4 Aula Meios de Cultura

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MEIOS DE CULTURA DE
MICRO-ORGANISMOS
Prof. Viviane C. Longuini
Disciplina Microbiologia
Meios de Cultura
- Conjunto de substâncias, formuladas de maneira adequada, capazes de promover o
crescimento bacteriano, em condições de laboratório.
- A maioria das bactérias pode ser cultivada em laboratório, utilizando-se meios
nutrientes;
- Diferentes espécies de bactérias, variam extensivamente quanto as exigências
mínimas de substâncias nutrientes;
Meios de Cultura Características Básicas dos Meios deCultura:
Fonte de Carbono e Nitrogênio;
Fonte de Energia;
Sais Minerais;
Fatores de Crescimento;
Condições Físicas;
Esterilização.
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MEIOS DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
SÓLIDOS
- Usa ágar, um polímero de galactose como agente solidificante na
concentração de 1,35 a 2,0%
- Funde-se à 100ºC, Líquido à 40ºC e sólido à 37ºC
- São feitos em frascos, placas de petri e tubos de ensaio.
SEMI-SÓLIDOS
- Usa ágar, como agente solidificante na concentração de 0,2 à 0,75%
.- Funde-se à 100ºC, Líquido à 40ºC e Semi-sólido à 37ºC
.- São feitos em tubos de ensaio
MEIOS DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
LÍQUIDOS
- São os meios isentos de ágar.
- São sempre líquidos mesmo até a 37ºC e em temperaturas
inferiores.
- São feitos em tubos de ensaio.
MEIOS DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA Seleção dos Meios de Cultura:
A escolha dos meios de cultura, para o processamento inicial das
amostras é muito importante e está condicionada à flora patogênica
desse local;
Em geral é usado mais de um tipo de meio, no sentido de fornecer
condições de crescimento a todos os patógenos possíveis de estarem
presentes;
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Seleção dos Meios de Cultura:
Para cada caso em particular, existem os meios utilizados
rotineiramente na semeadura primária;
Atualmente, o procedimento mais utilizado é a aquisição de meios
pré-fabricados e fornecidos de forma desidratada, onde é necessário
apenas a pesagem criteriosa da quantidade necessária ao volume
desejado, seguido de dissolução e esterilização.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS COMPLEXOS
- São meios quimicamente indefinidos, mas tem como função similar ao
ambiente natural da bactéria.Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.
MEIOS SINTÉTICOS
- São meios de composição química conhecida. São utilizados para estudo
de necessidades nutricionais de determinadas bactérias. Ex: Meio para
micobactérias.
MEIOS DIFERENCIAIS
- São meios que permitem a distinção (diferenciação) entre dois
ou mais tipos de bactérias pelas simples observação das características
apresentadas pelas suas colônias que neles se desenvolvem.
- Os meios diferenciais permitem o crescimento de várias espécies ao mesmo
tempo, que facilita a discriminação entre os diferentes microrganismos.
- Exemplo: Mac Conkey: Permite a distinção entre bactérias fermentadoras da
lactose (lactose positiva - apresenta colônias rosa) e
bactérias não fermentadora (lactose negativa - apresenta colônias incolor)
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS SELETIVOS
- São meios cuja composição promovem e/ou inibem o crescimento de um
determinado microrganismo ou grupo de microrganismos. Os meios seletivos
proporcionam o meio pelo qual podemos isolar uma determinada
espécie ou categoria de bactérias.
- São usadas substâncias seletivas como os corantes tais como cristal violeta,
azul de metileno, eosina e verde brilhante.
- Ex. MacConkey além de seus nutrientes contém cristal violeta e sais biliares
que inibe o crescimento de bactérias Gram- positivas e permitindo o
crescimento de Gram-negativas.
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CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO
- São meios utilizados para isolar um microrganismo de um meio em que
está presente em pequena quantidade.
- São meios enriquecidos com sangue, soro ou outros nutrientes.
- Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.
MEIOS DE TRANSPORTE
- São meios utilizados para o transporte e manutenção de amostras
biológicas como fezes e secreções.
- São meios inertes, pois, permitem a viabilidade da maioria dos patógenos
sem alterar a sua concentração.
- Exemplo: Meio de Stuart ou Amies usado para o transporte com swabs.
Exemplo: Meio Cary-Blair e salina glicerinada tamponada útil no transporte
de fezes para o isolamento de shigella e Salmonella.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DE MANUTENÇÃO
- São meios utilizados para a preservação das bactérias para a realização de
exames complementares para estudos futuros como pesquisa clínica,
epidemiológica ou educacional.
- Exemplo: Caldo TSB, caldo nutriente, água destilada.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
- Curto período de tempo: temperaturas de 2 a 8ºC ou de 4 à 10ºC
(refrigerador): duração por semanas. Fazer subculturas em caldo TSB ou
caldo nutriente.
- Longo período de tempo:temperaturas de -70 à -196ºC.
- Duração por anos (1 até 10 anos).- Nitrogênio líquido: (-196ºC )-
- Freezers: (-70 à -120ºC) temperatura ultra baixa.
- Liofilização: congelamento à seco.
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CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DE IDENTIFICAÇÃO
- São meios utilizados na identificação das bactérias Gram-positivas e Gram-
negativas.
- Exemplos: EPM (fermentação da glicose e produção de gás), MILI testes
de motilidade (indol e descarboxilação da lisina) para identificação de
Enterobactérias (Gram-negativas) e
Rugai Ágar Bile esculina. Identificação de Gram-positivas.
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO:
- o crescimento de bactérias é visualizado pela formação de colônias.
MEIO SEMI-SÓLIDO:
- o crescimento de bactérias é visualizado pela
turvação.Meio muito utilizado para verificar a motilidade (movimento) da
bactéria.
MEIO LÍQUIDO:
- o crescimento de bactérias é visualizado pela turvação do meio.
MEIO SÓLIDO
- COLÔNIAS:
- são milhares de células bacterianas derivadas de uma única célula
bacteriana semeada na superfície do ágar.
- TEMPO PARA VISUALIZAÇÃO DAS COLÔNIAS:
- Maioria dos microrganismos cresce de 12 à 48 horas.- Outros exigem
semanas e até meses.
CRESCIMENTO MICROBIANO MEIO SÓLIDO
- Exemplos: Ágar Sangue, Ágar chocolate, Ágar MacConkey, Ágar SS
(Salmonela-Shigella), Ágar VB (Verde-Brilhante), Ágar CLED (Cisteína,
Lactose e Eletrólitos Deficientes), Ágar Base, Ágar Citrato de Simmons,
Ágar Nutriente, Ágar TSI (Triplice Açúcar e Ferro), Ágar Müller Hinton, etc...
MEIO SEMI-SÓLIDO
- Exemplos: Ágar SIM (Motilidade Indol Sulfeto) etc....
MEIO LÍQUIDO
- Exemplos: BHI (Infusão de cérebro e coração), Tetrationato, Selenito,
Uréia, etc...
CRESCIMENTO MICROBIANO
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Presença / ausência de E.coli e coliformes
em amostras de água
Técnica líquida.
Aparência típica de microrganismos
E.coli → Liquido azul para Verde
Coliformes Outros → líquido amarelo
AquaCHROM ™
CHROMagar Orientação ™
Para o isolamento e diferenciação de
patógenos do trato urinário.
Aparência típica de microrganismos
E.coli → vermelho
Enterococcus → azul turquesa
Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter → azul
metálico
Proteus → halo marrom
E.coli CHROMagar ™
CHROMagar ™ ECC
Para a detecção simultânea e enumeração
de E. coli e outros coliformes em amostras
de alimentos ou água.
