Transcrição aula de GRANULOCITOPOESE

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Transcrição aula de hemato 24/06/11 – PEDRO HENRIQUE SOARES
GRANULOCITOPOESE
Fases de maturação 
Mieloblasto ou monoblasto
Essa é uma célula que se replica, então a cromatina tem que estar toda aberta para que permita além da transcrição, a cópia do DNA
[...]
Próxima etapa então é o:
Prómielócito
Vai ficar nesse estágio cerca de 24 hora
Quais são as características dele:
Começa a ter já algumas áreas de condensação da sua cromatina e começam a aparecer alguns grânulos grosseiros são os grânulos primários [bolinhas mais arrocheadas]
A relação núcleo-citoplasmática já diminui, mas essa célula ainda se duplica então a maior parte da cromatina dela ainda está aberta.
A próxima etapa é obviamente o:
Mielócito
Vai ficar nesse estágio por aproximadamente 104 horas
Qual a característica do mielócito:
Começa a aparecer, além daqueles grânulos mais grosseiros, alguns grânulos um pouco mais eosinofílicos e mais finos. Além disso, a cromatina está bem mais condensada e a relação núcleo citoplasmática aumentou.
Essa célula é a última célula que se divide
Próxima etapa é o metamielócito
Qual a característica dele:
Mantem esse processo linear, que é de condensação da cromatina e aumento da relação núcleo-citoplasmática – aumento da quantidade de proteínas citoplasmáticas e além disso passa a ter uma identação no núcleo.
Uma identação que normalmente ultrapassa a uma linha imaginária no meridiano da célula
A próxima etapa é o bastão
Dura aproximadamente 66 horas
Nesse estágio o bastão é uma célula que vai ter então uma identação bem maior e nunca vai haver estreitamento maior do que 1/3 de sua largura.
*** se eu tenho um estreitamento que é maior que 1/3 da largura de seus lóbulos ele já está na fase segmentada
Fase segmentada
Essa é a célula que vai ser liberada fisiologicamente pro sangue
Essa é a célula madura que vai pro sangue passar 7 horas em circulação e depois vai migrar pros tecidos.
ISSO TUDO É UMA CLASSIFICAÇÃO MERAMENTE CITOLÓGICA então pode ser que eu olhe uma célula, diga que é uma, mas é outra – logo isso não é uma caracterização adequada.
Além disso, sabe-se por estudos de cinética celular que como eu falei – o mielócito é última célula a se dividir.
Porém, existem células que tem o aspecto de metamielócito e que perdem essa identação, ou seja, ganham aspecto de mielócito e passam a se dividir – como a gente sabe que esse caminho é linear [não existe volta nesse caminho] – quer dizer que essa classificação meramente citológica não é uma classificação adequada.
IDENTIFICAÇÃO IMUNOFENOTÍPICA
Por isso a gente usa marcadores que vão identificar que tipo celular é aquele que eu estou vendo.
Esses marcadores vão identificar primeiro: maturidade, linhagem e vão identificar também imaturidade.
MARCADOR QUE IDENTIFICA MATURIDADE
CD16
CD11b
MARCADOR QUE DEFINE IMATURIDADE
CD34
CD117
HLA-DR
 
Além disso eu tenho marcadores como o CD3 e o CD33 que identificam a linhagem dessa célula, ou seja, desde o início que eu tenho comprometimento com a linhagem mielocítica vão haver esses marcadores. Então ele tá identificando isso aqui é uma célula mielóide – se ela é mais jovem ou menos jovem, vai ser combinação dos outros marcadores.
O CD34 é o marcador de célula tronco – logo será uma célula jovem.
No prómielócito já há a perda do DC34 , mas eu mantenho o CD117, que é o outro marcador de imaturidade
No mielócito não há mais nenhum desses marcadores, mas não há ainda a expressão do CD16.
A medida que vai tendo maturação, há a diferenciação da expressão dos marcadores; de tal forma que durante esse processo de maturação, existem proteínas por exemplo o CD34 e o CD117 que perdem sua expressão ao longo da maturação e existem proteínas que ganham expressão progressivamente.
Além de existirem proteínas que começam com uma expressão forte, caem e voltam a ter uma expressão forte no final do processo maturativo.
Por que eu estou falando isso? Pra mostrar que existe uma classificação que independe do que eu estou vendo – são os marcadores de membrana dessa célula.
NEUTRÓFILO
Bom, o que caracteriza os granulócitos então são os grânulos, além do fato dele ter um núcleo poli-lobulado.
Quando a gente olha a microscopia eletrônica dessa célula, a gente observa que existem grânulos mais grosseiros e grânulos menos grosseiros de tal forma que a gente pode diferenciar 4 tipos de grânulos nos granulócitos em geral.
