slides Microscopia

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CITOLOGIA
O curso será ministrado na forma de aulas teóricas e seminários,
conforme descrito no programa.
5. Avaliação
1a prova – 30%; 2a prova – 30%; 3a prova – 30%; Seminário – 10%.
A média mínima final será 5,0, sem arredondamento.
Revisão de menção somente mediante pedido oficial junto a secretaria
do Departamento de Biologia Celular.
Obs: Haverá apenas uma prova de reposição no final do semestre,
envolvendo toda a matéria. Essa prova de reposição destina-se
exclusivamente aos alunos que perderam uma das provas parciais.
6. Bibliografia
Alberts et al. (2010) Biologia Molecular da Célula 5a edição.
Alberts et al. (2014) Molecular Biology of the Cell 6a edição.
Alberts et al. (2011) Fundamentos da Biologia Celular 3ª edição
Lodish et al. (2012) Molecular Cell Biology 7a edição
Revistas: Scientific American, Science, Trends in Cell Biology.
SEMINÁRIOS
29/03 distribuição dos seminários
19/04 Seminários 1,2
03/05 Seminários 3,4
31/05 Seminários 5,6
SEMINÁRIOS
1. Os alunos deverão formar seis (6) grupos de no máximo seis (7) pessoas até o dia 
29 de março de 2018;
2. Os seminários serão entregues aleatoriamente aos grupos; 
3. Os seminários serão sobre tópicos de interesse geral da Citologia;
4.Pelo menos três (3) alunos do grupo deverão apresentar o seminário para os 
colegas;
5. Um responsável pela avaliação do grupo estará disponível no laboratório de 
microscopia eletrônica para tirar possíveis dúvidas sobre o texto e/ou apresentação 
do seminário;
6. A apresentação do seminário não poderá ultrapassar 45 minutos;
7. É obrigatório entregar um resumo de no máximo duas (2) páginas, pelo menos 
três (3) dias antes do seminário. Caso isso não aconteça, o grupo perderá pontos na 
nota final do seminário; 
8. O resumo corrigido do seminário deverá ser disponibilizado para todos os 
alunos da turma. Além disso, enviar uma cópia eletrônica por e-mail para o 
endereço: bergmann@unb.br até o dia da apresentação. 
Microscopia de luz 
• Estrutura celular vista ao
microscópio de luz
• Célula animal = 10 a 20 mm em
diâmetro
• Uso de corantes no século XIX.
•O microscópio de luz pode
distinguir detalhes separados por
0,2 mm
•Limite de resolução de um
microscópio
•comprimento de onda da luz
visível = 0,4 a 0,7 mm.
Comparação de imagens
Microscópio inventado pelo britânico 
Robert Hooke por volta de 1670
Microscópio simples ou lente de 
aumento usada por Anton von 
Leeuwenhoek
Microscópios compostos 
desenvolvidos durante os séculos 
XVII e XVIII
Microscópios do final do século XIX
Micrsocópio moderno
Luz
Ocular
Objetiva
Condensadora
Suporte
Microscópio de luz
Luz
Lente 
condensadora
Lente 
Objetiva
Lente 
Ocular
Observador
Esquema simplificado do caminho da luz em um 
microscópio de luz comum
m
AN= n.senm
10x/0,25
Limite de resolução de um microscópio 
de Luz = LR= 0,61 x l / AN
0,61 = K
l = Comprimento de 
onda da luz visível 
(0.4 a 0,7 mm)
AN = Abertura numérica da lente 
objetica
n = índice de refração 
entre do meio entre o 
objeto e a lente
Objeto
Efeitos de difração da luz em um sistema óptico
A B
Pontos focais
Plano do 
objeto
Lente 
Objetiva
Aberração Esférica
A B
Pontos focais
Plano do 
objeto
Lente 
Objetiva
Aberração Cromática
Aumento Abertura 
numérica da 
lente objetiva
Distância da 
amostra para a lente 
(mm)
10x 0,25 5,5 
20x 0,54 1,4
40x 0,65 0,6
100x 1,32 0,1
100 x óleo de imersão
40 x
Óleo
Objeto
Objetiva Objetiva
•Congelamento
•Fixação: estabilização do 
material, preservando a sua 
estrutura.
