CART Imunologia

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01) Cite CART
As células T de antígeno quimérico são moléculas de engenharia que combinam um domínio de reconhecimento de antígenos com um ou mais domínios de sinalização de células T intracelulares. Usando técnicas de transferência de genes, os CARs podem ser incorporados de forma estável em células T redirecionando sua especificidade, através de um mecanismo independente do MHC, para direcionar antígenos de tumores específicos. Os componentes do domínio de sinalização CAR intracelular são importantes para a funcionalidade das células CART e são um sitio de modificação em evolução.
CART são moléculas complexas com a característica única de poderem se auto amplificar e persistir em pacientes tratados. Portando, as células T derivadas do próprio sangue do paciente (autólogo) ou derivadas de uma pessoa saudável (alogênica), são geneticamente modificadas para expressar um receptor de células T artificial, através do qual são direcionadas para células desodorizadas independentemente do envolvimento do MHC.
*02) Explique CART e sua função*
Na abordagem CART, os linfócitos geneticamente modificados são projetados para expressar um receptor sintético composto por um fragmento variável de cadeia simples extracelularmente expresso (scFv) de um anticorpo monoclonal, que é conectado através de um ligador transmembranar aos domínios de sinalização intracelular de co-receptores tais como CD3 e CD28. A porção scFv do CAR é específica para um antígeno de superfície (por exemplo, CD19). Isso permite que o CAR evite as interações convencionais entre o TCR e o MHC, ativando assim, a célula após o reconhecimento do antígeno alvo.
Para desencadear mecanismos de morte de células T, as CART devem ser ativadas através do reconhecimento de antígenos. O processo de ativação mais utilizado é independente da apresentação do antígeno e envolve a cultura de células T com grânulos revestidos com fragmentos de anticorpo CD3 / CD28, juntamente com suplementos de IL-2. Enquanto as células T são naturalmente ativadas em resposta à apresentação de antígenos a curto prazo, a sinalização sustentada pode causar exaustão, levando a uma perda de capacidade proliferativa e citotoxicidade. Portanto, seria benéfico garantir a ativação, mas limitar o esgotamento através do uso de biomateriais personalizados.
 
As células T são isoladas do sangue do paciente ou de um doador, ativadas e, então, geneticamente modificadas para expressar CAR. Após a expansão ex vivo das células CART, elas são formuladas no produto final. O paciente sofre quimioterapia condicional ou o produto da CART é infundido diretamente.
A superfície de uma célula T ao entrar em contato com seu antígeno na célula tumoral expressa TCR e quatro tipos de receptores de antígenos quiméricos (CARs), exibindo fragmento variável de cadeia simples (scFv) como domínio de ligação. Citocinas pró-inflamatórias ou ligandos co-estimuladores expressos pelas células CAR T também serão expressados.
Os produtos da CART concentram-se de dois ou mais tipos de células de fácil segmentação com especificidades de antígenos distintas. As células T Multi-CAR abrigam várias moléculas de CAR com diferentes especificidades de antígenos. Além disso, as CART podem ser equipadas com genes ou interruptores suicidas (por exemplo, iCasp9) permitindo a ablação de células CART.
Alternativamente, alguns estudos se concentraram na funcionalidade de ajuste do próprio CAR. Por exemplo, os CARs foram projetados com domínios de sinalização de divisão e reconhecimento, que podem ser vinculados a uma única administração funcionalmente ativa do CAR após administração de medicamentos. Esta molécula pequena serve como um interruptor para a atividade CAR, permitindo que seja controlado ou inativado conforme necessário. As afinidades de CAR também podem ser manipuladas para se ligar preferencialmente às células cancerosas sobre tecidos saudáveis, evitando assim os efeitos fora do alvo e diversificando a gama de antígenos que podem ser direcionados com segurança. 
03) Defina suas aplicabilidades, justificando sua aplicação.
A transferência adotiva de células CART emergiu como uma abordagem imunoterapêutica extremamente promissora para o tratamento de neoplasias malignas de células B e a versatilidade notável desta técnica torna potencialmente aplicável a uma ampla gama de doenças humanas. As terapias de células CART geralmente utilizam células T autólogas (do próprio paciente), uma vez que as terapias alogênicas podem apresentar maior risco de reações imunogênicas. A maioria dos ensaios clínicos de células CART atuais usam células T coletadas dos próprios pacientes. A terapia com células CART começa com o procedimento de leucaférese para isolar PBMCs (células mononucleares do sangue periférico humano). O tratamento prolongado com anticoagulantes durante a leucaférese pode representar problemas devido ao tempo que os pacientes estão conectados a um dispositivo externo. 
