PRINCIPAIS MEIOS DE CULTURA PARA CRESCIMENTO DE BACTERIAS

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PRINCIPAIS MEIOS DE CULTURA PARA CRESCIMENTO DE BACTERIAS:
Pra uma bactéria crescer, é necessário que ela seja colocada em um meio de cultura e em condições ambientais adequadas. A escolha do meio de cultura e de seus nutrientes, do pH, temperaturas e aeração depende sempre da bactéria e de seu metabolismo e do objetivo do cultivo;
Os meios podem ser preparados no estado liquido, fluido, semi-solido ou solido depende dos objetivos:
Meio liquido: cultivo de culturas puras
Meio fluido: contem apenas 0,1% de ágar para o meio adquirir maior viscosidade, usando para diminuir o teor de oxigênio do meio.
Meio sólido: 1.5-2% de ágar, isolamento de bactérias e cultivo.
Meio semi-sólido:0.75% de ágar; situações mais específicas, como nas provas de identificação bioquímica.
Os meios podem ser classificados, de acordo com sua composição em varias categorias. 
Meios quimicamente definidos (sintético): nesse tipo de meio, são conhecidas a composição e quantidade dos componentes do meio.
Meio complexo (indefinido): nesse tipo de meio não se conhece sua exta composição termos qualitativos e quantitativos. São utilizados extratos, como a peptona, que são obtidos apo hidrolise química ou enzimática. De diferentes proteínas, como, por exemplo, carne, caseína e gelatina. Existem no mercado diferentes tipos de peptona, de acordo com a proteína que foi utilizada para obter os hidrolisados.
Meios Seletivos E Diferenciais: O meio seletivo é aquele com componentes adicionados que inibem o crescimento de determinados microrganismos. Pode ser em temos nutricionais ou em termos de fatores físicos, como pH. No caso de meios diferencias são incorporados certos reagentes ou substancias químicas que podem resultar num tipo de crescimento diferenciado, com algumas características especiais após inoculação e incubação, que permite a distinção de diferentes tipos de bactérias.
Meios de Enriquecimento: Esse meio contem alguns componentes que permitem o crescimento de tipos específicos de bactérias entanto inibem o crescimento da microbiotica contaminante 
Meios de Enriquecimento Seletivo: é um meio rico e, ao mesmo tempo seletivo por conter determinados nutrientes seletivos. 
Ágar Sal Manitol
Finalidade:Ágar Sal Manitol MBiolog é um meio de cultura, muito usado para o isolamento de Staphylococcus aureus de amostras biológicas como urina, secreções, feridas e exudatos. Também usado na indústria alimentícia para o isolamento e identificação de estafilococos em líquidos e produtos lácteos, carnes e derivados, incluindo conservas e pescados.
Princípio de ação: A degradação do manitol com a produção de ácido muda a cor do meio de rosado a amarelo. Devido ao seu alto conteúdo de cloreto de sódio, pode-se fazer uma inoculação maciça da amostra em estudo. Geralmente se incubadas as placas por mais ou menos 36 horas, aparecendo as colônias de estafilococos não-patogênicos de tamanho pequeno e rodeadas de uma zona vermelha. As colônias de Staphylococcus aureus fermentadores do manitol são maiores e rodeadas de uma zona amarela.
Amostra: Urina, secreções, feridas, exsudatos, além de líquidos e produtos lácteos, carnes e derivados, incluindo conservas e pescados. As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas. Não é aconselhado o armazenamento da amostra. Em casos extremos, em que não se pode realizar o inóculo imediato, a amostra deve ser conservada sob refrigeração.
Procedimento: Inocular a amostra por estrias através de esgotamento da alça de platina. Obedecer aos critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada à 35 ± 2ºC por 24 horas. Após incubação, observar as placas.Caso não haja crescimento re-incubar por mais 24h.
Interpretação:Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias. Staphylococcus aureus fermentadores de manitol produzem colônias grandes e rodeadas de uma zona amarela. Os estafilococos não-patogênicos produzem colônias pequenas e rodeadas de uma zona vermelha. O Staphylococcus epidermidis e Bacillus subtillis produzem colônias brancas.
Aparência do meio: O meio se apresenta vermelho rosado.
Apresentação: Meio de cultura pronto para uso em placa de petri. 
