Introdução à Cromatografia em Papel

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TÍTULO
INTRODUÇÃO
A cromatografia é uma técnica muito utilizada na separação, identificação e dosagem de componentes de misturas de aminoácidos, ácidos graxos, carboidratos etc.
A separação dos componentes de uma mistura através da cromatografia se dá pela diferença de afinidade dos componentes por duas fases que se encontram em contato. A fase que se movimenta é chamada de fase móvel, enquanto que a fase que permanece estacionária é chamada de fase estacionária.
Os componentes da mistura são distribuídos entre as duas fases de maneira que cada um terá velocidade de migração diferente. Essa velocidade depende da afinidade de cada componente com cada uma das fases.
A cromatografia pode ser classificada de acordo com alguns quesitos, como por exemplo a forma física do sistema, as propriedades das fases móvel e estacionária e o princípio utilizado para separar os componentes de uma mistura. Se a fase estacionária encontra-se sobre uma superfície plana, então denomina-se cromatografia plana, e esta pode ser cromatografia em papel ou em camada delgada. Por outro lado, se a fase estacionária encontra-se em um tubo de vidro, então denomina-se cromatografia em coluna.
De acordo com o estado físico da fase móvel, pode-se diferenciar três tipos de cromatografia, a gasosa, a líquida e a supercrítica.
Os mecanismos de separação mais importantes em cromatografia são, sorção e dessorção, partição, troca iônica, exclusão molecular e afinidade.
A cromatografia em papel baseia-se no mecanismo de partição, no qual a separação dos componentes de uma mistura se dá pela diferença de solubilidades destes em duas fases líquidas. Nesse caso, a fase estacionária é formada por água ligada à celulose, através de ligações de hidrogênio. Já a fase móvel é um solvente puro ou uma mistura de solventes que possuem polaridade menor do que a água.
A técnica mais simples de cromatografia é a cromatografia ascendente de fase normal com fase estacionária aquosa. Esta técnica utiliza uma tira de papel e uma cuba cromatográfica contendo a fase móvel. Primeiramente as amostras são aplicadas no papel e colocadas na cuba. Em seguida a fase móvel movimenta-se de forma ascendente pelo papel. Com esse movimento, a fase móvel arrasta as substâncias contidas na amostra de forma diferente, dependendo da afinidade das mesmas com as fases móvel ou estacionária. Por fim o papel é retirado da cuba e seco.
Se as substâncias contidas na amostra forem transparentes, então é necessária uma etapa de revelação. No caso de aminoácidos, utiliza-se a reação com ninidrina, que dá origem a um produto de cor púrpura.
A identificação dos componentes da mistura se dá por meio do fator de retenção (Rf):
Rf = d/D
O Rf é uma constante física própria de cada substância e seu valor varia de 0 a 1. Sendo assim, a identificação das substâncias pode ser feita comparando o Rf do composto com os valores de Rf dos compostos padrões.
OBJETIVO
Entender o processo cromatográfico e através de cromatografia em papel, separar e identificar os componentes de uma mistura contendo aminoácidos.
RESULTADOS E DISCUSSÃO