GRANULOS AZURÓFILOS [ou primários]
Corado intensamente pelo Azuro A, por isso é chamado de Azurófilo
São os primeiros a aparecer – são aqueles grânulos bem grosseiros e basofílicos que a gente observa 
o que que eles são?
Boa parte são Mucopolissacarídeos sulfatados e
MIELOPEROXIDASE [boa parte é composta por essa]
É uma enzima que media reações de peróxidação, ou seja de toxidade contra agentes agressores.
Defensinas [arginina e cisteína] – são proteínas que agem de forma inespecífica contra agentes agressores
Produzidos em estágios iniciais – [NÃO QUER DIZER QUE SÃO PRODUZIDOS APENAS NA FASE DE PROMIELÓCITO]
GRÂNULOS ESPECÍFICOS [secundários] – grânulos específicos do neutrófilo
São grânulos próprios de cada um daqueles tipos celulares [neutrófilos, basófilos e eosinófilos.]
Dentro deles há:
Lactoferrina
Receptor de vitamina B12
TNF [Fator de necrose tumoral]
Laminina
Vitronectina
C3b [faz parte da imunidade- ativa uma via inespecífica de destruição]
colagenase
Qual a ação da Lactoferrina e do Receptor de vitamina B12?
Estipúla-se que [isso não é provado,tá?] como são células de defesa, são células que utilizam de diversos mecanismo pra privar [além de tentar destruir o microrganismo agressor ativamente] aquele organismo agressor de elementos essenciais.
A lactoferrina se liga ao ferro e não o disponibiliza para o organismo agressor.
O receptor da vitamina B12 vai fazer a mesma coisa – vai se grudar a vitamina B12 e não vai disponibilizar a vitamina B12 para o organismo agressor.
O ferro é essencial em diversas vias metabólicas e a B12 é essencial principalmente na síntese de DNA então teoricamente esses componentes agiriam no processo metabólico do agressor.
Além disso existem sinalizadores inflamatórios ( TNF e C3b [fragmento 3 do complemento] )
E existem enzimas que são responsáveis pela destruição daquele tecido em que está o microrganismo [Colagenase] – o tecido onde está atuando o neutrófilo
GRANULOS TERCIÁRIOS – formados só nos estágios mais maduros dos neutrófilos
Possuem principalmente gelatinase – ela age de forma semelhante a colagenase, destrói o tecido conjuntivo onde o neutrófilo está ativado.
Qual o objetivo disso?
1º permeabilizar aquele tecido [para que outras células cheguem naquela região de forma mais fácil]
2º age diretamente nos microrganismos, destruindo-os
Por fim, existem as vesículas secretórias – que são os grânulos quaternários.
O que elas tem?
Diversos receptores de membrana como CD14, CD16, CD11b, receptor de formilpeptídeo [mediador da atividade inflamatória]
Diversas proteínas plasmáticas.
Na verdade essas vesículas secretórias são formadas por invaginação da MP dos neutrófilos.
Então tá lá na MP o CD14 expresso – ocorre uma invaginação e esse CD14 é incorporado para dentro da vesícula conjuntamente com proteínas do plasma que vieram junto.
Isso constitui como uma reserva de receptores que vão atuar quando houver ativação do neutrófilo.[vão ser colocadas pra fora na MP]
Além de ter proteínas plasmáticas com atividade inflamatória. Ou seja é uma forma de você levar proteínas plasmáticas [por exemplo componentes do complemento, imunoglobulinas] lá pra região de agressão
Bom, como é que é esse processo de mediação do neutrófilo até a região em que ele precisa atuar?
O neutrófilo pode se ligar de forma aleatória ou em região de maior afinidade.
Como isso acontece?
Normalmente os neutrófilos passam em alta velocidade pelos vasos – mas se eles encontram os receptores de alta afinidade pelos seus ligantes de membrana eles começam a rolaraté parar. Ele começa a secretar algumas enzimas de seus grânulos para aumentar a porosidade desse endotélio, de modo que ele possa migrar. Migrando através do endotélio, ele vai por um processo de diapedese, migrar para o tecido conjuntivo abaixo daquele endotélio.
Ele vai se ligar de forma inespecífica/aleatória. Mas se houver uma sinalização inflamatória ele vai preferencialmente na direção da região que tiver maior concentração daqueles fatores inflamatórios.
Depois o neutrófilo migra pro tecido e vai na direção de algum processo inflamatório que está sinalizando para esse processo de diapedese.
De tal forma que algumas proteínas são essenciais pra isso.
Por exemplo, lembram do CD34 que eu falei que é um marcador da célula tronco hematopoética?
Ele não é exclusivamente marcador de célula tronco hematopoética. Ele é também é receptor da L-selectina, que é marcador de membrana dos neutrófilos. Não na célula hematopoética.
Então, a L-selectina vai reconhecer o CD34 e vai se ligar para permitir que haja o processo de rolagem.
