Bmol 06 Eletroforese

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03/03/2017
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Prof. Dr. Tarcísio Carvalho
Tema
 Eletroforese
03/03/2017
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Biologia Molecular - Eletroforese
 Eletroforese em gel
- Método que permite visualização de segmentos de DNA
- Pode ser empregado géis de agarose (mais práticos) ou géis de
poliacrilamida (mais refinados).
- A constituição dos géis é semelhante a uma esponja, cujos orifícios
servem de passagem para moléculas de DNA.
- De acordo com o tamanho das moléculas, ocorre variação da taxa de
migração quando submetidas a um campo elétrico.
- Fragmentos de DNA de tamanhos diferentes assumem posições
diferentes quando submetidas às mesmas condições (carga elétrica e
tempo de eletroforese)
Biologia Molecular - Eletroforese
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Biologia Molecular - Eletroforese
Biologia Molecular - Eletroforese
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Biologia Molecular - Eletroforese
Biologia Molecular - Eletroforese
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Biologia Molecular - Eletroforese
Eletroforese em gel - Objetivos
- Verificação da qualidade de extração de DNA (integridade)
- Visualização de segmentos de DNA amplificados por PCR →
verificação de qualidade da amplificação.
- Visualização de fragmentos de DNA gerados após PCR /
digestão com endonucleases de restrição → reconhecimento
de sítios de corte das enzimas, podendo ser aplicado para
presença/ausência de mutação.
- Visualização de deleção/ inserção em fragmento de DNA de
tamanho conhecido.
Biologia Molecular - Eletroforese
● Eletroforese em gel – Objetivos
Reação com endonucleares
Qualidade do DNA extraído Inserção / deleção
Qualidade da PCR
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Biologia Molecular - Eletroforese
Eletroforese em gel - Objetivos
- Fragmento de PCR → 420 pb
- Estudo de mutação / Sítio de enzima (GC|CG)
- Presença da mutação → reconhecimento do sítio e corte do
fragmento
- Ausência da mutação → não reconhecimento e fragmento
íntegro
C
ATGGTGTTTTAGG|CGTATCGATGCGTAGTCGTGATGCTAGTG – 420 pb
ATGGTGTTTTAGC CGTATCGATGCGTAGTCGTGATGCTAGTG
130pb 290pb
1 2 - sem corte homozigoto
3 - com corte heterozigoto
4 - com corte homozigoto
420
290
130