INDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS CAUSADORES DE ONICOMICOSES ISOLADOS A PARTIR DE PACIENTES ATENDIDOS NO AMBULATORIO DE DERMATOLOGIA DA UNIVERSIDADE NOVE DE JULHO

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DIRETORIA DA SAÚDE II
Projeto Docente/ Iniciação cientifica
INDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS CAUSADORES DE ONICOMICOSES ISOLADOS A PARTIR DE PACIENTES ATENDIDOS NO AMBULATORIO DE DERMATOLOGIA DA UNIVERSIDADE NOVE DE JULHO
Pesquisadores: CLEDJA SOARES DE AMORIM CASTRO
Professores colaboradores: 
ALICE DE OLIVEIRA DE AVELAR ALCHORNE
MAURÍCIO MOTA DE AVELAR ALCHORNE
FERNANDA L. CASTANHO
ISABEL PRISCILA GARCIA
Alunos:XXXXXXXX
		
Linha de Pesquisa: ANALISES LABORATORIAIS
Grupo de Pesquisa: ANALISES CLINICAS-MICROBIOLOGIA CLINICA E MICOLOGIA CLINICA 
São Paulo
Setembro / 2014
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	TITULO DO PROJETO:
ESTUDO EPIDEMIOLOGICO DAS ONICOMICOSES DE PACIENTES ATENTIDOS NO AMBULATORIO DE DERMATOLOGIA DA UNIVERSIDADE NOVE DE JULHO
CLEDJA SOARES DE AMORIM CASTRO
 (Orientador)
Professores colaboradores: 
ALICE DE OLIVEIRA DE AVELAR ALCHORNE
MAURÍCIO MOTA DE AVELAR ALCHORNE
FERNANDA L. CASTANHO
ISABEL PRISCILA GARCIA
_________________________________
Profa. Dra. Regina Hassegawa
(Coordenadora do Curso de Farmácia)
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RESUMO
As onicomicoses são micoses superficiais e são caracterizadas por atingirem de forma superficial unha. Fungos agentes onicomicoses são conhecidos como dermatófitos, estes são fungos filamentosos porém, Leveduras e fungos filamentosos não dermatófitos são isolados com grande frequência.
De fácil contagio as onicomicoses são de ampla distribuição e a e a sua incidência varia de acordo com o clima, temperatura e umidade relativa do ar. Sendo assim, a distribuição dessas espécies varia no Brasil, de região para região, tendo este fato grande importância epidemiológica e terapêutica. Nas ultimas décadas tem se observado um aumento na incidência dessas micoses na população em geral. Vários motivos são apontados para explicar esse aumento, entre eles o uso abusivo de antibióticos, drogas citostáticas, além de drogas e doenças imunossupressoras e algumas carências nutricionais
O diagnóstico micológico com a identificação de isolados fúngicos em nível de espécie é de grande relevância, tendo em vista que esta informação pode ser muito importante para orientar o tratamento adequado. Além da descrição da epidemiologia dessas patologias em nosso meio, traçar fatores de riscos que estejam associados a esta alta na prevalência seriam objetos de estudo dessa pesquisa, para melhor entendimento da patogenia, prevenção e tratamento.
Palavras chaves: onicomicose, identificação, fatores de risco, prevalência.
INTRODUÇÃO
Onicomicose é a infecção das unhas por fungos os quais podem comportar-se como patógenos primários invadindo a placa ungueal saudável, ou secundários, instalando-se na placa pre-existente. É considerada a doença ungueal mais comum e constitui aproximadamente 30% das micoses cutâneas, representando 18% a 40% de todas onicopatias (2 ,10). 
As onicomicoses são consideradas um importante problema de Saúde pública, pela alta prevalência e pela dificuldade terapêutica, associada a taxas elevadas de recidiva e de evolução de cronicidade das lesões (1,8,9). Além do mais, as onicomicoses representam grande relevância clinica já gera prejuízo estético, baixa estima e reduzida capacidade funcional, até mesmo prejudicando o desempenho no trabalho. (6,8,9)