O uso de CART no tratamento contra o câncer usa células próprias do sistema do paciente, chamadas células T, as quais serão modificadas para melhor reconhecer e matar o câncer do paciente. Este tipo de tratamento transfere um sistema imunológico para o paciente que é capaz de matar imediatamente o câncer. A parte de compartimento das células celulares protege-se pelo fato de a célula ter sido reconhecida como célula especifica, assim como se tornar altamente ativada para matar as células cancerígenas. Uma vez no corpo, as células CART podem crescer até grandes quantidades, persistirem por longos períodos de tempo, e fornecem um controle uniforme e uma possível proteção contra a recorrência.
04) Denomine e explique as possíveis falhas para o uso de CART.
Uma variedade de desafios biológicos limitou a ampla aplicabilidade clínica da terapia com CART. O processo terapêutico pode ser complicado por eventos adversos graves, incluindo síndrome de liberação de citocinas, neurotoxicidades e, no caso de direcionar a CD19, aplasia de células B. Estes apresentam preocupações significativas, embora as opções de tratamento padrão, como quimioterapia e HSCT (transplante de medula óssea), tenham efeitos colaterais igualmente graves, incluindo toxicidade aguda e risco de doença. 
Além disso, recentes tentativas de tratar tumores sólidos com as células CART produziram resultados fracos, em parte devido a populações heterogêneas de células CART que realizaram inconsistentemente e, em alguns casos, não conseguiram persistir no corpo. Provou ser difícil encontrar antígenos alvo adequados para tumores sólidos, e são necessárias estratégias para melhorar a penetração de células T no microambiente do tumor. Além disso, o cansaço e a diferenciação das células T são preocupantes com a falta de persistência in vivo. Enquanto os problemas que surgem principalmente da biologia celular estão atualmente sendo abordados, ainda há necessidade de melhorar os paradigmas e os processos de fabricação para garantir que a terapia com CART pode ser traduzida de maneira casual.
Síndrome de Liberação de Citocinas: O CRS é uma resposta inflamatória sistêmica que se correlaciona com a ativação e expansão de células CART in vivo. O início do CRS é tipicamente 1-14 dias após a infusão. A síndrome pode ser auto-limitada ou mais grave, exigindo intervenção com terapia anti-citocina direcionada. O CRS manifesta-se inicialmente com sintomas semelhantes a gripe e febre que pode escalar rapidamente até 40,5 ° C. Infelizmente, a progressão para hipotensão potencialmente fatal, hipoxia e disfunção de órgãos finais pode ocorrer junto com óbitos relacionados ao tratamento. 
Toxicidade Neurológica: Semelhante ao CRS, os eventos neurológicos ocorrem nas primeiras semanas de terapia e foram relatados em todos os estudos resumidos. Os eventos observados incluem encefalopatia, delírio, déficits focais e convulsões geralmente auto-limitadas. A neurotoxicidade pode estar associada a níveis mais elevados de pico de IL-6, IFN-ɤ, ferritina e CRP do que os encontrados em pacientesnão afetados. Níveis elevados de IL-6 e TNF-α no dia 1 após infusão CART correlacionaram-se de forma independente com o desenvolvimento de toxicidade Gr 4. A patogênese da toxicidade neurológica não é clara e pode ser multifatorial. 
Aplasia de células B: uma expectativa de alvo, mas sem toxicidade do tumor com anti CD19 CARTS é a aplasia de células B. Conforme previsto em pacientes com persistência funcional de CARTs anti-CD19, observou-se aplasia de células B e hipogamaglobulinemia associada. A recuperação da função normal das células B ocorre com a perda de CARTs. De fato, a aplasia de células B pode ser usada como um marcador biológico para a atividade das células CART. 
Existem dois efeitos adversos significativos que podem ocorrer após a terapia com células CART, potencialmente graves: síndrome de libertação de citoquinas (CRS) e complicações neurológicas. Pacientes com CRS geralmente desenvolvem febre, erupção cutânea, dor de cabeça e alterações na pressão arterial.
Os sintomas dos sintomas de neurologia variam de dores de cabeça a confusão, delirium e convulsões. Considerou que os sintomas dos sintomas podem ocorrer dentro de minutos ou horas, eles podem ser vistos dias depois. Os efeitos adversos geralmente são reversíveis, mas observaram-se casos raros de sintomas a longo prazo.
Os possíveis efeitos adversos a longo prazo podem incluir disfunção cardíaca, sangramento e insuficiência renal e hepática. O tratamento de CRS graves ou efeitos neurotóxicos pode envolver o uso de medicamentos específicos para reverter esses sintomas.
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