Hematologia Aula (8) Trombocitopoese

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Hematologia – Trombocitopoese e Hemostasia primária
Plaqueta: antigamente chamada de trombócito (conceito errôneo de plaquetas sendo as únicas responsáveis pela formação do trombo)
Plaquetas: responsáveis pela hemostasia primária (também há o papel do endotélio)
Trombocitopoese: megacariocitopoese
Diferenciação
Célula tronco originando dois precursores: mieloide e linfoide.
Precursor mieloide dá, entre outros, o precursor da linhagem megacariocitopoética. 
Primeira célula minimamente comprometida é o CFU – GEMM. (precursor mais geral), 
que é precursor também também de granulócitos, eritrócito e monócitos, além dos próprios megacariócitos. 
Plaquetas, como as hemácias, não têm núcleo. Contudo, diferentemente das hemácias, plaquetas são pedaços de células (megacariócitos) (hemácias, por sua vez, são células inteiras)
Megacariócitos são as maiores células da medula óssea 
Endomitose: mitose que não termina. Parada da replicação celular na anáfase (entre anáfase “a” e “b”) começa no pró-megacariócito, com multiplicação do código genético sem haver multiplicação de núcleo. (células chegam a 128n), o que permite uma alta alta alta replicação proteica. 
 Endomitose conta com mecanismo que inibe a indução de apoptose normalmente presente em células com mais de 2n.
Plaquetas foram propostas como vindo dos megacariócitos no início do séc. XX (1908), sendo sua relação com o megacariócito estabelecida na década de 1950.
Plaqueta: célula efetora baseada em mecanismos proteicos
Células da linhagem megacariocítopoética (trombocitopoética)
Célula BFU-meg: primeira célula comprometida com a linhagem megacariocítica
Capaz de gerar de 100 a 500 megacariócitos maduros
Marcadores de célula jovem: CD34
Marcadores específicos de plaquetas: 
Célula CFU – meg:
Gera 4 a 32 megacariócitos maduros
Pró-megacarioblasto: última célula da linhagem capaz de sofrer divisão mitótica. 
 Célula onde o processo de endomitose ocorre.
Megacariócito
Gera 2.000 a 3.000 plaquetas.
	Produção e liberação de plaquetas por dia: 200 bilhões de plaquetas
Regulação da trombocitopoese
Presença de molécula reguladora trombopoetina.
Trombopoetina tem a ver com maturação, mas não influencia liberação das plaquetas.
Mecanismo de regulação da trombopoetina
Produzida principalmente no fígado (principal) e rim
Em situações de estresse pode ocorrer na medula óssea e no baço
Produção de trombopoetina é praticamente constante
Produzida por um gene THPO, no cromossomo 3, receptor MPL (leucemia mielo-proliferativa)
Trombopoetina se liga permanentemente ao receptor MPL: uma vez ligada, a molécula deixa de estar livre para atuar sobre outras.
Trombopoetina:
Aumenta o número de megacariócitos
Aumenta o número de endomitoses
Aumenta o número de plaquetas possíveis de serem produzidas e de receptores de plaquetas
Plaquetas: 30 receptores de trombopoetina
Megacariócitos: 2000 a 3000 receptores para trombopoetina.
Diferença no número de receptores para trombopoetina apresentados por plaquetas (30) e mecagariócitos (3000) faz com atuação da trombopoetina seja mais relacionada com o processo de maturação durante a trombocitopoese. (trombopoetina atua na maturação das plaquetas, e não em sua liberação).
Aumento da massa de plaquetas e de megacariócitos diminui a massa de trombopoetina livre (molécula de trombopoetina se prende irreversivelmente aos receptores MPL)
Diminuição da massa de plaquetas e de megacariócitos (com diminuição do número de receptores MPL) aumenta a massa de trombopoetina livre (plasma).
Trombopoetina: Produção contínua, com regulação pela quantidade de células que estão presentes. Condição única no processo de maturação hematopoiética.
Megacariócito emite pseudópodos (pró-plaquetas, formadas 100 a 200) que se transformam depois em plaquetas. 
Pró-plaquetas sofrem segmentação seguida, até se formarem estruturas semelhantes a cachos de uvas, cuja parte distal originará plaquetas.
Conteúdo proteico das plaquetas é semelhante ao conteúdo protéico do megacariócito.
Sistema de demarcação de membrana : reserva de membrana (diversas regiões com membrana citoplasmática acumulada dentro do citoplasma ). Sistema de demarcação de membrana é necessário porque quando há formação de pró-plaquetas (prolongamentos) a área aumenta consideravelmente. 
Após liberação de plaquetas, sobra corpo residual de megacariócito, que sofre apoptose.
Formação de plaquetas: 3 genes principais
 NF – E2 (regulador da expressão do TUBB1)
 TUBB1 (gene da B-1 tubulina, responsável por feixe tubular que forma pseudópode (pró-plaqueta)).
