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Diagnóstico Laboratorial de DENGUE, ZIKA VÍRUS, FEBRE CHIKUNGUNYA Profa. Dra. Alessandra Xavier Pardini Disciplina: Imunologia Clínica Fonte: Ministério da Saúde Sinais e Sintomas Dengue, a Febre Chikungunya, Zika vírus • O vírus da Dengue e da Zika pertencem à mesma família, são Flavivirus • Vetor transmissor, mosquito Aedes aegypt • Podem apresentar sintomas bem parecidos = dificuldade para o diagnóstico clínico • Diagnóstico através de exames laboratoriais, não é muito diferente Ciclo de Vida - vetor Características do mosquito DENGUE • Doença viral. • Transmissão vetor Aedes aegypti. • Brasil, foi identificada pela primeira vez em 1986. • Há registros de transmissão vertical (gestante - bebê) e por transfusão de sangue. • Existem quatro tipos diferentes de vírus do dengue: DEN-1, DEN-2, DEN-3 e DEN-4. • Pode ser assintomática, leve ou causar doença grave, levando à morte. Normalmente, a primeira manifestação da dengue é a febre alta (39° a 40°C), de início abrupto, que geralmente dura de 2 a 7 dias, acompanhada de dor de cabeça, dores no corpo e articulações, prostração, fraqueza, dor atrás dos olhos, erupção e coceira na pele. • Na fase febril inicial da doença pode ser difícil diferenciá-la. • Não existe tratamento específico. • Diagnóstico de dengue hemorrágica. ZIKA VÍRUS • Doença viral aguda • Transmissão vetor Aedes aegypti • Características: exantema maculopapular (erupção cutânea) pruriginoso (coceira), febre intermitente (temperatura elevada), hiperemia conjuntival (aumento da quantidade de sangue) não purulenta e sem prurido, artralgia (dor nas articulações), mialgia (dores musculares) e dor de cabeça. • Evolução benigna e os sintomas geralmente desaparecem espontaneamente após 3-7 dias • Isolado pela primeira vez em primatas não humanos em Uganda, na floresta Zika em 1947, por esse motivo esta denominação • Entre 1951 a 2013, evidências sorológicas em humanos foram notificadas em países da África, Ásia, Oceania, Américas, Europa • Não há tratamento específico – usar dipirona e paracetamol ZIKA VÍRUS e a Gestante • Gestantes devem tomar cuidado – uso de roupas compridas, aplicar repelente. • Buscar auxilio em Unidade Básica de Saúde para iniciar o pré-natal assim que descobrir a gravidez. • Tomar todas as vacinas indicadas para gestantes. • Relatar ao médico qualquer sintoma ou medicamento usado durante a gestação. • Levar sempre a caderneta da gestante • Microcefalia é uma malformação congênita, em que o cérebro não se desenvolve de maneira adequada (perímetro cefálico menor que o normal, igual ou inferior a 32 cm). • Confirmado pelo Ministério da Saúde, Brasil. • Investigação e estudos sobre o tema (interesse mundial). • Síndrome de Guillain-Barré (fraqueza muscular e paralisia dos músculos), pode apresentar diferentes graus de agressividade, provocando leve fraqueza muscular em alguns pacientes ou casos de paralisia total dos quatro membros. • Ano de 2015 foram registrados 2.975 casos suspeitos de microcefalia, de acordo com o último boletim epidemiológico divulgado pelo Ministério da Saúde naquele ano, sendo que uma das principais suspeitas é que o surto esteja relacionado à infecção pelo Zika vírus durante a gravidez. FEBRE CHIKUNGUNYA • Doença viral aguda • Transmissão vetor Aedes aegypti e Aedes albopictus • No Brasil, a circulação do vírus foi identificada pela primeira vez em 2014. Chikungunya significa "aqueles que se dobram" em swahili, um dos idiomas da Tanzânia. Refere-se à aparência curvada dos pacientes que foram atendidos na primeira epidemia documentada, na Tanzânia, localizada no leste da África, entre 1952 e 1953. • Sintomas: febre alta de início rápido, dores intensas nas articulações dos pés e mãos, além de dedos, tornozelos e pulsos. Pode ocorrer ainda dor de cabeça, dores nos músculos e manchas vermelhas na pele. • Não há tratamento específico – medicação para a febre (paracetamol) e as dores articulares (antiinflamatórios). EPIDEMIOLOGIA Monitoramento dos casos de dengue, febre de chikungunya e febre pelo vírus Zika. • Em 2016: Dengue: 1.054.127 casos prováveis de dengue no país • Em 2015, foram notificados no país 38.332 casos prováveis de febre de chikungunya. • Em 2016, até a SE 16, foram notificados 120.161 casos prováveis de febre pelo vírus Zika no país. Boletim Epidemiológico Secretaria de Vigilância em Saúde − Ministério da Saúde − Brasil | Volume 47 − 2016 | Testes de Diagnóstico • Os testes de diagnóstico são ferramentas auxiliares ao diagnóstico. • Para acompanhamento de uma determinada condição ou tratamento. • Podem ser (bio)químicos. Diagnóstico Laboratorial Dengue 1) Antígeno NS1 para Dengue 2) Detecção dos anticorpos dos tipos IgG (memória imunológica) e IgM (fase aguda da infecção) = correspondem à resposta de defesa do nosso organismo à invasão dos vírus. 