Aparência típica de microrganismos
E.coli → Azul
Outros Coliformes → Vermelho
Outras bactérias → incolores ou inibida
Para a detecção e enumeração de E.coli
em amostras de alimentos e água.
Aparência típica de microrganismos
E.coli → azul
Outras bactérias gram negativas → incolor
Gram positivos → inibidos
CHROMagar ECC ™ Liquid
CHROMagar Salmonella ™Plus
Para a detecção simultânea e enumeração
de Paratyphi e Salmonella lactose positiva
agora é necessário em microbiologia de
alimentos pela norma ISO 6579:2002.
Aparência típica de microrganismos
Salmonella(incluindo S. Typhi, S.
A Paratyphi e Salmonella lactose positiva)
→ Mauve
Para a detecção simultânea e
enumeração de E. coli e outros coliformes
em amostras de alimentos ou água.
Aparência típica de microrganismos
E.coli → Azul
Coliformes Outros → Vermelho
Outras bactérias → incolores ou
inibida.
Exemplos de meios específicos
 Agar Batata – Leveduras
 Agar Bismuto Sulfito –
Salmonella spp (centro
negro, borda clara e brilho
metálico)
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Exemplos de meios específicos
 Ágar Cled – Gran Positivo e
Gran Negativo
 EMB (Eosina Azul de
Metileno) – Seletivo para Gran
Negativo
 Agar Loeffler – isolamento de
Corynebacterium diphtheriae
CONDIÇÕES FÍSICAS PARA A CULTURA
DAS BACTÉRIAS
- TEMPERATURA
- pH
- ATMOSFERA GASOSA
- PRESSÃO OSMÓTICA
- PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- LUZ
TEMPERATURA
- Psicotróficos: 0 à 7ºC – Comum em contaminação de laticinios
(Aeromonas, Klebsiella, Pseudomonas, Staphylococcus, Vibrio )
- Psicrófilos: 0 à 20ºC - ambientes marinhos
- Mesófilos: 20 à 45°C - bolores e leveduras
- Termófilos: 45 à 90°C – Bacillus e Clostridium
- A maioria são mesófilas.- Temperatura ótima: 36,5 a 37°C em
estufa bacteriológica.
TEMPERATURA
- pH (potencial Hidrogenionico)
- Acidófilos: pH 0,1 à 5,4 - Bactérias láticas, acéticas,
Bacillo, Clostridium)
- Neutrófilos: pH 5,4 à 8,5 (estreptococos )
- Alcalófilas: ph 7,0 à 11,5
- A maioria na faixa de 4,0 a 9,0. Ideal: próximo da neutralidade 6,8 a 7,2
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PRESSÃO OSMÓTICA
- Meios hipertônicos: as bactérias perdem água e
sofrem plasmólise ou enrugamento da célula.
- Meios isotônicos: concentrações iguais, é o
mais recomendado.
- Meios hipotônicos: as células ganham água e
sofrem lise.
LUZ
- Bactérias fotossintetizantes – Cianobactérias, Deinococcus e
Thermus
- Bactérias fotossensíveis. Streptococcus mutans causador da cárie
PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- Água dos oceanos e lagos exercem pressão hidrostática.
- Bactérias barófilas: vivem em alta pressão profundidade.
ATMOSFERA GASOSA
- Microrganismos aeróbios: 21% de oxigênio
- Jarra de microaerofilia para microrganismos que necessitam de
CO2.
- Microrganimos anaeróbios facultativos: crescem na presença de ar
ou anaeróbiose.
- Microrganimos microaerófilos: Não resistem á níveis de oxigênio (1-
15%).
TEMPO
- Aumento no número da população na cultura: 1→2→4→8→16...
Progressão geométrica : 1→2¹→2² →2³ →24 → ... 2n
- n = número de gerações, portanto, 2n = número total de células em
uma cultura.
- De 30 em 30 minutos para cada geração.
- PERÍODO DE INCUBAÇÃO: 24 (trilhões) a 48 horas em estufa
bacterilógica.