 SDF – 1 (fator derivado do estroma: essencial para a liberação da plaqueta)
Deficiência (knock-out) de TUBB1 ou de NF – E2(regulador de TUBB1): pró-plaquetas com formato anormal e tamanho reduzido, com indivíduos trombocitopênicos e plaquetas não-discoides. 
Formação das pró-plaquetas: expansão dos microtúbulos contra membrana celular.
Alongamento e formação de ramificações e forma final em volta da pró-plaqueta: interação do feixe tubular com binômio actina-miosina tipo 2. (Motor que gera força e orientação no desenvolvimento dos pseudópodos pró-plaquetários).
Parte final da pró-plaqueta fica em forma de espiral (helicoidização), gerando sinalização para fechamento da membrana do pró-plaqueta, com interrupção da comunicação com o citoplasma do megacariócito, e rompimento dos microtúbulos, com liberação de plaquetas.
Ausência da miosina tipo 2 gera trombocitopenia.
Plaquetas
Elementos celulares sem núcleo, de tamanho reduzido (3 micrômetros), com grânulos proteicos, grande quantidade de íons e com formato discoide. Rede de microtúbulos ainda está presente. Sistema canalicular aberto (OCS) é resquício do sistema de demarcação de membrana (DNS). Presença de alfa grânulos (maiores e mais frequentes) e grânulos densos.
Alfa-grânulos (função primária da plaqueta)
 P-selectina
Integrinas
Fator de vW (von Willebrand) responsável pela primeira atuação da plaqueta o sítio de injúria (adesão á matriz subendotelial) e carreador do fator VIII (ausência quadro semelhante a hemostasia do tipo A)
Glicoproteínas
Fibrinogênio
Fibronectina
Trombospondina
Grânulos densos (sinalizam processo de adesão plaquetária, levando a adesão de mais plaquetas):
Serotonina
ADP
Cátion divalentes (principalmente cálcio (Ca2+))
Alfa-grânulos: função primária da plaqueta
Grânulos densos: processos de sinalização para adesão plaquetária
Actina: 
Molécula tubular mais importante da plaqueta (contribuição para contrações da plaqueta)
OCS (Sistema canalicular aberto): comunicação com o meio externo, com ductos revestidos por membrana. Sistema canalicular serve também para reserva de receptores.
 Plaquetas contêm reservas de receptores, localizados no OCS (30% dos receptores de trombina, e.g.). No momento em que há sinalização, receptores migram para a membrana externa, (sensibilizável). 
Esqueleto citoplasmático: Filamina, espectrina e adustrina*, ligado por feixe de actina e tubulina.
Responsável por fazer tração da membrana no momento de ativação da plaqueta.
Indícios relatam que 5% das plaquetas circulantes estão na forma de pró-plaquetas (presença de ramificações).
Sítio da megacariocitopoese: medula óssea
Megacarioblasto, contudo, é capaz de migrar, podendo existir sítios de trombocitopoese no baço e no pulmão.
(pulmão também é órgão hematopoético).
 
Dinâmica das plaquetas:
Duração de vida média no sangue de 10 dias
Plaqueta transfundida dura de 3 a 4 dias.
(transfusão para pacientes trombocitopênicos tem que ser feita na véspera da intervenção cirúrgica, não adianta transfundir uma semana antes).
Plaquetas também têm atuaçãono trofismo do endotélio (indivíduos trombocitopênicos tem endotélio alterado, mais fino)
hemostasia primária
7000 plaquetas/ml de sangue são consumidas diariamente.
Hemostasia primária
Responsável pela primeira leva de defesa contra o sangramento
(faz ferimento parar de sangrar)
Maior parte dos distúrbios envolvendo sangramentos é por deficiência plaquetária, sem tanta contribuição de disfunções endoteliais.
Hemostasia secundária
(mantêm ferimento sem sangrar)
 Livro:
 A TPO (trombopoetina) é o hormônio responsável pela megacariocitopoese, sendo responsável pela maturação das células da linhagem megacariocítica. (A trombopoetina age em sinergia com a IL-3, sendo que a IL-3 age principalmente nos estágios mais iniciais da linhagem e a TPO age no estágio inicial e, principalmente, nos estágios mais tardios) 
 Os efeitos da trombopoetina na maturação de megacariócitos são:
Formação de grânulos específicos de plaquetas
Desenvolvimento de membranas de demarcação no megacariócito
Expressão de proteínas específicas de membrana plaquetária, como o GP IIb/IIIa e a GP Ib95, que são, respectivamente, receptores de fibrinogênio (Iib/IIIa) e do fator de VonWillebrand (Ib95)
Adesão de magacariócitos
Endomitose e o resultante estado de poliploidia
Formação de plaquetas a partir de megacariócitos isolados em culturas livres de soro. 
Endomitose: Replicação de DNA sem que ocorra a correspondente divisão de citoplasma e estruturas citoplasmáticas.