Ágar MacConkey
Finalidade: Ágar MacConkey MBiolog é um meio seletivo para enterobactérias destinado à detecção, isolamento, contagem de coliformes e patógenos intestinais da água, laticínios e materiais biológicos.
Princípio de ação:Organismos que fermentam lactose, produzem pH localizado, o qual, seguido pela absorção do vermelho neutro contido no meio, confere uma coloração vermelha ou rósea à colônia, enquanto que colônias não fermentadoras de lactose permanecem incolores ou transparentes.
Amostra:Amostras biológicas, águas de esgotos e alimentos, suspeitos de conterem enterobactérias. As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas. Não é aconselhado o armazenamento da amostra. Em casos extremos, em que não se pode realizar o inóculo imediato, a amostra deve ser conservada sob refrigeração.
Procedimento:Inocular a amostra por estrias através de esgotamento da alça de platina. Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada à 35 ± 2ºC por 24 horas. Após incubação, observar as placas.
Interpretação:Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias. As bactérias fermentadoras de lactose produzem colônias vermelhas ou rosadas. Outros bastonetes Gram-negativos, como Pseudomonas sp. e Aeromonas sp. também apresentam crescimento, formando colônias cuja coloração varia de incolor até verde café. Bastonetes Gram-positivos têm seu crescimento inibido pelos sais biliares e pelo cristal violeta.
Aparência do meio: O meio se apresenta na cor rosa translúcido.
Apresentação: Meio de cultura pronto para uso em placa de petri
Ágar Chocolate Suplementado
Finalidade: Ágar Chocolate Suplementado MBiolog é um meio de cultura pronto para uso, destinado ao isolamento e cultivo de diversos microrganismos, dentre eles os fastidiosos como Neisseria spp. e Haemophilus spp., microrganismos de difícil crescimento em meios simples.
Princípio de ação: Os suplementos contidos no polienriquecimento fornecem todos os substratos necessários ao crescimento dos patógenos.
Amostra: Secreções coletadas de áreas genitais, como uretra e reto, e de outras áreas, tais como orofaringe, articulações, lesões cutâneas e líquidos corporais estéreis .
As amostras, quando não inoculadas imediatamente após a coleta, devem ser transportadas em meios como o de Amies ou Stuart. O tempo de transporte deve ser o mais breve possível, não excedendo 12 horas, à temperatura ambiente, até 30ºC. Evitar a refrigeração da amostra. As amostras devem ser colhidas, seguindo cuidados específicos, de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas.
Procedimento: Inocular a amostra por estrias, através de esgotamento da alça de platina. Obedecer aos critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada em atmosfera úmida, com 5 a 10% de CO2, a 35ºC, durante 24 a 72 horas. Após incubação, observar as placas.
Interpretação: Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias patogênicas. Havendo crescimento, realizar, a partir de colônias suspeitas, coloração de Gram e proceder a testes complementares (provas bioquímicas, provas sorológicas, etc.).
Aparência do meio: O meio se apresenta na cor marrom chocolate.
Apresentação: Meio de cultura pronto para uso em placa de petri.
Ágar Columbia CNA
Finalidade: Ágar Columbia CNAMBiolog é um meio de cultura seletivo usado pra isolamento de cocos gram-positivos como Staphylococcus spp. e Streptococcus spp.
Princípio de ação: Contém peptonas obtidas por hidrólise enzimática a partir de caseína e soja. Nesse meio desenvolvem-se uma variedade de microrganismos e os antibióticos colistina e ácido nalidíxico impedem o crescimento de bastonetes gram negativos na amostra.
Amostra: Secreções coletadas de áreas genitais e de outras áreas, tais como orofaringe, articulações e lesões cutâneas, sangue, urina e outras amostras biológicas.
As amostras de secreções, quando não inoculadas imediatamente após a coleta, devem ser transportadas em meios como o de Amies ou Stuart. As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas. Não aconselha-se o armazenamento da amostra. Em casos extremos, em que não se pode realizar o inóculo imediato, a amostra deve ser conservada sob refrigeração.
Procedimento: Inocular a amostra por estrias através de esgotamento da alça de platina. Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada à 35 ± 2°C por até 72 horas, fazendo uma leitura a cada 24h. Após incubação, observar as placas.