Além disso, são essenciais o CD162, CD18 e o CD11 na membrana do neutrófilo e a p-selectina lá no endotélio [que vai se ligar ao ligante da p-selectina que tá presente também nos neutrófilos]
De tal tal forma gente que a AÇÃO DO NEUTRÓFILO É UMA AÇÃO DE KAMIKASE – neutrófilo não tem inteligência, neutrófilo não produz anticorpo, não apresenta nada pra ninguém. Ele simplesmente chega lá naquele tecido e vai liberar as constituintes, liberando seus grânulos ELE MORREU, não tem mais nada pra oferecer.
TODO ANO EU PERGUNTO QUAL A AÇÃO DOS NEUTRÓFILOS E TODO MUNDO ESQUEÇE QUE NEUTRÓFILO MORRE DEPOIS QUE ELE FAZ A LIBERAÇÃO DE SEUS GRANULOS. 
EOSINÓFILOS
Segundo tipo de granulócitos
Característica deles são esses grânulos que tem aspecto alaranjado – são grânulos muito mais grosseiros do que aqueles que a gente viu nos neutrófilos. Além disso, costuma possuir duas lobulações.
Os processos de maturação dos neutrófilos são idênticos para os eosinófilos.
Os precursores são praticamente impossíveis de serem vistos no sangue e na medula óssea até o nível do mielócito é possível identificar – os outros tipos celulares é muito raro.
Bom o que o eosinófilo faz?
O eosinófilo é uma célula que foi feita para mediar processos alérgicos do tipo retardado e também para mediar destruição de parasitas.
3% dos leucócitos do sangue e da medula óssea são eosinófilos
Possuem grânulos ricos em peroxidase, arilsufatase, fosatase ácida, fosfolipase e MBP [MAIN BINDING PROTEIN proteína ligadora principal] – todos esses fatores estão relacionados ao processo alérgico. Processo alérgico, não aquele do choque anafilático, não é o da urticária – MAS SIM UM PROCESSO ALERGICO SEMELHANTE AO DA ASMA, ou da rinite alérgica por exemplo. Processos alérgicos mais crônicos.
Um importante estimulador tanto do processo de maturação eosinofílica, como da ativação do eosinófilo É A INTERLEUCINA-5 [IL-5].
O principal componente dentro do eosinófilo [com grande eosinofilia] são os complexos que envolvem a proteína ligadora principal, que é o principal componente ativador do processo alérgico.
E quando a gente observa essa fotografia eletrônica do eosinófilo, a gente observa que existe basicamente um tipo de granulo em grande concentração – vão existir grânulos secundários, terciários e quaternários em menor concentração.
Os grânulos são muito mais grosseiros do que os dos neutrófilos.
BASÓFILOS
Grânulos basofílicos, bem arrocheados e de tamanho menor do que os do eosiníflo – devido a grande quantidade de grânulos e alta basofilia, dificilmente a gente pode observar segmentação do basófilo, mas ela existe e normalmente são duas ou três segmentações.
Principal ação dos basófilos é nas ações alérgicas imediatas – aquelas que envolvem contato e resposta alérgica imediata. [come o camarão, choque anafilático e morre]
Pouquíssimos basófilos são vistos no sangue periférico [menor que 1%]
O que tem dentro deles?
Histamina [principal mediador do processo alérgico]
Serotonina [interfere na permeabilidade capilar]
Sulfato de condroitina
leucotrienos
Eles estão principalmente na medula óssea, migram pro sangue e do sangue para alguns tecidos.
****Existe uma conclusão desse processo de maturação dos basófilos em que antigamente se acreditava que o mastócito era uma célula que vinha do basófilo, pelo mesmo processo maturativo do basófilo; admitia-se que o mastócito era um basófilo que migrou pro tecido - NÃO É VERDADE. O mastócito é uma célula que vem da maturação hematopoética com uma célula de origem mielóide só que ele já sai da medula óssea como mastócito e não como basófilo. Passa muito pouco tempo no sangue e vai pros tecidos.
Enquanto que o basófilo também pode tá no tecido como basófilo.
Funcionalmente os dois são muito semelhantes: ambos agem no processo de resposta alérgica imediata.
****todas as células estão lá na medula óssea maturando conjuntamente
PARTE DE TIRA-DÚVIDA
O que você acha que tá acontecendo quando eu tenho um neutrófilo com a seguinte linhagem:
CD34
CD13 HIGH
CD33
CD15
CD11b HIGH
CD16 HIGH
É uma célula neoplásica.
Uma das coisas que define essas neoplasias é essa assíncronia de marcadores. 
Saber isso é importante para dar o diagnóstico
Serve para monitorar a frequência das células neoplásicas pós-tratamento quimioterápico – o que sobra causa a doença residual mínima.
Essa medição é dada por citometria de fluxo.