GRANULOCITOPOIESE HEMATO

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Transcrição aula de hemato 24/06/11 – PEDRO HENRIQUE SOARES 
GRANULOCITOPOESE 
 
Fases de maturação 
 
Mieloblasto ou monoblasto 
Essa é uma célula que se replica, então a cromatina tem que estar toda aberta para que permita além da transcrição, 
a cópia do DNA 
 
[...] 
 
Próxima etapa então é o: 
Prómielócito 
Vai ficar nesse estágio cerca de 24 hora 
Quais são as características dele: 
Começa a ter já algumas áreas de condensação da sua cromatina e começam a aparecer alguns grânulos grosseiros 
são os grânulos primários [bolinhas mais arrocheadas] 
A relação núcleo-citoplasmática já diminui, mas essa célula ainda se duplica então a maior parte da cromatina dela 
ainda está aberta. 
 
A próxima etapa é obviamente o: 
Mielócito 
Vai ficar nesse estágio por aproximadamente 104 horas 
Qual a característica do mielócito: 
Começa a aparecer, além daqueles grânulos mais grosseiros, alguns grânulos um pouco mais eosinofílicos e mais 
finos. Além disso, a cromatina está bem mais condensada e a relação núcleo citoplasmática aumentou. 
Essa célula é a última célula que se divide 
 
Próxima etapa é o metamielócito 
Qual a característica dele: 
Mantem esse processo linear, que é de condensação da cromatina e aumento da relação núcleo-citoplasmática – 
aumento da quantidade de proteínas citoplasmáticas e além disso passa a ter uma identação no núcleo. 
Uma identação que normalmente ultrapassa a uma linha imaginária no meridiano da célula 
 
A próxima etapa é o bastão 
Dura aproximadamente 66 horas 
Nesse estágio o bastão é uma célula que vai ter então uma identação bem maior e nunca vai haver estreitamento 
maior do que 1/3 de sua largura. 
 
*** se eu tenho um estreitamento que é maior que 1/3 da largura de seus lóbulos ele já está na fase segmentada 
 
Fase segmentada 
Essa é a célula que vai ser liberada fisiologicamente pro sangue 
Essa é a célula madura que vai pro sangue passar 7 horas em circulação e depois vai migrar pros tecidos. 
 
ISSO TUDO É UMA CLASSIFICAÇÃO MERAMENTE CITOLÓGICA então pode ser que eu olhe uma célula, diga que é 
uma, mas é outra – logo isso não é uma caracterização adequada. 
Além disso, sabe-se por estudos de cinética celular que como eu falei – o mielócito é última célula a se dividir. 
Porém, existem células que tem o aspecto de metamielócito e que perdem essa identação, ou seja, ganham aspecto 
de mielócito e passam a se dividir – como a gente sabe que esse caminho é linear [não existe volta nesse caminho] – 
quer dizer que essa classificação meramente citológica não é uma classificação adequada. 
 
 
 
 
 
IDENTIFICAÇÃO IMUNOFENOTÍPICA 
 
Por isso a gente usa marcadores que vão identificar que tipo celular é aquele que eu estou vendo. 
Esses marcadores vão identificar primeiro: maturidade, linhagem e vão identificar também imaturidade. 
 
MARCADOR QUE IDENTIFICA MATURIDADE 
CD16 
CD11b 
 
MARCADOR QUE DEFINE IMATURIDADE 
CD34 
CD117 
HLA-DR 
 
Além disso eu tenho marcadores como o CD3 e o CD33 que identificam a linhagem dessa célula, ou seja, desde o 
início que eu tenho comprometimento com a linhagem mielocítica vão haver esses marcadores. Então ele tá 
identificando isso aqui é uma célula mielóide – se ela é mais jovem ou menos jovem, vai ser combinação dos outros 
marcadores. 
 
O CD34 é o marcador de célula tronco – logo será uma célula jovem. 
No prómielócito já há a perda do DC34 , mas eu mantenho o CD117, que é o outro marcador de imaturidade 
No mielócito não há mais nenhum desses marcadores, mas não há ainda a expressão do CD16. 
A medida que vai tendo maturação, há a diferenciação da expressão dos marcadores; de tal forma que durante esse 
processo de maturação, existem proteínas por exemplo o CD34 e o CD117 que perdem sua expressão ao longo da 
maturação e existem proteínas que ganham expressão progressivamente. 
Além de existirem proteínas que começam com uma expressão forte, caem e voltam a ter uma expressão forte no 
final do processo maturativo. 
Por que eu estou falando isso? Pra mostrar que existe uma classificação que independe do que eu estou vendo – são 
os marcadores de membrana dessa célula. 
 
NEUTRÓFILO 
 
Bom, o que caracteriza os granulócitos então são os grânulos, além do fato dele ter um núcleo poli-lobulado. 
Quando a gente olha a microscopia eletrônica dessa célula, a gente observa que existem grânulos mais grosseiros e 
grânulos menos grosseiros de tal forma que a gente pode diferenciar 4 tipos de grânulos nos granulócitos em geral. 
 