Interpretação: Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias. Havendo crescimento de colônias, proceder à testes complementares (provas bioquímicas, meios seletivos, provas sorológicas, etc.).
Apresentação: Meio de cultura pronto para uso em placa de Petri.
Ágar Salmonella Shigella
Finalidade:Ágar Salmonella Shigella MBiolog é um meio diferencial seletivo empregado em bacteriologia para isolar Salmonella e Shigella a partir de fezes, urina e alimentos frescos ou enlatados.
Princípio de ação: As bactérias Gram-positivas são inibidas pela presença de sais biliares, verde brilhante e citrato sódico presentes na formulação do meio. O vermelho neutro serve de indicador de pH, sendo que as colônias que fermentam a lactose produzem colônias rosa e que não fermentam, como a Shiguella spp. e Salmonella spp., formam colônias transparentes. A maioria das linhagens de Proteus spp. e Salmonella spp. produzem colônias com centro negro, pois produzem H2S que reage com citrato férrico e tiossulfato de sódio, resultado no sulfato ferroso, de cor preta.
Amostra: Fezes, urina e alimentos frescos ou enlatados, suspeitas de conterem Salmonella spp. ou Shigella spp. As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas. Não é aconselhado o armazenamento sob refrigeração da amostra, pois a recuperação de Shiguella spp. pode ser prejudicada.
Procedimento: Meio de cultura pronto para uso em placa de Petri. Inocular a amostra por estrias através de esgotamento da alça de platina. Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada à 35 ± 2ºC por 24 horas.Após incubação, observar as placas.
Interpretação:Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias. As bactérias que não fermentam lactose (supostamente patogênicas) formam colônias claras, transparentes e incolores, ao contrário dos coliformes, que são bastante inibidos e formam colônias pequenas que variam de rosa a vermelho. As bactérias formadoras de sulfetos formam colônias transparentes que apresentam um centro negro, como Proteus spp. e algumas espécies de Salmonella spp.
Aparência do meio:O meio se apresenta na cor rosa alaranjado.
Apresentação: Meio de cultura pronto para uso em placa de Petri:
Ágar Columbia CNA
Finalidade: Ágar Columbia CNA MBiolog é um meio de cultura seletivo usado pra isolamento de cocos gram-positivos como Staphylococcus spp. e Streptococcus spp.
Princípio de ação: Contém peptonas obtidas por hidrólise enzimática a partir de caseína e soja. Nesse meio desenvolvem-se uma variedade de microrganismos e os antibióticos colistina e ácido nalidíxico impedem o crescimento de bastonetes gram negativos na amostra.
Amostra: Secreções coletadas de áreas genitais e de outras áreas, tais como orofaringe, articulações e lesões cutâneas, sangue, urina e outras amostras biológicas.
As amostras de secreções, quando não inoculadas imediatamente após a coleta, devem ser transportadas em meios como o de Amies ou Stuart. As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas. Não aconselha-se o armazenamento da amostra. Em casos extremos, em que não se pode realizar o inóculo imediato, a amostra deve ser conservada sob refrigeração.
Procedimento:Inocular a amostra por estrias através de esgotamento da alça de platina. Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada à 35 ± 2°C por até 72 horas, fazendo uma leitura a cada 24h. Após incubação, observar as placas.
Interpretação: Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias. Havendo crescimento de colônias, proceder à testes complementares (provas bioquímicas, meios seletivos, provas sorológicas, etc.).
Apresentação:Meio de cultura pronto para uso em placa de Petri.
Ágar Sabouraud Dext.+Cloraf.
Finalidade:No Meio Ágar Sabouraud Dextrosado + Cloranfenicol MBiolog, caseína, carne e a glicose estabelecem as condições ideais de crescimento dos dermatófitos. O pH final do meio (ácido) e o cloranfenicol, favorece o crescimento dos fungos e dificulta o desenvolvimento de bactérias.
Amostra: Amostras biológicas e materiais diversos, suspeitos de conterem fungos. As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas. Não é aconselhado o armazenamento de amostra com microbiota mista. Raspados de pele, pêlo e unhas podem ser armazenados à temperatura ambiente.
Procedimento:Inocular a amostra. Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. O tempo de incubação e a temperatura dependerão do agente a ser pesquisado. Por exemplo, dermatófitos deverão ser incubados à temperatura ambiente por até 30 dias.