3) Testes Moleculares – RNA PCR: RNA é o material genético dos vírus. Amplifica o material genético. Antígeno NS1 para Dengue • É uma glicoproteína que é produzida durante o metabolismo do vírus da Dengue, e, portanto, reflete a atividade viral. • Resultado positivo significa que existe vírus ativo no sangue e isso serve como evidência para o diagnóstico da doença. • O Antígeno NS1 pode ser detectado a partir do 1º. dia após o início dos sintomas até aproximadamente o 10º. dia. Diagnóstico de DENGUE: a partir de suspeita clínica. Teste rápido para agilizar a confirmação da infecção e medidas de controle serem introduzidas. Aprovados pelo Ministério da Saúde, e licenciados pela ANVISA. O teste rápido de Dengue incorpora a detecção do antígeno NS1 (pode ser detectado logo após os sintomas) em amostras de sangue, além de pesquisar a positividade para Imunoglobulinas de classe IgG e IgM (a partir do 6. dia) simultaneamente. Testes Rápido para Dengue – Pesquisa de anticorpos (Ig) – IgM (fase aguda) e IgG (memória imunológica) Pesquisa de anticorpos IgM e IgG • Anticorpos correspondem à resposta de defesa do nosso organismo à invasão dos vírus – aderem aos vírus na tentativa de neutraliza-los e, portanto, quando presentes no sangue, são evidências de infecção pelo vírus específico para o tipo de anticorpos. • Os anticorpos do tipo IgM aparecem logo no início da doença, entre o 4º. e o 7º. dia, permanecendo detectáveis no sangue em torno de 15 a 30 dias. • Os anticorpos do tipo IgG aparecem um pouco mais tarde no sangue e podem permanecer detectáveis por um tempo muito maior, que varia de meses até muitos anos, dependendo do tipo de doença. • A limitação da pesquisa de anticorpos é que, dependendo da semelhança entre os vírus, podem apresentar reações cruzadas; ou seja, podem estar positivos para mais de um tipo de doença, apesar de somente uma estar acontecendo. Teste ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Pesquisa de anticorpos IgM e IgG Teste de Imunofluorescência Indireta – pesquisa de anticorpos IgM e IgG Teste Molecular (ou RNA PCR – reação da cadeia da polimerase) • Vírus RNA (material genético dos vírus) – determina um fragmento do RNA do vírus e amplifica para que possa ser detectado com maior facilidade. • A sequência genética dos vírus é única e por este motivo não apresenta reatividade cruzada, sendo o teste mais específico e eficaz para o diagnóstico das três viroses. • O fragmento genético dos vírus não permanece detectável no sangue por muito tempo, mas apenas no início da doença,até o 5º. dia após o início da sintomatologia, o que deixa o teste limitado ao período para a colheita da amostra. • Recentemente, foram desenvolvidas técnicas para a pesquisa do vírus na urina, em especial para o Zika vírus. Os estudos mostraram que na urina o material genético do Zika vírus pode permanecer detectável por um período mais prolongado, até o 10º. dia. Teste com diagnóstico simultâneo de zika, dengue e chikungunya irá facilitar identificação em todo o país • Instituto de Biologia Molecular do Paraná (IBMP) e quatro unidades da Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz) - facilita a identificação, (sintomas similares), reduz os custos. • O Kit NAT discriminatório para dengue, zika e chikungunya permitirá a identificação ao mesmo tempo do material genético dos três vírus durante a manifestação dos sintomas clínicos destas infecções, evitando a necessidade de três testes separados. • Outra vantagem é que seu resultado é obtido mais rapidamente, pois oferece uma combinação pronta de reagentes. KIT de Biologia Molecular Técnica 1. Desnaturação: 94ºC – 96ºC Separa a dupla fita do template em duas fitas simples 2. Pareamento: 37ºC – 65ºC Primers ligam-se em locais específicos do DNA molde 3. Extensão: 72ºC DNA polimerase usa os dNTPs adicionando-os a nova fita de acordo com a regra de pareamento – polimerização. Aplicação dos Testes Laboratoriais para Diagnóstico de Dengue, Zika, Chikungunya Testes aprovados pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) para o diagnóstico