Os agentes etiológicos dessas micoses são representados por fungos leveduriformes (Malassezia spp., Trichosporon sp e Candida sp.) e fungos dermatófitos (Mycrosporum sp, Trichophyton sp e Epidermorphyton sp) e filamentosos não dermatofíticos (Piedraia hortae e Phaeoannelomyces werneckii) (5,1) Os fungos filamentosos dermatofíticos e as leveduras do gênero Candida, agentes das onicomicoses possuem a capacidade de digerir a queratina presente na unha, podendo desencadear ou não resposta inflamatória no hospedeiro. 
A distribuição das onicomicose varia conforme a região devido a grandes variações climáticas. Na cidade de São Paulo, existem poucos trabalhos recentes informando sobre o novo quadro epidemiológico das onicomicose a exemplo de Godoy et al.,(4) que verificaram entre julho de 1996 a dezembro de 1999 em amostras de unhas coletadas de 588 pacientes com diagnóstico presuntivo de onicomicose no Ambulatorio da Dermatologia e Micologia EPM \ UNIFESP. O diagnóstico de onicomicose foi confirmado em 247 desses casos. Os patógenos mais comuns isolados neste estudo foram leveduras em 52% das culturas positivas, seguido por dermatófitos em 40,6%;. Fungos não dermatófitos foram isoladas em 7,4% das culturas positivas.
Outros fatores que também propiciam a incidência e a propagação dessas micoses estão representados pelas condições socioeconômicas precárias, além de promiscuidade, sudorese, contato prolongado com animais domésticos, condições de higiene, entre outros. (7,3)
O estudo das onicomicose é de grande importância clínica devido à grande frequência nos últimos anos com que são diagnosticadas em clínicas dermatológicas e em ambulatórios vinculados a universidades com prestação de atendimento gratuito ao público em geral, podendo desencadear epidemias em alguns grupos populacionais, justamente por ser extremamente contagiosas. 
É importante ressaltar que o diagnóstico micológico com a identificação de isolados fúngicos em nível de espécie deve ser realizado, tendo em vista que esta informação pode ser muito importante para orientar o tratamento adequado tendo em vista que não é possível confirmar o diagnostico de onicomicose com base somente nas características clinicas das lesões. Além da descrição da epidemiologia dessas patologias, traçar fatores de riscos que estejam associados a esta alta na prevalência dessas micoses seria de grande relevância para melhor entendimento da patogenia, prevenção e tratamento.
2.0 JUSTIFICATIVA
O estudo dos agentes causadores de onicomicoses reveste-se de importância devido à grande frequência nos últimos anos com que são diagnosticadas em clínicas dermatológicas e em ambulatórios vinculados a universidades com prestação de atendimento gratuito ao público em geral, podendo desencadear epidemias em alguns grupos populacionais, justamente por ser contagiosas. É importante ressaltar que o diagnóstico micológico com a identificação de isolados fúngicos em nível de espécie deve ser realizado, tendo em vista que esta informação pode ser muito importante para orientar o tratamento adequado. Além da descrição da epidemiologia dessas patologias, traçar fatores de riscos que estejam associados a esta alta na prevalência dessas micoses seria de grande relevância para melhor entendimento da patogenia, prevenção e tratamento.
3.0 OBJETIVOS 
3.1. Geral
1-Investigar a prevalência de onicomicoses em pacientes atendidos no ambulatório de dermatologia da UNINOVE nos períodos de agosto de 2014 a agosto de 2016. 
2-Identificar os principais agentes etiológicos das onicomicoses dos pacientes atendidos no ambulatório de dermatologia da UNINOVE nos períodos de agosto de 2014 a agosto de 2016. 
3-Identificar fatores de riscos sociais associados à onicomicose
4- Identificar aspectos clínicos associados à onicomicose
 