Interpretação: Não havendo crescimento de fungos, constata-se amostra isenta dos mesmos.Havendo crescimento, realizar a identificação considerando velocidade de crescimento, características morfológicas da colônia e características morfológicas microscópicas. Quando se trata de levedura podemos realizar tubo germinativo, auxanograma e/ou zimograma.
Dualmedium Cled / MacConkey
Finalidade: Ágar Cled MBiolog é um meio de cultura enriqu’ecido, destinado ao isolamento e cultivo de diversos microrganismos, recomendado para amostras de urina, fornecendo uma boa diferenciação colonial, com características diagnósticas nítidas.
Ágar MacConkey MBiolog é um meio seletivo para enterobactérias destinado à detecção, isolamento, contagem de coliformes e patógenos intestinais da água, laticínios e materiais biológicos.
Princípio de ação Ágar CledA lactose facilita a detecção de coliformes contaminantes fermentadores da mesma e que são facilmente reconhecidos pela mudança de coloração do meio (verde para o amarelo) e concomitantemente a isso, por se tratar de um meio eletrólito-deficiente, impede a formação do “véu” de Proteus spp. Ágar MacConkey Organismos que fermentam lactose, produzem pH localizado, o qual, seguido pela absorção do vermelho neutro contido no meio, confere uma coloração vermelha ou rósea à colônia, enquanto que colônias não fermentadoras de lactose permanecem incolores ou transparentes.
Amostra:Ágar Cled Urina de jato médio, colhidaseguindo criteriosa assepsia e higienização em coletor esterilizado ou recipiente adequado.Ágar MacConkey Amostras biológicas, águas de esgotos e alimentos, suspeitos de conterem enterobactérias. Não se aconselha o armazenamento da amostra. Em casos extremos, em que não se pode realizar o inóculo imediato, a amostra deve ser conservada sob refrigeração a 4ºC  por, no máximo, 24 horas.
Procedimento:Inocular a amostra por estrias através de esgotamento da alça de platina. Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada a 35 ± 2ºC por 24 horas. Após incubação, observar as placas.
Interpretação: Ágar Cled Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias.Havendo crescimento bacteriano, realizar a contagem do número de colônias e multiplicar pelo fator de diluição ou pelo volume relativo da alça. Este procedimento visa obter o número de colônias/ml. Ágar MacConkey Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias.As bactérias fermentadoras de lactose produzem colônias vermelhas ou rosadas. Outros bastonetes Gram-negativos, como Pseudomonas sp. e Aeromonas sp. também apresentam crescimento, formando colônias cuja coloração varia de incolor até verde café. Bastonetes Gram-positivos têm seu crescimento inibido pelos sais biliares e pelo cristal violeta. Em número reduzido, Enterococcus faecalis pode desenvolver-se, formando colônias puntiformes vermelhas.
Aparência do meio:Ágar Cled O meio se apresenta na cor verde.Ágar MacConkey O meio se apresenta na cor rosa translúcido.
Apresentação: Meio de cultura pronto para uso em placa de petri.
Ágar Müeller Hinton
Finalidade:Ágar Müeller Hinton MBiolog é um meio de cultura recomendado para a realização de antibiograma (teste de sensibilidade), pela técnica de difusão de discos segundo o CLSI.
Princípio de ação:Possui uma substancial fonte de proteínas e carboidratos que proporcionam o desenvolvimento e crescimento de cepas bacterianas de interesse clínico. Além disso, a baixa concentração de timina e timidina e níveis adequados de cálcio e magnésio, evitam falsos resultados de sensibilidade ou resistência.
Amostra:Por se tratar de meio de cultura adequado à realização de antibiogramas Pour Plate, recomenda-se utilizar colônias puras para inóculo. Este inóculo deve seguir à regra, as instruções de uso do produto.
Teste de sensibilidade:A metodologia proposta por Kirby-Bauer é recomendada mundialmente para a determinação da sensibilidade a antibacterianos, através da difusão em ágar; a OMS recomenda a utilização de Ágar Müeller Hinton como meio seletivo para a realização de provas de sensibilidade.