GRANULOS AZURÓFILOS [ou primários] 
 
Corado intensamente pelo Azuro A, por isso é chamado de Azurófilo 
São os primeiros a aparecer – são aqueles grânulos bem grosseiros e basofílicos que a gente observa 
o que que eles são? 
Boa parte são Mucopolissacarídeos sulfatados e 
MIELOPEROXIDASE [boa parte é composta por essa] 
É uma enzima que media reações de peróxidação, ou seja de toxidade contra agentes agressores. 
Defensinas [arginina e cisteína] – são proteínas que agem de forma inespecífica contra agentes agressores 
Produzidos em estágios iniciais – [NÃO QUER DIZER QUE SÃO PRODUZIDOS APENAS NA FASE DE PROMIELÓCITO] 
 
GRÂNULOS ESPECÍFICOS [secundários] – grânulos específicos do neutrófilo 
São grânulos próprios de cada um daqueles tipos celulares [neutrófilos, basófilos e eosinófilos.] 
Dentro deles há: 
Lactoferrina 
Receptor de vitamina B12 
TNF [Fator de necrose tumoral] 
Laminina 
Vitronectina 
C3b [faz parte da imunidade- ativa uma via inespecífica de destruição] 
colagenase 
 
Qual a ação da Lactoferrina e do Receptor de vitamina B12? 
Estipúla-se que [isso não é provado,tá?] como são células de defesa, são células que utilizam de diversos mecanismo 
pra privar [além de tentar destruir o microrganismo agressor ativamente] aquele organismo agressor de elementos 
essenciais. 
A lactoferrina se liga ao ferro e não o disponibiliza para o organismo agressor. 
O receptor da vitamina B12 vai fazer a mesma coisa – vai se grudar a vitamina B12 e não vai disponibilizar a vitamina 
B12 para o organismo agressor. 
O ferro é essencial em diversas vias metabólicas e a B12 é essencial principalmente na síntese de DNA então 
teoricamente esses componentes agiriam no processo metabólico do agressor. 
 
Além disso existem sinalizadores inflamatórios ( TNF e C3b [fragmento 3 do complemento] ) 
E existem enzimas que são responsáveis pela destruição daquele tecido em que está o microrganismo [Colagenase] 
– o tecido onde está atuando o neutrófilo 
 
GRANULOS TERCIÁRIOS – formados só nos estágios mais maduros dos neutrófilos 
Possuem principalmente gelatinase – ela age de forma semelhante a colagenase, destrói o tecido conjuntivo onde o 
neutrófilo está ativado. 
Qual o objetivo disso? 
1º permeabilizar aquele tecido [para que outras células cheguem naquela região de forma mais fácil] 
2º age diretamente nos microrganismos, destruindo-os 
 
Por fim, existem as vesículas secretórias – que são os grânulos quaternários. 
O que elas tem? 
Diversos receptores de membrana como CD14, CD16, CD11b, receptor de formilpeptídeo [mediador da atividade 
inflamatória] 
Diversas proteínas plasmáticas. 
Na verdade essas vesículas secretórias são formadas por invaginação da MP dos neutrófilos. 
Então tá lá na MP o CD14 expresso – ocorre uma invaginação e esse CD14 é incorporado para dentro da vesícula 
conjuntamente com proteínas do plasma que vieram junto. 
Isso constitui como uma reserva de receptores que vão atuar quando houver ativação do neutrófilo.[vão ser 
colocadas pra fora na MP] 
Além de ter proteínas plasmáticas com atividade inflamatória. Ou seja é uma forma de você levar proteínas 
plasmáticas [por exemplo componentes do complemento, imunoglobulinas] lá pra região de agressão 
 
Bom, como é que é esse processo de mediação do neutrófilo até a região em que ele precisa atuar? 
O neutrófilo pode se ligar de forma aleatória ou em região de maior afinidade. 
Comoisso acontece? 
Normalmente os neutrófilos passam em alta velocidade pelos vasos – mas se eles encontram os receptores de alta 
afinidade pelos seus ligantes de membrana eles começam a rolar até parar. Ele começa a secretar algumas enzimas 
de seus grânulos para aumentar a porosidade desse endotélio, de modo que ele possa migrar. Migrando através do 
endotélio, ele vai por um processo de diapedese, migrar para o tecido conjuntivo abaixo daquele endotélio. 
Ele vai se ligar de forma inespecífica/aleatória. Mas se houver uma sinalização inflamatória ele vai preferencialmente 
na direção da região que tiver maior concentração daqueles fatores inflamatórios. 
Depois o neutrófilo migra pro tecido e vai na direção de algum processo inflamatório que está sinalizando para esse 
processo de diapedese. 
 