4.0 MATERIAL E MÉTODOS
4.1. Local do estudo
O ambulatório de Dermatologia da universidade Nove de Julho-UNINOVE, é uma das áreas dentre muitas que prestam serviço à comunidade de forma gratuita. Atende uma demanda de 16 pacientes semanais distribuídos em dois dias da semana, com diferentes faixas etárias, gêneros e etnias que buscam soluções para diferentes queixas. O atendimento é desenvolvido por estudantes do curso de Medicina sob a orientação de professores da instituição 
4.2. Coleta de dados
Para a coleta de dados será elaborado um instrumento composto de duas partes. A primeira, para registro dos aspectos sociodemográficos e clinico dos pacientes e caracterização das amostras: número, idade, sexo, profissão atual, profissão anterior, trabalho em área rural, tempo de trabalho em área rural,entre outros (anexo 2) e a segunda parte, para o registro do resultado da análise microbiológica (anexo 3)
4.3. Procedimento Ético
O procedimento ético deste estudo foi guiado pela Resolução no 196/96 publicada no Diário Oficial da União de 10/10/1996 (Brasil. Ministério da Saúde,
1996) e que institui as Normas de Pesquisa em Saúde envolvendo seres humanos. O conteúdo da norma preconiza o atendimento às exigências éticas e científicas fundamentais.
A presente pesquisa foi submetida ao Comitê de Ética da Instituição sob o número 615.255datado em 14/04/2014. A coleta dos dados e das amostras serão obtidos após a obtenção da assinatura, pelo sujeito, do termo de consentimento informado ao participante. (anexo 1)
4.4. Coleta das amostras
As amostras analisadas serão os espécimes clínicos colhidos dos pacientes com suspeita de micose, que serão atendidos pelo Serviço de Ambulatório de Dermatologia da Universidade Nove de Julho (UNINOVE), no período de agostol de 2014 a agosto de 2016.
As amostras serão colhidas através de raspagem utilizando lâmina de Bisturi descartável.
O material será colhido em lâmina e encaminhado ao laboratório da UNINOVE localizado na unidade Vergueiro onde serão processados 
4.5- Identificação das amostras
O material biológico colhido será submetido a exame micológico direto sendo clarificado com KOH (20%) e examinado ao microscópio. Além disso, o material também será semeado em tubos com Ágar Sabouraud dextrose, contendo cloranfenicol e cicloheximide e Agar Mycosel, Os tubos serão incubados a 25°C, por pelo menos três semanas, com observações diárias a partir do terceiro dia de semeadura. 
Sua identificação será realizada com base nas características macromorfológicas e micromorfológicas das colônias que cresceram nos meios de cultura.
As informações que incluem a identificação das espécies será notificada a equipe médica do Ambulatório para tratamento e evolução do paciente.
4.6 Análise estatística-
Para análise estatística, será utilizado o programa Microsoft Excel da Microsoft. Variáveis categóricas serão analisadas através do teste Qui-quadrado e teste exato de Fisher. Considerando o valor de P < que 0,05 como significativo.
-REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁGICAS- 
1-Araújo AJG, Souza MAJ, Bastos OMP, Oliveira JC. Ocorrência de onicomicose em pacientes atendidos em consultórios dermatológicos da cidade do Rio de Janeiro, Brasil. An Bras Dermatol. 2003;78:299-308 (2)
2-Heneke E. Fungal infections of the nail. Semin Dermatol. 1991; 10:41-53 (1)
3-Lacaz CS, Porto E, Melo NT. Guia para identificação: fungos, actimomicetos e algas de interesse médico. São Paulo: Savier; 1998. p. 445. (11)
4-Patricio Godoy-Martinez, Fabiane G. Nunes,Jane Tomimori-Yamashita, Milton Urrutia, Luis Zaror, Victor Silva,Olga Fischman-Onychomycosis in São Paulo, Brazil. Mycopathologia, September 2009,Volume 168,Issue 3,pp 111-116 (14)
5-Schoeler, A.P.; Sguissardi, C.H.; Bernardi, E.; Cembranel, L.R.; Fuentefria, A.M- Prevalência de dermatófitos na rotina de micologia em hospital particular de médio porte na cidade de Chapecó, estado de Santa Catarina, Brasil. Rev Ciênc Farm Básica Apl.31(1):103-106, 2010 (16)