Preparo do inóculo:Em um tubo de ensaio estéril, dispensar 5 ml de caldo soja tripticaseína (TSB), e repicar, neste meio, 4 a 5 colônias puras da bactéria a ser testada. Incubar durante 2-6 horas à temperatura ideal para crescimento da bactéria (usualmente entre 35 e 37ºC). Não utilizar culturas mistas em provas de difusão, pois os resultados obtidos tendem a ser errôneos. Períodos de incubação elevados para o inóculo podem fornecer menores halos de inibição do que os usualmente obtidos. Em contrapartida, inóculos de baixa densidade bacteriana promovem halos de inibição maiores do que os normalmente verificados. Poderá também ser usada uma solução fisiológica estéril e nela introduzir colônias até que seja atingida uma turbidez de 0,5 na escala de Mc Farland.
Acerto da Turbidez: Preparar, em um tubo de ensaio igual ao utilizado na realização do inóculo, uma solução de sulfato de bário, a ser usada como referência de turbidez, da seguinte forma:0,5 ml de cloreto do bário 0,048 M + 99,5 ml de ácido sulfúrico 0,36 N ( 0,5 na escala de Mc Farland). Ajustar a turvação do meio inoculado em relação à solução de referência (pode-se utilizar solução salina fisiológica ou o próprio meio para este ajuste). Após o acerto da turvação, a concentração bacteriana no meio encontra-se entre 1 a 2 ×108 bactérias/ml.
Semeadura: A semeadura do inóculo pode ser realizada com swab ou por superposição da camada de inóculo. Embeber a extremidade do swab no inóculo aferido e então pressioná-la na parede do tubo, de forma a remover o excesso de inóculo. Delicadamente, aplicar o inóculo sobre a superfície da placa de Ágar Müeller Hinton, em várias direções, de forma a cobrir toda a placa. Aguardar 15 minutos, para total secagem do inóculo aplicado.
Aplicação dos discos: Aplicar os discos com auxílio de um dispensador ou manualmente. Quando manualmente, aplicar os discos sobre a superfície da placa inoculada utilizando uma pinça flambada e fria. Após aplicar o disco sobre a placa, fazer leve pressão sobre o mesmo, de forma a melhorar a sua aderência ao meio. Deve-se permitir que a distância entre os discos seja suficiente para se evitar a sobreposição dos halos de inibição. Incubar a placa em posição invertida, durante 16-18 horas, entre 35 e 37ºC. Quando necessária anaerobiose ou atmosfera de CO2 deve-se padronizar a incubação.
Interpretação: Os halos de inibição devem ser qualificados com o auxílio de um paquímetro ou régua milimetrada. A expressão dos tipos de halos são: sensível, intermediário e resistente. Os fabricantes de discos de sensibilidade fornecem tabelas de halos de sensibilidade específicas para os discos empregados, os quais são baseados em informações do CLSI (documento M100). Colônias diferentes da colônia da cepa testada, que crescem no interior de halos são sugestivas de impureza no inóculo empregado ou de linhagens diferentes da mesma espécie. Determinados antibacterianos promovem a formação de halos duplos, nestes casos deve-se considerar apenas o halo interno e mais claro, ignorando o halo mais externo e denso.
Apresentação: Meio de cultura pronto para uso em placa de petri.
Embalagem com 05 placas
Dualmedium Cromogênico ITU
Finalidade:O Ágar Cromogênico ITU MBiolog é um meio de cultura diferenciado, que promove a identificação presuntiva dos principais patógenos que causam a infecção do trato urinário através da detecção, por agentes cromogênicos específicos, da atividade enzimática bacteriana sobre determinados substratos.
Princípio de ação: O meio contém dois substratos cromogênicos específicos que são clivados por enzimas produzidas por Enterococcus spp., Escherichia coli e coliformes (ß-glucuronidase e ß-glucosidase). Além disso, contém fenilalanina e triptofano, que promovem a identificação através da atividade da triptofano-desaminase demonstrando a presença de Proteus spp., Morganella spp. e Providencia spp. Este meio é baseado em ágar CLED, sendo valioso meio para cultura em placa dos demais microrganismos causadores de infecções do trato urinário, também prevenindo o aparecimento do “véu” de Proteus spp.
