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Núcleo e nucléolo Tatsuya Nagata Ph.D. em Virologia Núcleo DNA ���� RNA ���� Proteína Cromatina • Cromatina transcricionalmente ativa é menos condensada - eucromatina. • A heterocromatina é altamente condensada e transcricionalmente • A heterocromatina é altamente condensada e transcricionalmente inativa. • Os cromossomos mitóticos são formados por cromatina no seu estado mais condensado Cromossomos • Estruturas dos cromossomos: linear • 1 centrômero • 2 telômeros • várias origens de replicação Cromatina cromatina • As histonas são as principais proteínas estruturais dos cromossomos eucarióticos • existem por volta de 60 milhões de moléculas por núcleo (outra proteína normalmente é de 10 mil) . Rica em aminoácidos básicos (lisina e arginina)básicos (lisina e arginina) • Formam a partícula unitária da cromatina: o nucleossomo • tipos H2A, H2B, H3 e H4 (histonas nucleossomais) entre 102 a 135 a.a. • existem 20 cópias de cada um genes de histonas no genoma Os nucleossomos são empacotados com a ajuda Nucleossomos empacotados com a ajuda da histona H1 (220a.a.) para a formação de estruturas regulares com grau de espiralização maior. Replicação do DNA 5 enzimas5 enzimas Fita retardada Fragmentos de Okazaki 1ª limitação de DNA polimerase Filme Replicação RNA Primase 2ª limitação de DNA polimerase Topoisomerase Produz quebras numa cadeia do DNA e permite o giro da cadeia quebrada sobre a cadeia intacta. A enzima restaura a ligação fosfodiéster e selar a quebra. Topoisomerase pode relaxar superespiralamentos no DNA. A DNA polimerase é autocorretiva Mecanismo de verificação (Proofreading) DNA-polimerase possui •Uma atividade de polimerização 5’�3’ •Uma atividade de exonuclease 3’�5’ Reparo de DNA Telômeros x Telomerase Telômeros X Telomerase Telomerase • rico em repetições das bases GGGTTA, humano • adicionados ao final do cromossomo pela enzima telomerase. Telomerase Transcrição Transcrição Transcrição = síntese de RNA • RNA polimerase • 3 espécies de RNA polimerase são responsáveis pela transcrição em eucariotos: RNA pol I (rRNA), RNA pol II (mRNA) e RNA pol III (tRNA e 5S rRNA)(mRNA) e RNA pol III (tRNA e 5S rRNA) • Os precursores do mRNA são modificados em ambos os lados (cauda poli a e cap) • O processamento do mRNA remove grandes sequências de nucleotídeos do meio das moléculas de RNA. Genes • A maioria do DNA contido no genoma de organismos superiores não codifica proteínas ou RNAs (98,5% do genoma humano não codifica proteína). Genes • Nos organismos superiores é comum genes com mais de 100.000 pbs (alguns chegam mais de 2 milhões). Entretanto, apenas 1000 pbs são necessários para codificar uma proteína de tamanho mediano ( 300 a 400 aminoácidos) • Íntrons e exons • Genes grandes consistem de vários exons e íntrons alternados e além disso existe regiões reguladoras, responsáveis pela expressão do gene Íntrons e exons Splicing RNA SPLICING • Imediatamente após a síntese dos precursores do mRNA, ocorre a ligação de snRNPs. • snRNPs = Proteínas + pequenos RNAs (aprox. 250 nucleotídeos denominados de U1 a U12) . • O transporte do mRNA para o citoplasma é retardado até que o processo de splicing seja concluído Splicing gera variabilidade gênica Doença genética Erro de Splicing Nucléolo • O nucléolo é uma máquina de fazer ribossomos e é desmontado e montado após cada mitose. • RNA ribossômico (rRNA) • Seres humanos possuem 200 cópias por genoma haploide • O rRNAs eucarióticos: 28S (5070nt), 18S (1869nt), 5.8S (156nt) e 5S (121nt)
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