6-Scher RK. Onychomycosis is more than a cosmetic problem. Br J Dermatol. 1994:130:15 (7)
7-Silva D, Nazaré I, Rebello PB, Almeida MD, Morais F, Neves C. Incidência das micoses na Amazônia. An Bras Dermatol. 1981;56:187-8. (18)
8-Souza EAF, Mota VA, Almeida LMM, Rossi RM, Guilhermetti E, Svidzinski TIE.Frequency of onycomicoses caused by least in Maringa, Parana, Brazil. An Bras Dermatol. 2007;82:151-6 (6)
9-Van der Schroeff JG, Cirkel PK, Crijns MB, Van Dijik TJ, Govaert FJ, Groeneweg DA. A randomized treatament duration finding study of terbinafine in onychomycosis. Br J Dermatol, 1992; 126:36-9 (5)
10-Zanardi D, Nunes DH, Pacheco AS, Tubone MQ, Souza Filho JJ. Evaluation of the diagnostic methods of onycomycosis. An Bras Dermatol. 2008; 83:119-24 (2a)
ANEXO 1
TCLE - Termo de Consentimento Livre e Esclarecido para Participação em Pesquisa
Nome do Voluntário:______________________________________________ 
Endereço:______________________________________________________ 
Telefone para contato:__________________Cidade:________________
CEP:_______ E-mail: ____________________________________
As Informações contidas neste prontuário foram fornecidas pela Prof. Dra. CLEDJA SOARES DE AMORIM CASTRO objetivando firmar acordo escrito mediante o qual, o voluntário da pesquisa autoriza sua participação com pleno conhecimento da natureza dos procedimentos e riscos a que se submeterá, com a capacidade de livre arbítrio e sem qualquer coação.
1. Título do Trabalho Experimental: ESTUDO EPIDEMIOLOGICO DAS ONICOMICOSES DE PACIENTES ATENTIDOS NO AMBULATORIO DE DERMATOLOGIA DA UNIVERSIDADE NOVE DE JULHO
2. Objetivo: observar a prevalência onicomicoses e seus agentes, como também detectar fatores de risco associadas a patologia 
3. Justificativa: Colaborar para o conhecimento, controle, e diminuição de contaminação de onicomicose no nosso ambiente
4. Procedimentos da Fase Experimental: para a coleta de dados será elaborado um instrumento composto de duas partes. A primeira, para registro dos aspectos sociodemográficos e clinicos do paciente e caracterização da amostra (questionários, certa de 5 min.): número, idade, sexo, profissão atual , profissão anterior, trabalho em área rural, tempo que trabalhou em área rural, tempo que parou de trabalhar em área rural, aspecto e local da lesão, uso tópico ou sistêmico para a lesão, doença de base, dificuldade circulatória em membro inferior, trauma inicial no local da lesão, uso de antibióticos, uso de corticoides, uso de anti-neoplasicos, familiares com micoses que compartilham a mesma casa. Segunda parte, para o registro do resultado da análise micológica. Os voluntários passarão por coletas micológicas que não são invasivas ou dolorosas, tratando-se da raspagem da lesão com uso de bisturi. As coletas serão realizadas no mínimo uma vez em cada paciente e repetidas quando necessário.
5. Desconforto ou Riscos Esperados: Os voluntários não serão submetidos a riscos, e o desconforto mínimo em raspar as lesões, além de nenhum constrangimento em realizar o procedimento ou em responder ao questionário.
6. Informações: Qualquer dúvida ou informação relacionada à pesquisa pode ser respondida via os pesquisadores envolvidos. E após publicação da pesquisa os voluntários podem ser informados dos resultados obtidos.
7. Retirada do Consentimento: os voluntários ficam livres, a qualquer momento, para desistir de participar da pesquisa sem que haja prejuízo para ambas às partes.
8. Aspecto Legal:
O procedimento ético deste estudo foi guiado pela Resolução no 196/96 publicada no Diário Oficial da União de 10/10/1996 (Brasil. Ministério da Saúde, 1996) e que institui as Normas de Pesquisa em Saúde envolvendo Seres Humanos. O conteúdo da norma preconiza o atendimento às exigências éticas e científicas fundamentais.