Amostra: Urina de jato médio, colhida seguindo criteriosa assepsia e higienização em coletor esterilizado ou recipiente adequado. As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas. Não é aconselhado o armazenamento da amostra. Em casos extremos, em que não se pode realizar o inóculo imediato, a amostra deve ser conservada sob refrigeração, a 4ºC por no máximo 24 horas.
Procedimento:Inocular a amostra por estrias através de esgotamento da alça de platina.Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada à 37ºC por 24 horas. Após incubação, observar as placas.
Interpretação:Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias. Havendo crescimento bacteriano, realizar a contagem do número de colônias e multiplicar pelo fator de diluição ou pelo volume relativo da alça. Este procedimento visa obter o número de colônias/ml. Após a contagem, identificar presuntivamente o patógeno através da cor da colônia crescida.
Exemplo:
nº de colônias contadas: 25
Calibraçãoda alça= 1,0.10-³ mL
n° de colônias/ml=25×1,0.10³=25.000 colônias/mL
Microorganismo / Enzima / Cor da colônia
1- Escherichia coli (ß-glucoronidase +) = Rósea ou branca com centro rosa (BGN , Indol +)
2- Klebsiella spp., Enterobacter spp. e Serratia spp. (ß- glicosidase +) = Azul-esverdeado (colônia grande, BGN)
3- Enterococcus spp. (ß- glicosidase +) = Verde azulado (colônia pequena, coco Gram +
4- Proteus spp., Morganella spp. ou Providencia spp. (triptofano desaminase) = Marrom ou bege
5- Staphylococcus saprophyticus = Rosa, colônia pequena (coco gram+)
6- Leveduras , S.aureus e P.aeruginosa = Pigmentação natural
Apresentação: Meio de cultura pronto para uso em placa de Petri.
Pessoa & Silva – Rugai Mod.
Finalidade: Rugai e Araújo Modificado por Pessoa e Silva MBiolog é um meio utilizado para identificação presuntiva de enterobactérias, Víbrios e Aeromonas. Este meio permite a leitura, num só tubo, das seguintes reações: motilidade, lisina descarboxilase, fermentação de glicose e sacarose, produção de gás-glicose, ácido sulfídrico, indol, urease e L-triptofano desaminase.
Princípio de ação:Rugai e Araújo modificado por Pessoa e Silva MBiolog possui triptona, extrato de carne e levedura, os quais são utilizados como fonte de carbono e nitrogênio. O L-triptofano atua como substrato para produção de indol, indicado pelo p-dimetilaminobenzaldeído contido no tampão de algodão, e ácido indol pirúvico, revelado pelo citrato férrico amoniacal juntamente com o gás sulfídrico que é produzido a partir do Tiossulfato de sódio. A glicose e sacarose funcionam como fonte de carbono para produção de energia e permitem o teste de fermentação. A L-lisina é um substrato para produção de cadaverina, através da L-lisina descarboxilase. O nitrato de potássio impede a formação de gás na parte inferior do tubo e a uréia permite a detecção da enzima urease. O azul de bromotimol e púrpura de bromocresol são indicadores de pH.
Amostra:Por se tratar de meio de cultura adequado à identificação, recomenda-se utilizar colônias puras para inóculo. Este inóculo deve seguir à regra, as instruções de uso do produto.
Procedimento:Semear partindo de uma colônia isolada e pura. Deve ser feita por picadas de tal maneira que após atravessar para a lisina toque suavemente o fundo do tubo; retirar a alça com cuidado e fazer estrias na parte inclinada do meio. Tampar o tubo com seu próprio tampão de algodão incubar de 35 a 37ºC por 18 – 24 horas. Após a incubação, proceder à identificação comparando o tubo com a tabela de interpretação das reações. Para determinadas espécies, é necessária a confirmação da identificação através de outros testes bioquímicos, tais como: Ornitina, Citrato, Malonato, Oxidação/Fermentação, DNAse, etc.
Apresentação:Embalagem com 25 tubos.
Ágar Cled
Finalidade:Ágar Cled MBiolog é um meio de cultura enriquecido, destinado ao isolamento e cultivo de diversos microrganismos, recomendado para amostras de urina, fornecendo uma boa diferenciação colonial, com características diagnósticas nítidas. Permite, portanto, a cultura e contagem de bactérias Gram-positivas ou Gram-negativas, impedindo a formação do “véu” de Proteus spp.
