relatório bioquímica - análise qualitativa de carboidratos

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1. Introdução 
 
 
O grupo de compostos conhecido como carboidratos recebe este 
nome geral devido à observação de sua freqüente fórmula CX(H2O)Y, 
isto é, eles parecem ser “hidratos de carbono”. Carboidratos simples são 
também conhecidos como “açúcares” ou sacarídeos e a terminação do 
nome da maioria dos açúcares é –ose. 
Carboidratos (ou glicídios) são definidos normalmente como 
polihidroxialdeídos e polihidroxicetonas ou substâncias que podem ser 
hidrolisadas para produzir polihidroxialdeídos ou polihidroxicetonas. Os 
carboidratos mais simples, que não podem ser hidrolisados em 
carboidratos menores, são chamados monossacarídeos. Carboidratos 
que quando hidrolisados produzem somente duas moléculas de 
monossacarídeos são chamados dissacarídeos; aqueles que produzem 
três são chamados trissacarídeos e assim por diante. Carboidratos que 
quando submetidos à hidrólise produzem 2 a 10 moléculas de 
monossacarídeos são normalmente chamadas de polissacarídeos. 
Carboidratos que produzem um grande número de monossacarídeos 
(>10) são denominados polissacarídeos. 
Os monossacarídeos contendo um grupo aldeído são chamados 
aldoses; aqueles que contêm grupamentos cetônicos são chamados 
cetoses. 
Em soluções aquosas, os monossacarídeos com 5 ou mais 
átomos de carbono ocorrem, predominantemente, como estruturas 
cíclicas (anel) nas quais o grupo carbonila forma uma ligação covalente 
com o oxigênio de um grupo hidroxila ao longo da cadeia, formando 
derivados chamados hemicetais ou hemiacetais. 
 
 
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Estas formas apresentam um carbono assimétrico adicional e 
assim podem existir duas formas estereoisoméricas. Por exemplo, a D – 
glicose existe, em solução, como um hemiacetal intramolecular no qual 
a hidroxila livre em C-5 reagiu com o aldeído de C-1, formando um 
centro assimétrico e produzindo 2 estereoisômeros chamados α e β. As 
nomenclaturas sistemáticas dos dois anéis são α-D-glicopiranose e β-D-
glicopiranose. 
 
 
 
 Os açúcares podem ainda ser classificados como açúcares 
redutores e não-redutores. Os açúcares redutores contêm grupamentos 
hemiacetais ou hemicetais. Carboidratos que contêm somente grupos 
cetais ou acetais são chamados açucares não-redutores. 
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2. Objetivos 
 
 
A realização desta prática teve como objetivo realizar análise 
qualitativa carboidratos referente à presença destes glicídios em solução 
(reação de Molisch), à presença de açúcares redutores (reação de 
Fehling), à presença de monossacarídeos (reação de Barfoed), à 
presença de cetoses (reação de Seliwanoff) e à presença de pentoses. 
 
3. Parte Experimental 
 
 
Reação de Molisch: esta reação é utilizada para a pesquisa de 
carboidratos, em geral. O reagente de Molisch (solução etanólica de α-
naftol 5g/100 ml) sob a ação de ácido sulfúrico concentrado leva a 
formação de compostos furfúricos a partir dos carboidratos. Os 
compostos furfúricos reagem com o naftol formando um produto 
condensado colorido. 
Foram pipetados 2 ml de cada solução de carboidratos (glicose, 
arabinose, sacarose e frutose) em seu respectivo tubo de ensaio. Em 
seguida, foram adicionadas 3 gotas de reagente de Molisch em cada 
solução, sob leve agitação. Posteriormente, foram adicionados 2 ml de 
ácido sulfúrico concentrado a cada solução, de forma que o ácido 
escorresse pela parede do tubo. O mesmo procedimento foi repetido 
com solução de água destilada ao invés da solução de carboidratos 
(controle). 
 