de infecções pelo vírus da Zika, vírus da dengue e pelo vírus da Chikungunya. Vacina contra dengue • A vacina contra dengue é uma vacina criada para prevenir a manifestação do vírus. • Variações da vacina contra dengue: – atualmente apenas uma vacina foi licenciada no Brasil, a desenvolvida pela empresa francesa Sanofi Pasteur. – Feita com vírus atenuados e é tetravalente, ou seja, protege contra os quatro sorotipos de dengue existentes. – Possui a estrutura do vírus vacinal da febre amarela, o que lhe dá mais estabilidade e segurança. Observação: Vacinas com o vírus atenuado são aquelas que diminuem a periculosidade do vírus, garantindo que ele não cause doenças, mas sejam capazes de gerar resposta imunológica, fazendo com que o organismo da pessoa reconheça o vírus e saiba como atacá-lo quando a pessoa for exposta a sua versão convencional. • A eficácia na população acima de 9 anos é de, aproximadamente, 66% contra os quatro sorotipos de vírus da dengue. Isso significa que em um grupo de cem pessoas, 66 evitariam contrair a doença. • Além disso, reduz os casos graves – aqueles que levam ao óbito, como a dengue hemorrágica – em 93% e os índices de hospitalizações em 80%. • Além dela, o Instituto Butantan está testando uma nova vacina feita no Brasil. • Feito com vírus atenuados e está na terceira fase de testes, em que mais de 17 mil voluntários serão observados: dois terços deles receberão a vacina verdadeira e um terço receberá um placebo. Antes ela passou por testes clínicos nos Estados Unidos em 600 pessoas e depois em São Paulo por mais 300. O plano de fazer os testes agora em todo Brasil é garantir que as pessoas estudadas tenham contato com todos os sorotipos da doença. Pediatra Isabella Ballalai (CRM: 52.48039-5), presidente da Sociedade Brasileira de Imunologia (SBIm). Sheila Homsani (CRM-RJ: 534.941), diretora médica da Sanofi Pasteur, divisão de vacinas. Site Minha Vida Criadouros do Vetor Medidas de Controle VIGILÂNCIA EPIDEMIOLÓGICA NOTIFICAÇÃO: por ser uma doença de notificação compulsória, todo caso suspeito deve ser comunicado, pela via mais rápida, ao Serviço de Vigilância Epidemiológica mias próximo • Definição de caso • Diferenças - diagnóstico AX, PARDINI Perspectivas • Desde 2014, a Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz), em parceria com o Ministério da Saúde, desenvolve o projeto “Eliminar a Dengue: Desafio Brasil” que propõe o uso de uma bactéria naturalmente encontrada no meio ambiente, inclusive no pernilongo, chamada Wolbachia - é capaz de impedir a transmissão da dengue pelo mosquito. • Desenvolvimento de vacina para Dengue e Zika. • Desenvolvimento de soro e anticorpos específicos para tratamento de Zika. • Desenvolvimento de terapias para as consequencias neurológicas da infecção pelo Zika. Bibliografia: *DENGUE, *FEBRE AMARELA, *MALÁRIA - Isabel Cristina Alves, Laboratório de Investigação Médica, LIM 49 Doenças Exantemáticas – Turchi, M. Dengue situação atual e desafios, Ministério da Saúde, Coelho, GE – Coordenador da CGPNCD, Secretaria de Vigilância Sanitária LENZI MF & COURA LC, Prevenção da dengue: a informação em foco, Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 37(4):343-350, jul-ago, 2004. Dengue – Guidelines for Treatment of Dengue Fever, WHO, 1999 Dengue – Manual de Enfermagem Adulto e Criança, Ministério da Saúde, Brasília DF, 2008. http://portalsaude.saude.gov.br/index.php/perguntas-e-respostas-zika - consulta em 25/05/2016. Boletim Epidemiológico Secretaria de Vigilância em Saúde − Ministério da Saúde Volume 47 N° 20 - 2016 ISSN 2358-945 Consulta – Ministério da Saúde, Ministério da Educação, Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação – Plano Nacional de Enfrentamento ao Aedes aegypti e a microcefalia. (consulta em maio 2016). FERREIRA, AW. Diagnóstico Laboratorial das Principais Doenças Infecciosas e AutoImunes, Guanabara, 2013. Ministério da Saúde – guias, atualizados – Dengue. Diagnóstico diferencial de Dengue, Zika, Cikungunya. Boletim Epidemiológico - Dengue, Zika, Cikungunya. (2015 e 2016) Entrevista: diretora-geral da OMS, Margaret Chan - 01/02/2016 - 16h46min | Atualizada em 02/02/2016 - 12h32min Engenharia Genética – Reação da Cadeia da Polimerase – consulta em 2016. Kits para diagnóstico – Vascim prevenção e saúde. – consulta em 2016. Atualização em maio de 2016. Figuras disponíveis na internet. OBRIGADA! Contato: pardini@uni9.pro.br
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