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COLORAÇÃO DE GRAM A Coloração de Gram foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram. Ela é um dos procedimentos de coloração mais úteis, pois classifica as bactérias em dois grandes grupos: Gram positivas e Gram negativas. 1. Fazer esfregaço com suspensão bacteriana. Utilizar cultura jovem (até 24 horas). Colocar uma gota de água destilada e tocar nesta uma alça de platina contendo um pouco do crescimento bacteriano; 2. Secar ao ar próximo ao calor do bico de Bunzen – etapa de fixação; 3. Cobrir o esfregaço com Cristal Violeta por 1 minuto; 4. Lavar rapidamente em água corrente; 5. Cobrir com Lugol por 1 minuto; 6. Lavar novamente com água corrente; 7. Descorar com Álcool etílico por 30 segundos (tempo crítico); 8. Lavar em água corrente; 9. Contrastar com Safranina por 30 segundos; 10. Lavar em água corrente 11. Secar ao ar e observar ao microscópio com lente de imersão. Bactérias Gram + = Coloração Violeta Bactérias Gram - = Coloração Rosa Bactérias Gram - = parede celular mais permeável, o álcool consegue remover de dentro da célula o complexo que se forma entre o cristal violeta e o iodo. Bactérias Gram + = parede celular mais impermeável e o álcool não conseguem descolori-las. As figuras 1 a 4 são micrografias ópticas de bactérias coradas pelo método de Gram. As figuras 1 e 2 mostram bacilos e cocos Gram positivos, respectivamente e as figuras 3 e 4 mostram bacilos e cocos Gram negativos, respectivamente. FIGURA 1 FIGURA 2 FIGURA 3 FIGURA 4
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