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Reação de Fehling: esta reação é utilizada para a pesquisa de 
açúcares redutores. O reagente de Fehling é fortemente alcalino 
contendo íons cúpricos que formam um complexo íon cúprico-tártaro de 
sódio e potássio. Nestas condições, o cobre é reduzido por ação de 
açúcares redutores, formando-se o óxido cuproso (precipitado 
avermelhado). 
O reagente de Fehling é composto de duas soluções: 
Solução A (35 g de sulfato de cobre cristalizado, 5 g de ácido sulfúrico 
(d=1,84) em 1000 ml de água destilada); 
Solução B (150 g de tartarato duplo se sódio e potássio, 300 ml de 
hidróxido de sódio a 40% em 1000 ml de água destilada). 
Foram pipetados 1 ml das soluções A e B do reagente de Fehling em 
cada um dos cinco tubos de ensaio. Em seguida, foi adicionado 1 ml de 
cada solução de carboidratos em seu respectivo tubo de ensaio. As 
soluções foram agitadas e aquecidas até a fervura em uma manta de 
aquecimento. O mesmo procedimento foi repetido com uma solução de 
água destilada ao invés da solução de carboidratos (controle). 
 
Reação de Barfoed: esta reação é utilizada para a pesquisa de 
monossacarídeos. A reação também se baseia na redução do cobre, 
porém é efetuada em meio ácido, ao contrário da reação de Fehling. 
Nestas condições o cobre é reduzido a quente pelos monossacarídeos, 
com formação de óxido cuproso (precipitado avermelhado). Os 
dissacarídeos redutores também dão positivo para esta reação após um 
tempo de aquecimento bem mais prolongado. O reativo de Barfoed é 
composto por 13,3 g de acetato de cobre cristalizado e 1,8 ml de ácido 
acético glacial para 200 ml de água destilada. 
Foram pipetados 2 ml de cada solução de carboidratos em seu 
respectivo tubo de ensaio. Em seguida, adicionou-se 2 ml do reativo de 
Barfoed em cada um dos tubos de ensaio. As soluções foram fervidas 
diretamente na chama durante 1 minuto. O mesmo procedimento foi 
repetido com uma solução de água destilada no lugar da solução de 
carboidratos. 
 
Reação de Seliwanoff: esta reação é utilizada para pesquisa de 
cetoses. A reação baseia-se na formação de furfural e 
hidroximetilfurfural por ação do ácido clorídrico sobre as cetoses e na 
formação de um complexo colorido pela reação dos compostos 
furfúricos com o Resorcimol. 
Foram pipetados 1 ml das soluções de carboidratos em seus 
respectivos tubos de ensaio. Adicionou-se, então, 3 ml de solução da 
solução de ácido clorídrico (70 ml de ácido clorídrico concentrado em 
100 ml de água destilada) e 1 ml do reativo de Seliwanoff (0,5 g de 
Resorcimol em 100 ml de álcool etílico). As soluções foram aquecidas 
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diretamente na chama durante alguns minutos. O aquecimento em 
banho-maria a 80° C, durante 10 minutos, aumenta a especificidade da 
reação. O mesmo procedimento foi repetido utilizando-se uma solução 
de água destilada no lugar da solução de carboidratos. 
 
Reação de Bial: esta reação é utilizada para a pesquisa de pentoses. A 
reação também se baseia na formação de furfural, mas, neste caso, a 
formação do produto colorido (coloração esverdeada) é feita pela 
condensação do furfural com o orcinol. 
Foram pipetados 1 ml das soluções de carboidratos nos seus 
respectivos tubos de ensaio. Adicionou-se 2 ml do reativo de Bial (1,5 ml 
de orcinol, 500 ml de ácido clorídrico concentrado e 20 a 30 gotas de 
cloreto férrico a 10%) e as soluções foram mantidas submetidas a leve 
agitação. Em seguida, as soluções foram aquecidas em banho-maria 
fervente durante 15 minutos. O mesmo procedimento foi executado com 
uma solução de água destilada no lugar da solução de carboidratos. 
 