Princípio de ação:A lactose facilita a detecção de coliformes contaminantes fermentadores da mesma e que são facilmente reconhecidos pela mudança de coloração do meio (verde para o amarelo) e concomitantemente a isso, por se tratar de um meio eletrólito-deficiente, impede a formação do “véu” de Proteus spp.
Amostra: Urina de jato médio, colhida seguindo critérios de assepsia e higienização em coletor esterilizado ou recipiente adequado. As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas. Não aconselha-se o armazenamento da amostra. Em casos extremos, em que não se pode realizar o inóculo imediato, a amostra deve ser conservada sob refrigeração a 4ºC por no máximo 24h.
Procedimento: Inocular a amostra por estrias através de esgotamento da alça de platina. Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada a 35 ± 2ºC por 24 horas. Após incubação, observar as placas.
Interpretação: Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias. Havendo crescimento bacteriano, realizar a contagem do número de colônias e multiplicar pelo fator de diluição ou pelo volume relativo da alça. Este procedimento visa obter o número de colônias/ml.
Exemplo:nº de colônias contadas: 25
Calibração da alça= 1,0×10-³ ml
nº de colônias/ml=25×10³=25.000 colônias/ml
Aparência do meio:O meio se apresenta na cor verde.
Apresentação:Meio de cultura pronto para uso em placa de Petri.
Ágar Mycosel
Finalidade: Ágar Mycosel MBiolog é um meio de cultura destinado ao isolamento e conservação de fungos patogênicos, principalmente dermatófitos .
Princípio: A peptona e a glicose estabelecem as condições ideais de crescimento dos dermatófitos. O pH final do meio, a presença de cloranfenicol e cicloheximida favorece o crescimento dos dermatófitos e dificulta o desenvolvimento de bactérias e fungos saprófitas.
Amostra: Amostras biológicas e materiais diversos, suspeitos de conterem fungos.As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas.Não é aconselhado o armazenamento de amostra com microbiota mista. Raspados de pele, pêlo e unhas podem ser armazenados à temperatura ambiente.
Procedimento: Inocular a amostra. Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. O tempo de incubação e a temperatura dependerão do agente a ser pesquisado. Por exemplo, dermatófitos deverão ser incubados à temperatura ambiente por até 30 dias.
Interpretação: Não havendo crescimento de fungos, constata-se amostra isenta dos mesmos.
Havendo crescimento, realizar a identificação considerando velocidade de crescimento, características morfológicas da colônia e características morfológicas microscópicas.
Quando se trata de levedura podemos realizar tubo germinativo, auxanograma e/ou zimograma.
Apresentação: Embalagem com 10 tubos.
Ágar Sangue
Finalidade: Ágar Sangue MBiolog é um meio de cultura de base rica. Utiliza-se ágar columbia como base deste meio, sem glicose, pois esta poderia atrapalhar a visualização da hemólise. Acrescido de 5% de sangue de carneiro desfibrinado. Excelente meio para o isolamento estreptococos beta-hemolíticos.
Princípio de ação: O meio de Ágar sangue, usando uma base rica, fornece condições de crescimento para a maioria dos microrganismos. A conservação dos eritrócitos íntegros favorece a percepção da hemólise, úteis para a diferenciação de bactérias como os Streptococcus spp.
Amostra: As amostras analisadas são espécimes suspeitos de conterem patógenos que requeiram confirmação adicional, especificação e classificação de importância em saúde pública (sangue, urina, secreções, exsudatos e transudatos, amostras histológicas, etc.). Para amostras de urina, lavado bronco-alveolar, ou qualquer outro material que necessite quantificação, o inóculo deve ser realizado com o uso de alça calibrada, de forma a se determinar o número de unidades formadoras de colônia/mL. As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas. Não é aconselhado o armazenamento da amostra. Em casos extremos, em que não se pode realizar o inóculo imediato, a amostra deve ser conservada sob refrigeração .
Procedimento: Inocular a amostra por estrias através de esgotamento da alça de platina Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada à 35 ± 2ºC por até 72 horas.Enquanto incubadas, observar as placas de 24h em 24h.
Interpretação:Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias. Havendo crescimento de colônias, proceder testes complementares (provas bioquímicas, meios seletivos, provas sorológicas, etc.).
