figura 2: Estrutura química do CBB G250.
Fonte: (CAIXETA,2003)
O Bradford ou Coomassie brilliant blue atua na formação de complexos entre o 
corante Coomassie brilliant blue e proteínas, esse método é compatível com agentes 
redutores e incompatível rápida com detergentes.
3. MATERIAIS E MÉTODOS
3.1 Materiais e reagentes:
Tubos de ensaio;
Proteína BSA (1mg/L);
H2O;
Reagente Bradford;
Espectrofotometro;
Pipetas automáticas;
4. RESULTADOS
Tubo Vol. Padrão
de proteína
BSA (mL)
Vol. DeH2O
(mL)
Conc. (mg/L) Abs 450 nm Abs 595 nm
1 10 190 50 x x
2 20 180 100 0,140 0,203
3 30 170 150 0,087 0,437
4 40 160 200 0,065 0,562
5 60 140 300 0,122 0,526
Tabela 4.1 – Resultados obtidos na aula prática.
Gráfico 4.11 – Curva padrão obtida após analises no espectrofotometro.
5. DISCUSSÃO
No valor de 50 mg/L foi desconsiderada pois a medida obtida foi negativa.
6. CONCLUSÃO
Podemos concluir, que mesmo com a falta do valor de concentração de 50
mg/L,Todos os valores estão dentro da curva, ou seja, o método de Bradford é eficaz para
a quantificação de proteínas.
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
0
50
100
150
200
250
300
350
f(x) = 65x - 105
R² = 0,97
CURVA PADRÃO
Concentração mg/L
Ab
so
rb
ân
ci
a