De tal forma que algumas proteínas são essenciais pra isso. 
Por exemplo, lembram do CD34 que eu falei que é um marcador da célula tronco hematopoética? 
Ele não é exclusivamente marcador de célula tronco hematopoética. Ele é também é receptor da L-selectina, que é 
marcador de membrana dos neutrófilos. Não na célula hematopoética. 
Então, a L-selectina vai reconhecer o CD34 e vai se ligar para permitir que haja o processo de rolagem. 
Além disso, são essenciais o CD162, CD18 e o CD11 na membrana do neutrófilo e a p-selectina lá no endotélio [que 
vai se ligar ao ligante da p-selectina que tá presente também nos neutrófilos] 
De tal tal forma gente que a AÇÃO DO NEUTRÓFILO É UMA AÇÃO DE KAMIKASE – neutrófilo não tem inteligência, 
neutrófilo não produz anticorpo, não apresenta nada pra ninguém. Ele simplesmente chega lá naquele tecido e vai 
liberar as constituintes, liberando seus grânulos ELE MORREU, não tem mais nada pra oferecer. 
TODO ANO EU PERGUNTO QUAL A AÇÃO DOS NEUTRÓFILOS E TODO MUNDO ESQUEÇE QUE NEUTRÓFILO MORRE 
DEPOIS QUE ELE FAZ A LIBERAÇÃO DE SEUS GRANULOS. 
 
EOSINÓFILOS 
 
Segundo tipo de granulócitos 
Característica deles são esses grânulos que tem aspecto alaranjado – são grânulos muito mais grosseiros do que 
aqueles que a gente viu nos neutrófilos. Além disso, costuma possuir duas lobulações. 
Os processos de maturação dos neutrófilos são idênticos para os eosinófilos. 
Os precursores são praticamente impossíveis de serem vistos no sangue e na medula óssea até o nível do mielócito é 
possível identificar – os outros tipos celulares é muito raro. 
 
Bom o que o eosinófilo faz? 
O eosinófilo é uma célula que foi feita para mediar processos alérgicos do tipo retardado e também para mediar 
destruição de parasitas. 
3% dos leucócitos do sangue e da medula óssea são eosinófilos 
Possuem grânulos ricos em peroxidase, arilsufatase, fosatase ácida, fosfolipase e MBP [MAIN BINDING PROTEIN 
proteína ligadora principal] – todos esses fatores estão relacionados ao processo alérgico. Processo alérgico, não 
aquele do choque anafilático, não é o da urticária – MAS SIM UM PROCESSO ALERGICO SEMELHANTE AO DA ASMA, 
ou da rinite alérgica por exemplo. Processos alérgicos mais crônicos. 
 
Um importante estimulador tanto do processo de maturação eosinofílica, como da ativação do eosinófilo É A 
INTERLEUCINA-5 [IL-5]. 
 
O principal componente dentro do eosinófilo [com grande eosinofilia] são os complexos que envolvem a proteína 
ligadora principal, que é o principal componente ativador do processo alérgico. 
E quando a gente observa essa fotografia eletrônica do eosinófilo, a gente observa que existe basicamente um tipo 
de granulo em grande concentração – vão existir grânulos secundários, terciários e quaternários em menor 
concentração. 
Os grânulos são muito mais grosseiros do que os dos neutrófilos. 
 
BASÓFILOS 
 
Grânulos basofílicos, bem arrocheados e de tamanho menor do que os do eosiníflo – devido a grande quantidade de 
grânulos e alta basofilia, dificilmente a gente pode observar segmentação do basófilo, mas ela existe e normalmente 
são duas ou três segmentações. 
 
Principal ação dos basófilos é nas ações alérgicas imediatas – aquelas que envolvem contato e resposta alérgica 
imediata. [come o camarão, choque anafilático e morre] 
 
Pouquíssimos basófilos são vistos no sangue periférico [menor que 1%] 
O que tem dentro deles? 
Histamina [principal mediador do processo alérgico] 
Serotonina [interfere na permeabilidade capilar] 
Sulfato de condroitina 
leucotrienos 
 
Eles estão principalmente na medula óssea, migram pro sangue e do sangue para alguns tecidos. 
 
****Existe uma conclusão desse processo de maturação dos basófilos em que antigamente se acreditava que o 
mastócito era uma célula que vinha do basófilo, pelo mesmo processo maturativo do basófilo; admitia-se que o 
mastócito era um basófilo que migrou pro tecido - NÃO É VERDADE. O mastócito é uma célula que vem da 
maturação hematopoética com uma célula de origem mielóide só que ele já sai da medula óssea como mastócito 
e não como basófilo. Passa muito pouco tempo no sangue e vai pros tecidos. 
Enquanto que o basófilo também pode tá no tecido como basófilo. 
 
 
Funcionalmente os dois são muito semelhantes: ambos agem no processo de resposta alérgica imediata. 
 
****todas as células estão lá na medula óssea maturando conjuntamente 
 
PARTE DE TIRA-DÚVIDA 
O que você acha que tá acontecendo quando eu tenho um neutrófilo com a seguinte linhagem: 
 
CD34 
CD13 HIGH 
CD33 
CD15 
CD11b HIGH 
CD16 HIGH 
 
É uma célula neoplásica. 
Uma das coisas que define essas neoplasias é essa assíncronia de marcadores. 
Saber isso é importante para dar o diagnóstico 
Serve para monitorar a frequência das células neoplásicas pós-tratamento quimioterápico – o que sobra causa a 
doença residual mínima. 
Essa medição é dada por citometria de fluxo.