9. Garantia do Sigilo: os pesquisadores via o firmamento por este TCLE com o voluntário, garantem o sigilo do indivíduo participante, ao qual será atribuído um código, usado para preservar o anonimato durante o processamento das amostras e elaboração dos dados estatísticos. Durante a publicação dos dados, nenhuma informação pessoal sobre os voluntários também será citada.
11. Formas de Ressarcimento das Despesas decorrentes da Participação na Pesquisa: não haverá despesas a serem ressarcidas pelos pesquisadores ao voluntário participante, será de forma gratuita e sem financiamentos.
12. Local da Pesquisa: A pesquisa será desenvolvida na unidade Vergueiro da UNINOVE. 
Endereço do Comitê de Ética da Uninove: Rua. Vergueiro nº 235/249 – Liberdade – São Paulo – SP CEP. 01504-001 Fone: 3385-9198
13. Contato do Pesquisador: Prof. Dra CLEDJA SOARES DE AMORIMCASTRO
 (011) 981417422. cledja@uninove.br
14. Consentimento Pós-Informação: 
Eu, ________________________________________________, após leitura e compreensão deste termo de informação e consentimento, entendo que minha participação é voluntária, e que posso sair a qualquer momento do estudo, sem prejuízo algum. Confirmo que recebi cópia deste termo de consentimento, e autorizo a execução do trabalho de pesquisa e a divulgação dos dados obtidos neste estudo no meio científico.
* Não assine este termo se ainda tiver alguma dúvida a respeito.
São Paulo, de de 2014.
Nome (por extenso):______________________________________________
Assinatura:_____________________________________________________
1ª via: Instituição
2ª via: Voluntário 
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ANEXO 2
Ambulatório de Dermatologia
Exame Micológico
Nome do Paciente_____________________________________Nº________Nº Protocolo____
Idade_____________Gênero F( ) M ( ) Profissão atual____________________________
Profissão anterior____________________________________________________________________
Doença de Base: Diabético sim( ) Não ( ), Imunossuprimido sim( ) não ( ) 
Tabagismo sim ( ) Não ( ) Outros_______________________________________________________
Deficiência circulatória em membros inferiores sim ( ) Não ( )
Local da lesão_______________________________________________________________________
Aspecto da lesão________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Trauma inicial no local Sim ( ) Não ( )
Uso tópico sim( ) Não ( ), qual_________________________________________________________________________
Uso sistêmico sim ( ), Não ( )________________________________________________
Uso de antibioticos sim ( ) Não ( ) . Qual______________________________________
Uso de corticoides sim ( ) Não ( ) . Qual_________________________________________
Uso de drogas anti-neoplasicas sim ( ) Não ( )_____________________________________
Outros ______________________________________________________________________
Ocupação rural sim( ) Não ( ), Qual________________________________________________________________________
Tempo que trabalhou___________. Há quanto tempo parou____________________________
Familiares com micoses que convivem na mesma casa_______________________________
Convivência com animais sim ( ) Não ( ) Qual____________________________________
Compartilha esmalte sim( ) Não ( )
ANEXO 3
NOME DO PACIENTE__________________________________Nº________
Data da coleta_______
Amostra______________________________________
Exame micológico Direto__________________________________________
Cultura_________________________________________________________
Agente etiológico________________________________________________
CRONOGRAMA DE EXECUÇÃO
	Cronograma de atividades
	Jan/14
	Fev/14
	Mar/14
	Abril/14
	Mai/14
	Jun/14
	Jul/14
	Ago/14
	Set/14
	Out/14
	Nov/14
	Dez/14
	Coleta de material
Identificação das colônias 
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	2 Coleta de material
Identificação dos agentes de micoses de pele
3-Identificação de fatores de riscos
Discussão dos resultados
	
