Bioquímica Eletroforese

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Eletroforese
Princípios Gerais
Principais Reagentes
Tipos de Polímeros
Aplicações em laboratório
Vamos começar nossos estudos, com uma demonstração:
Outro exemplo de Eletroforese:
Macromolécula (+) está fragmentada, ou seja, quebrou em várias partes. Os pesos moleculares, são: 
100 200 300 400
Mesmo fragmentado, cada parte apresenta a mesma densidade (a densidade não varia de acordo com o tamanho). 
Como vamos saber qual banda representa os pesos dos fragmentos da macromolécula?
As macromoléculas mais leves migram mais rápidas através do gel. Portanto, a que está mais longe do polo positivo é a mais leve (lembrando que a macromolécula é +). 
Definição
Eletroforese: é uma técnica empregada para separar moléculas de mesma carga com diferentes pesos moleculares. 
Principais Reagentes
São três reagentes específicos:
Solução Tampão Ionizada: O polímero fica imerso nessa solução chamada Tampão Ionizado com um ácido fraco. A solução está ionizada significa que o PH está acima do PKA do ácido em questão. Porque deve a solução deve está ionizada? Pois confere a solução uma propriedade elétrica maior, ou seja, conseguimos transmitir corrente elétrica com mais facilidade. O que significa Ionizar? Ionizar é dar carga ao líquido, ele fica mais forte para conduzir uma corrente. Os polímeros são semissólidos que são produzidos utilizando como solvente uma solução tampão ionizada também, para permitir a passagem de corrente. 
Polímeros: Existem dois tipos gelatinosos, que são semissólidos que permitem o transito das moléculas que vamos separar.
Gel de Agarose: Utilizamos para separar moléculas maiores. (Ex: DNA e RNA).
 Agarose é um polissacarídeo e quando está no formato de pó não é capaz de formar uma malha polimérica. Mas quando solubilizamos em uma solução aquosa, primeiro aquecemos para solubilizar e quando esfria formamos a malha polimérica que contém cheio de buracos de vários tamanhos. São esses buracos que irão permitir a passagem de moléculas para que migrem com determinadas velocidades.
Gel de Poliacrilamida: Utilizamos para separar moléculas menores. (Ex: DNA, RNA e Proteínas).
 É um gel mais compacto, o diâmetro dos buracos são muitos menores, ou seja, as moléculas transitam com mais dificuldade. 
OBS: Quanto maior for a concentração do polímero, mais estreitas ficaram as malhas dos géis de agarose e poliacrilamida. Aumentando a dificuldade das passagens das macromoléculas. 
EX: Quando queremos separar moléculas extremamentes grandes em gel de agarose, nós utilizamos uma concentração baixa em torno de 1%
 Quando queremos separar moléculas menores em gel de agarose, nós utilizamos uma concentração de 4%, garantindo uma malha mais estreita dificultando a passagem das moléculas.
 Para moléculas pequenas: Se utilizarmos gel de 1%, não ficaria uma boa resolução. Porém, se usarmos um gel de 4% a resolução vai ficar boa por ser mais linear. 
Aplicações em Laboratório
Separação e isolamento de proteínas, DNA e RNA. Além de outras moléculas também.
Utilizado para detecção de produtos de PCR, Western Bolt e bases sequenciadas.