Apresentação:Meio de cultura pronto para uso em placa de Petri. 
Dualmedium Cromogênico Candida
Finalidade: O Ágar Cromogênico Candida MBiolog é um meio de cultura destinado ao isolamento seletivo e diferencial de espécies de Candida de importância clínica.
Princípio de ação: Ocorre a hidrólise específica dos substratos cromogênicos incluídos no meio pelas diferentes espécies de Candida. A inibição da flora bacteriana se obtém mediante à ação de uma mistura antibiótica contida no meio.
Amostra: As amostras podem ser de qualquer natureza e são inoculadas diretamente sobre o meio sólido. As amostras devem ser colhidas seguindo cuidados específicos de forma a se obter representatividade do processo infeccioso, assepsia na coleta da amostra e sem interações medicamentosas.
Procedimento: Proceder de maneira habitual como em qualquer outro meio de cultura para o qual convém respeitar as boas práticas de laboratório refente ao transporte e tomada de amostras correspondentes a cada tipo de amostra.
Incubar a placa inoculada à faixa de 30 e 37ºC.
Vistoriar as referidas placas diariamente durante as 24, 48 e 72 horas posteriores a inoculação.
Interpretação:Crescimentos obtidos depois de 24/72 horas de incubação a 30 – 37ºC.
Microrganismos x Crescimento x Cor da colônia
Candida albicans – Bom – Verde a verde azulado*
Candida Tropicalis – Bom – Azul escuro/Azul metalizado
Candida Krusei – Bom – Colônias irregulares de cor rosa a rosa pálido
Candida Glabrata, Candida Parapsilosis e outras espécies de Candida – Bom – Cor variável**
*A cor verde desenvolvida por C. Albicans e a cor azul escuro ou azul metálico de C. Tropicalis se desenvolve pela mesma ação enzimática obre o mesmo substrato cromogênico.
**Estas espécies de Candida aparecem de forma muita variável devido à combinação da capacidade pigmentar de algumas delas, assim como certa atividade enzimática sobre os substratos cromogênicos incluídos no meio. A experiência profissional permitirá a diferenciação fundamentalmente em base à morfologia das referidas colônias. Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de microrganismos.
Aparência do meio:O meio se apresenta na cor âmbar claro.
Apresentação:Meio de cultura pronto para uso em placa de Petri.
Dualmedium Sangue / MacConkey
Finalidade:Ágar Sangue MBiolog é um meio de cultura de base rica. Utiliza-se ágar columbia como base deste meio, sem glicose, pois esta poderia atrapalhar a visualização da hemólise. Acrescido de 5% de sangue de carneiro desfibrinado. Excelente meio para o isolamento estreptococos beta-hemolíticos.Ágar MacConkey MBiolog é um meio seletivo para enterobactérias destinado à detecção, isolamento, contagem de coliformes e patógenos intestinais da água, laticínios e materiais biológicos.
Princípio de ação:Ágar Sangue O meio de Ágar sangue, usando uma base rica, fornece condições de crescimento para a maioria dos microrganismos. A conservação dos eritrócitos íntegros favorece a percepção da hemólise, úteis para a diferenciação de bactérias como os Streptococcus spp Ágar MacConkey Organismos que fermentam lactose, produzem pH localizado, o qual, seguido pela absorção do vermelho neutro contido no meio, confere uma coloração vermelha ou rósea à colônia, enquanto que colônias não fermentadoras de lactose permanecem incolores ou transparentes.
Amostra:Ágar Sangue As amostras analisadas são espécimes suspeitos de conterem patógenos que requeiram confirmação adicional, especificação e classificação de importância em saúde pública. (Sangue, urina, secreções, exsudatos e transudatos, amostras histológicas, etc.). Para amostras de urina, lavado bronco-alveolar, ou qualquer outro material que necessite quantificação, o inóculo deve ser realizado com o uso de alça calibrada, de forma a se determinar o número de unidades formadoras de colônia/mL. Ágar Macconkey Amostras biológicas, águas de esgotos e alimentos, suspeitos de conterem enterobactérias. Não é aconselhado o armazenamento da amostra. Em casos extremos, em que não se pode realizar o inóculo imediato, a amostra deve ser conservada sob refrigeração.
Procedimento:