	
	
	
	
	
	
	X
	X
	X
	X
	X
	Cronograma de atividades
	Jan/15
	Fev/15
	Mar/15
	Abril/15
	Mai/15
	Jun/15
	Jul/15
	Ago/15
	Set/15
	Out/15
	Nov/15
	Dez/15
	1- Coleta de material
2- Identificação do agente das micoses de pelo
3-Identificação de fatores de riscos
Discussão dos resultados
	
	
	X
	X
	X
	X
	X
	
	
	
	
	
	1- Coleta de material
2-Identificação dos agentes de onicomicos 
3- Identificação de fatores de riscos
Discussão dos resultados
	
	
	
	
	
	
	
	X
	X
	X
	X
	X
	Cronograma de atividades
	Jan/16
	Fev/16
	Mar/16
	Abril/16
	Mai//16
	Jun/16
	Jul/16
	Ago/16
	
	
	
	
	1- Coleta de material
2-Identificação das colônias suspeita de 
3- Identificação de fatores de riscos
Discussão dos resultados 
4- analises Estatísticas
	X
	X
	X
	X
	X
	X
	X
	X
	
	
	
	
 
Plano de trabalho
Além das atividades descritas no cronograma acima, os alunos participantes deste projeto passarão por adequação e treinamento das técnicas experimentais;
Reuniões periódicas com o orientador, onde serão debatidos assuntos relacionados aos projetos, apresentação de seminários, e treinamento para apresentação em eventos científicos.
 PREVISÃO ORÇAMENTÁRIA
Departamento: Saude II
Projeto de Pesquisa: ESTUDO EPIDEMIOLOGICO DAS ONICOMICOSES DE PACIENTES ATENTIDOS NO AMBULATORIO DE DERMATOLOGIA DA UNIVERSIDADE NOVE DE JULHO
Responsável pelo projeto: CLEDJA SOARES DE AMORIM CASTRO
 
	
	
	
	
	
	
	Material de consumo / equipamento
(Sugestão de modelo e marca)
	Previsão Orçamentária
Valor aproximado
	Marcas
	Existente na UNINOVE
	Necessária Aquisição
	Quantidade
Necessária
	CORTADOR DE UNHA
	10
	UNHEX
	( x ) Sim ( ) Não
	NÃO
	1
	Tubo de ensaio de 10 mL
	200,00
	Quimibras, PROLAB, LABSYNTH,
Dinamicaquimica,
ABC-LAB
	( x ) Sim ( ) Não
	Não
	600
	Ciclohexamide - solução injetável
	70,00
	BD
	( ) Sim ( x ) Não
	SIM
	1 uni
	Mascara descartáveis
	100
	TNT
	( x ) Sim ( ) Não
	Não
	2 cx
	Lamina de microscopio
	250,00
	Bioslide
	( x ) Sim ( ) Não
	Não
	10 cx
	tubos de ensaio de 20 mL
	200,00
	Bioslide
	( x ) Sim ( ) Não
	Não
	200
Cycloheximide 
	
	200,00
	BD
	( x ) Sim ( ) Não
	SIM
	1kg
	Agar Mycosel com chlorafenicol e cychlohexamide
	200,00
	BD
	( ) Sim ( X ) Não
	SIM
	1kg
	Agar Fubá
	150
	SIGMA
	( x ) Sim ( ) Não
	SIM
	1kg
	Agar Dixon-Kimming
	170
	SIGMA
	( x) Sim ( X ) Não
	SIM
	1kg
	Agar Batata 
	150,00
	SIGMA
	( x ) Sim ( ) Não
	Sim
	500g
	API Candida system to the ID 32C system
API Candida system to the ID 32C system
	3.000
	Biomerieux
	( x ) Sim ( ) Não
	Sim
	3 cx
	Lamina de Bisturi n.15
	200,00
	SOLIDOR
	( x ) Sim ( ) Não
	Sim
	100
	Azul de algodão -lactofenol
	50,00
	interlab
	( x ) Sim ( ) Não
	Sim
	100g
	succinato sódico de CLORANFENICOL para solução injetável
	70,00
	NOVAFARMA
	( x ) Sim ( ) Não
	Sim
	100g
	Tesoura pequena 
	10
	UNHEX
	( x ) Sim ( ) Não
	Não
	3
	Caixas de luvas DE PROCEDIMENTO-VINIL-tam P
	40,00
	BLUESAIL
	( x ) Sim ( ) Não
	Sim
	2 CX
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
Total:4.130,00