COLORAÇÃO DE GRAM

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COLORAÇÃO DE GRAM
O método de Gram baseia-se no fato de que quando certas bactérias são coradas pelo o cristal violeta (corante azul) e depois tratadas pela solução de iodo–iodetada (lugol), forma-se um composto de coloração escura entre o iodo e o corante, que é fortemente retido por um grupo de bactérias e não pode ser removido pelo descoramento subseqüente com o álcool – gram positiva.
OBJETIVOS
Aprender a preparar esfregaço de bactérias;
Realizar a técnica de Coloração de Gram;
Aprender o fundamento do método de coloração de Gram;
Permitir a observação da morfologia bacteriana e fornecer informações a respeito do comportamento do seu material celular diante dos corantes de Gram
INTERPRETAÇÃO
     O mecanismo da coloração de Gram se refere à composição da parede celular, sendo que as Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicano e ácido teicóico, e as Gram-negativas, uma fina camada de peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos. Durante o processo de coloração, o tratamento com álcool-acetona extrai os lipídeos, daí resultando uma porosidade ou permeabilidade aumentada da parede celular das bactérias Gram-negativas.
    Assim, o complexo cristal violeta-iodo (CVI) pode ser retirado e as bactérias Gram-negativas são descoradas. A parede celular das bactérias gram-positivas, em virtude de sua composição diferente, torna-se desidratada durante o tratamento com álcool-acetona, a porosidade diminui, a permeabilidade é reduzida e o complexo CVI não pode ser extraído.
MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM:
1. Cubra o esfregaço com cristal de violeta e deixe por aproximadamente 1 minuto;
2. Escoraa o corante e lave em um filete de água corrente;
3. Cubra a lâmina com lugol e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;
4. Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;
5. Adicione álcool-acetona sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante;
6.  Lave em um filete de água corrente;
7. Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
8. Lave em um filete de água corrente;
9. Deixe secar ao ar livre;
10. Coloque uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço
11. Leia em objetiva de imersão (100x)
RESULTADO:    Bactérias Gram-positivas: roxo
 Bactérias Gram-negativas: rosa/vermelho
	Soluções em ordem de aplicação
	Gram positivas
	Gram negativas
	1- Cristal violeta – CV
	Células coradas em violeta
	Células coradas em violeta
	 2- Solução de iodo (lugol) – I
	Formação do complexo CV-I no interior das células, que permanecem violetas
	Formação do complexo CV-I no interior das células, que permanecem violetas
	3- Álcool
	Desidratação das paredes celulares, diminuição da porosidade e da permeabilidade: o complexo CV-I não pode sair das células que permanecem violetas.
	Extração dos lipídios da parede celular, aumentando a porosidade: O complexo CV-I é removido das células
	4- Safranina
	As células não são afetadas, permanecendo violetas.
	As células tomam o corante, tornando-se vermelhas.