•pode ser usado calor, solventes 
orgânicos (álcool), ácidos e 
aldeídos
Processamento de material biológico
H C
O
H
Fixadores
C
O
HH
O
C CH2-CH2-CH2
Formol
Glutaraldeído
•Os tecidos são normalmente fixados e cortados 
para a microscopia de luz
•Desidratação: substituiçao da água por 
soluções miscíveis no meio de inclusão: 
álcool e acetona
•Inclusão: Endurecimento do material 
biológico, parafina e resinas plásticas
•Microtomia: Seccionamento em aparelho 
denominado micrótomo: cortes de 1 a 10 
mM
•Coloração:
•Corantes básicos- Azul de 
toluidina, Azul de metileno, 
Hematoxilina = coloração de 
substâncias basófilas (DNA, RNA, 
glicoproteínas ácidas)
•Corantes ácidos- Eosina, Orange 
G, Fucsina = coloração de 
substâncias acidófilas (proteínas 
básicas citoplasmáticas)
•Diferentes componentes celulares podem 
ser seletivamente corados 
Filtro 1
Condensadora
Objeto
Objetiva
Filtro 2
Imagem
Microscópio de Fluorescência
Fluorescência
COO-
O- O
O
Fluoresceína
COO-
N
O
N
CH3
CH3
CH3
CH3
Rodamina
•Fluorescína = azul (450 nm ou 
0,45mm) verde (510 
nm ou 0,51mm)
•Rodamina = verde/amarelo 
(530 nm ou 0,53 mm)
vermelho (700 nm ou 0,7 mm)
Proteínas fluorescentes
• Proteínas que emitem na faixa do laranja e 
vermelho foram obtidas a partir da anemona 
do mar Discosoma striata e de corais 
pertencentes à classe Anthozoa. Proteína 
fluorescente verde isolada da agua viva 
Aequorea victoria
Proteínas fluorescentes
Proteínas fluorescentes
Divisão celular
• Células vivas podem ser claramente visualizadas nos microscópios 
de contraste de fase/interferência.
• COMO OBTER CONTRASTE EM MICROSCOPIA DE LUZ:
• A= CÉLULA CORADA =AMPLITUDE DA ONDA LUMINOSA 
DIMINUI
• B= CÉLULA NÃO CORADA = MUDANÇA DE FASE
Microscopia de contraste de fase
Microscópio de contraste de fase
Anel de Fase
Condensadora
Objeto
Objetiva
Disco de fase
Imagem
Luz desviada
Luz não desviada
Interferência
Interferência 
Contraste 
de fase
Comparação de imagens
Luz comum 
(campo claro)
Contraste de fase
Campo escuro
Contraste 
interferencial 
(DIC)
Luz polarizada
Condensadora
Objeto
Objetiva
Disco de fase
Imagem
Luz desviada
Luz não desviada
Microscópio de campo escuro
Campo escuro
•IMAGENS DE OBJETOS TRI-DIMENSIONAIS COMPLEXOS É POSSÍVEL 
COM O MICROSCÓPIO CONFOCAL patenteado por Marvin Minsky em 1957, 
entretanto, levou 30 anos para o desenvolvimento de Lasers para esse microscópio e no 
final da década de 80 ficou disponível.
Confocal
Confocal
Confocal
Microscópio confocal
Medula 
humana
MF
MC
Fibra muscular Pólen de girasol
• 1. Células vivas podem ser isoladas de um tecido e 
separadas em diferentes tipos celulares
• # Tecidos fetais (enzimas + agentes quelantes de Ca2+)
•A separação de tipos de células diferentes de um tecido pode ser 
por: CENTRIFUGAÇÃO, ADESÃO A PLÁSTICO OU VIDRO, 
ANTICORPOS, FLUORESCENCE ACTIVATED CELL SORTER 
(FACS).
Células de inseto em cultura
Aedes albopictus (C6/36)
Anticarsia gemmatalis 
(UFL-Ag-286)
Separador celular ativado por fluorescência
Diferentes células podem se multiplicar em um 
frasco de cultura 
IN VITRO e IN VIVO
Meio de cultura definido e indefinido. Meio de 
cultura livre de soro permite a identificação de 
fatores de crescimento específicos
Meio definido
Sem soro fetal 
bovino
Meio indefinido
Com soro fetal bovino
Composição de um meio de cultura para células 
de mamíferos
Aminoácidos Vitaminas Sais vários proteínas 
necessárais 
aos meios 
definidos
Arginina
Cisteína
Glutamina
Histidina
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
FenilalaninaTr
eonina
Triptofano
Tirosina
ValinaBiotina
Colina
Folato
Nicotinamina
Pantotenato
Piridoxal
Tiamina
Riboflavina
NaCl
KCl
NaH2P
O4
NaHC
O3
CaCl2
MgCl2
Glicose
Penicilina
Estreptomi
cina
Vermelho 
fenol
Soro fetal
Insulina
Transferina
Fatores de 
crescimento 
específicos
As linhagens celulares de células de eucariotos são as mais 
usadas como fonte de células homogêneas. LINHAGEM 
CELULAR, LINHAGEM CELULAR TRANSFORMADA E 
CLONAGEM CELULAR.
Células podem ser fundidas para formar células híbridas. 
Linhagem Celular Origem
3T3 Fibroblasto (rato)
BHK21 Fibroblasto 
(Hamster)
MDCK célula epitelial 
(cahorro)
Hela Célula epitelial 
(humana)
PtK1 Célula epitelial 
(rato)
L6 Mioblasto (rato)
Células em estufa com temperatura 
controlada
Células-tronco
ARTIGOS PUBLICADOS COM O TERMO ‘‘STEM 
CELL’’ MARÇO/2018
Potencial das células-tronco
Produção de células-tronco embrionárias 
para tratamento humano
Engenharia de tecidos
Calcium Phosphate 
Scaffold