Espectroscopia de UV de AA aromáticos Relatório

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Introdução
A espectroscopia é o termo utilizado para se referir a toda a técnica de levantamento de dados físico-químicos através de transmissão, absorção ou reflexão da energia radiante incidente em uma amostra. A partir da espectroscopia pode se compreender as interações da luz com a matéria de determinando o espectro de absorção de um composto é possível saber a sua concentração em uma amostra. A determinação da concentração de uma substância/soluto pode ser feita pela quantidade de luz que ela absorve em um determinado comprimento de onda do espectro. Essa determinação segue os príncipios da Lei de Lambert-Beer, em que uma certa solução absorve a luz proporcionalmente à concentração molecular do soluto que nela encontra, o que significa que “a intensidade de um feixe de luz monocromático decresce exponencialmente à medida que a concentração da substância absorvente aumenta aritmeticamente.”
 Objetivo
 O objetivo do presente trabalho foi realizar uma varredura em espectofotômetro de amostras contendo como soluto dois aminoácidos aromáticos: Triptofano e Tirosina, para visualizar a faixa de comprimento de onda que esses aminoácidos absorvem e qual o pico de absorção desses aminoácidos no espectro. Através da leitura das amostras Através da leitura, também foi verificado a relação absorvância/concentração para amostras com diferentes concentrações de soluto. 
Métodos
 Na preparação das amostras para a leitura, foram usadas duas soluções padrão de aminoácidos: S1= Tirosina 50mM e S2= Triptofano 10mM. Essas amostras foram inicialmente diluidas.
 As soluções foram diluídas segundo:
S1- Diluição da solução padrão de 10x: 100uL de sol. padrão + 900uL de água;
S2- Diluição da solução padrão de 20x: 50uL de sol. Padrão + 950uL de água.
 Após, foi preparado em uma placa de 96 poços as soluções que seriam lidas no espectofotômetro. As soluções na placa foram preparadas de acordo com a tabela:
	Tubos
	S1 diluída
	H2O destilada
	B
	-
	200Ul
	1
	200uL
	-
	2
	100uL
	100Ul
	3
	50uL
	150Ul
	4
	25uL
	175Ul
Quadro 1: Preparação de soluções de diferentes concentrações S1 para leitura em espectofotômetro. 
	Tubos
	S2 diluída
	H2O destilada
	B
	-
	200Ul
	1
	200Ul
	-
	2
	100uL
	100Ul
	3
	50uL
	150Ul
	4
	25uL
	175Ul
Quadro 2: Preparação de soluções de diferentes concentrações S2 para leitura em espectofotômetro.
No espectofotômetro, foram lidos os seguintes poços:
	
	1
	2
	3
	4
	5
	6
	7
	8
	9
	10
	11
	12
	A
	B
	1
	2
	3
	4
	
	
	
	
	
	
	
	B
	B
	1
	2
	3
	4
	
	
	
	
	
	
	
	C
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	D
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	E
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	F
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	G
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	H
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
Quadro 3: Poços usados para leitura em espectofotômetro. A solução S1 foi pipetada na linha A e a solução S2 foi pipetada na linha B.
Resultados
 Após a varredura obtivemos através do software do leitor um gráfico de comprimento de onda por absorbância, para se analisar qual o comprimento a amostra absorvia. Além disso, calculamos as concentrações das amostras diluidas de S1- Tirosina e S2- Triptofano. São elas:
	Tubo
	Concentração S1
	1
	5 mM
	2
	2,5 mM
	3
	1,25 mM
	4
	0,625 mM
Quadro 4: Concentrações das soluções S1 preparadas para leitura.
	Tubo
	Concentração S2
	1
	0,5 mM
	2
	0,25 mM
	3
	0,125 mM
	4
	0,0625 mM
Quadro 5: Concentrações das soluções S2 preparadas para leitura.
 
Figura 1: Varredura em espectofotômetro das soluções S1. O eixo x representa o comprimento de onda em nm e o eixo y representa a absorbância.
 Figura 2: Varredura em espectofotômetro das soluções S2. O eixo x representa o comprimento de onda em nm e o eixo y representa a absorbância.
Figura 3: Gráfico de concentração de S1 ,expressa em mM, pela absorbância (Abs).
Figura 3: Gráfico de concentração de S2 ,expressa em mM, pela absorbância (Abs).
Discussão
 Após a análise dos dados, podemos concluir que o pico de maior absorção das amostras e por consequência de aminoácidos aromáticos é no comprimento de onde de 280nm. Uma explicação para essa observação poderia ser a de que os anéis aromáticos presentes em tirosina e triptofano precisam de uma maior energia para excitar seus eletrons quando comparados a outros aminoácidos que não possuem o grupamento aromático. 
 Outra conclusão que podemos inferir é a de que quanto maior a concentração de soluto de uma amostra, maior será sua absorbância. Baseado na Lei de Lambert-Beer podemos dizer que a quantidade de soluto na solução interfere na luz que transpassa a amostra, absorvendo-a. Dessa forma cria-se uma diferença entra a luz emitida pelo aparelho e a luz captada após transpassar a amostra. Essa diferença representa a absorbância. 
Referências
VOET, Donald; VOET, Judith G. Bioquímica. 4. ed. Porto Alegre, Artmed, 2013.
Nelson, David L.; COX, Michael M. Princípios de bioquímica de Lehninger. Porto Alegre: Artmed, 2011. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2014.
 www.fcav.unesp.br/Home/.../fundamentos-de-espectrofotometria-uv-visivel-2012.pdf