T cnicas Microbiologia

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25/10/2015
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Disciplina: Instrumentação Biomédica
Profª Drª Ana Paula Rocha 
profanapaularocha@outlook.com
Outibro/2015
Técnicas de Diagnóstico Laboratorial
Microbiologia
A Microbiologia é classicamente definida
como a área da ciência que dedica-se ao
estudo de organismos que somente podem
ser visualizados ao microscópio.
Bactérias Fungos Vírus
Coleta da amostra em 
recipiente estéril.
Ao chegar ao laboratório a 
amostra é examinada 
diretamente.
Após a identificação 
microbiana é realizado 
o teste de sensibilidade 
aos antimicrobianos 
(TSA).
Após a incubação, os 
cultivos são 
examinados. Sistemas 
de identificação 
definitiva são 
utilizados.
As amostras são 
processadas, os 
meios de cultura são 
selecionados, 
inoculados e 
incubados.
Ciclo de diagnóstico em microbiologia (bacteriologia e micologia)Ciclo de diagnóstico em microbiologia (bacteriologia e micologia)
Podem ser feitas 
montagens, esfregaços 
e colorações.
O laudo é liberado.
Coleta da amostra para análise microbiológicaColeta da amostra para análise microbiológica
Todo resultado liberado pelo laboratório de microbiologia
depende de uma série de etapas, todas fundamentais.
Iniciando pela qualidade da amostra.
Instruções para coleta de amostras para bacteriologia:
O material coletado deve ser representativo do
processo infeccioso investigado (elegendo-se o melhor
sitio da lesão
Deve-se evitar a contaminação com as áreas adjacentes.
O material precisa ser coletado em recipiente estéril.
Coleta e transporte inadequadoColeta e transporte inadequadoColeta e transporte inadequadoColeta e transporte inadequado
Falhas no isolamento do agente etiológicoFalhas no isolamento do agente etiológicoFalhas no isolamento do agente etiológicoFalhas no isolamento do agente etiológico
Favorece o desenvolvimento da microbiota contaminanteFavorece o desenvolvimento da microbiota contaminanteFavorece o desenvolvimento da microbiota contaminanteFavorece o desenvolvimento da microbiota contaminante
Indução de um tratamento não apropriado.Indução de um tratamento não apropriado.Indução de um tratamento não apropriado.Indução de um tratamento não apropriado.
Profissional responsável pela coleta à Identificar deforma
correta e legível o material a ser encaminhado ao
laboratório de microbiologia.
Observação: sempre colocar a identificação no corpocorpocorpocorpo dodododo
recipienterecipienterecipienterecipiente que contem a amostra, nunca na tampa,
evitando identificar sobre códigos de barras.
Nome e registro do paciente.Nome e registro do paciente.Nome e registro do paciente.Nome e registro do paciente.
 Leito ou ambulatório e especialidade. Leito ou ambulatório e especialidade. Leito ou ambulatório e especialidade. Leito ou ambulatório e especialidade.
 Material colhido. Material colhido. Material colhido. Material colhido.
 Data, hora e quem realizou a coleta. Data, hora e quem realizou a coleta. Data, hora e quem realizou a coleta. Data, hora e quem realizou a coleta.
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Coloração de Coloração de GramGram (Coloração diferencial)(Coloração diferencial)
Método de coloração desenvolvido empiricamente pelo
bacteriologista dinamarquês, Christian Gram, em 1884.
Permite distinção entre diferentes bactérias que podem
mostrar uma morfologia similar, porém com propriedades
tintoriais diferentes, devido a composição da parede
celular.
A coloração de Gram classifica as bactérias em dois
grupos: Gram positivas e Gram negativas.
Técnica de coloração de Gram
1) Cobrir toda a lâmina com solução de cristal violeta,
aguardar um minuto e desprezar o corante na pia;
2) Cobrir a lâmina com lugol, aguardar um minuto,
desprezar o lugol na pia;
3) Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona até que não
haja desprendimento de corante (cerca de 30 segundos),
lavar a lâmina rapidamente em água corrente.
4) Cobrir a lâmina com fucsina de Gram e aguardar 30
segundos. Lavar, secar e observar em objetiva de imersão.
Gram positiva Gram negativa
Condições de cultivo
Para se cultivar microrganismos deve-se obedecer a
requisitos básicos obrigatórios: semea-los em meios de
cultura adequados e incubá-los em condições ambientais
igualmente adequadas (temperatura e teor de oxigênio).
Meios de Cultura
Meio de cultura é uma mistura de nutrientes necessários ao
crescimento microbiano.
Meios de Cultura
A constituição de um meio de cultivo adequado é bastante
variada e depende das exigências nutricionais do
microrganismo.
Os meios de cultivo são utilizados para o isolamento e
identificação de microrganismos, testes para controle de
esterilização ambiental, análise de alimentos e de água, etc.
Meios de Cultura
Meio enriquecedor ou enriquecido à É aquele que
permite o crescimento de microrganismos exigentes que
necessitam de fatores de crescimento.
Ex.: BHI, Ágar sangue.
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Meios de Cultura
Meio seletivo à É aquele que contém substâncias que
inibem o crescimento de certos microrganismos, sem
impedir o crescimento de outros.
Ex.: Ágar SS (Salmonella, Shigella)
Meios de Cultura
§ Meio diferenciador ou indicador à É empregado para
detectar colônias bacterianas com propriedades distintas.
Exemplos:
§As bactérias acidogênicas são conhecidas pela ação da cor
do indicador ácido-base adicionado ao meio.
§ Bactérias hemolíticas são visualizadas pelas alterações
produzidas no ágar sangue.
Meios de Cultura
§ Meio seletivo para bactérias Gram negativas
Agar EMB ou Teague
Agar MacConkey
Testes de Identificação Microbiana
§ Baseiam-se nas características bioquímicas dos
microrganismos e a capacidade de utilizar determinados
nutrientes para se desenvolver. São utilizados conjuntos de
testes diferentes para identificar as bactérias Gram positivas
e as Gram negativas.
Testes de suscetibilidade antimicrobiana 
(TSA) ou antibiograma
Testes utilizados para verificar o comportamento dos
microrganismos (sensibilidade ou resistência) in vitro,
frente a diversos antimicrobianos, para a escolha do
antimicrobiano ideal.
TSA
Resultados
§ Nortear a escolha do
agente antimicrobiano mais
adequado
§ Predizer a chance de
sucesso de um esquema
terapêutico.