4. Resultados e Discussão 
 
 
Na reação de Molisch, os monossacarídeos presentes em 
solução são submetidos à ação de um forte agente desidratante (ácido 
sulfúrico concentado) originando hidroximetilfurfurais e furfurais a partir 
de hexoses e pentoses, respectivamente. O ácido sulfúrico também 
rompe facilmente as ligações glicosídicas de oligo e polissacarídeos, 
resulatando em pentoses e hexoses. Os compostos furfúricos 
resultantes reagem com o naftol presente no reativo de Molisch 
formando um produto de condensação colorido.A presença do anel violeta característico da condensação dos 
compostos furfúricos com o naftol foi observado em todos os tubos de 
ensaio que continham solução de carboidratos. A solução preparada 
com água destilada no lugar da solução de carboidratos não apresentou 
tal coloração. 
 
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Na reação de Fehling, o cobre presente em solução é reduzido pela 
ação de açúcares redutores. A extremidade redutora do açúcar reduz o 
ión cúprico-tártaro de sódio potássio a tartarato de sódio e potássio e 
óxido cuproso. Este composto se precipita em solução dando origem a 
coloração avermelhada característica. 
 
 
Os tubos de ensaio que continham soluções de acúcares redutores 
(glicose, arabinose e frutose) apresentaram a coloração avermelhada 
característica da presença de óxido cuproso. As soluções de água 
destilada e de sacarose não apresentaram tal aspecto. 
 
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Na reação de Barfoed, o cobre também sofre redução, entretanto, tal 
redução é efetuada em meio ácido. O cobre, então, é reduzido a quente 
pelos monossacarídeos com formação de óxido cuproso. As soluções 
de monossacarídeos (glicose, frutose e arabinose) apresentam 
presença do precipitado avermelhado característico. As soluções de 
água destilada e sacarose não apresentaram tal aspecto. 
 
 
 
 
 
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Na reação de Seliwanoff, a presença de ácido clorídrico em solução 
quebra as ligações glicosídicas, transformando os poli e 
oligossacarídeos em monossacarídeos. As cetoses originadas, então, 
sofrem forte desidratação pelo ácido clorídrico originando compostos 
similares ao furfural. Estes compostos furfúricos formam um complexo 
colorido pela reação de complexação com o Resorcimol presente em 
solução. 
 
 
Os tubos de ensaio que apresentavam cetoses em solução (sacarose e 
frutose) apresentaram coloração avermelhada, característica da 
complexação dos compostos furfúricos com o resorcimol. As soluções 
de água destilada, arabinose e glicose permanecerão inalteradas. 
 
 
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Na reação de Bial, o ácido clorídrico concentrado presente realiza uma 
forte desidratação nos glicídios. As pentoses são convertidas em furfural. Estes 
compostos complexam-se com o orcinol e os íons férricos, resultando em uma 
solução colorida. 
 
 
 
Os tubos de ensaio que continham soluções de pentoses (arabinose, frutose e 
sacarose) apresentaram coloração esverdeada característica. As soluções de 
água destilada e glicose não apresentaram tal padrão. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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5. Conclusão 
 
 
A partir dos resultados observados, conclui-se que através de alguns 
testes de natureza química é possível realizar um screening baseado 
nas propriedades dos carboidratos, tornando possível uma identificação 
total ou parcial destes compostos. 
 
 
6. Referências Bibliográficas 
 
a) SOLOMONS, T.W.G. Fundamentals of Organic Chemistry. 4ª 
edição. 
b) NELSON, D.L.; COX, M.M. Lehninger Princípios de Bioquímica. 3ª 
edição. São Paulo, 2002. 
c) http://www.ebah.com.br/relatorio-de-glicidios-doc-a50049.html 
Acessado em 15 de Novembro de 2010, às 20:11. 
d) http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_ch/molisc
h.htm Acessado em 15 de Novembro de 2010, às 21:37. 
e) http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S0100-
40422010000400008&script=sci_arttext Acessado em 17 de 
Novembro de 2010, às 19:17. 
f) http://www.scribd.com/doc/21940687/Analise-Quimica-de-
Acucares Acessado em 17 de Novembro de 2010, às 21:39. 
g) http://reference.findtarget.com/search/Seliwanoff%27s%20test/ 
Acessado em 17 de Novembro, às 22:31. 
h) http://www.harpercollege.edu/tm-
ps/chm/100/dgodambe/thedisk/carbo/bial/bials.htm Acessado em 
28 de Novembro, às 18:39.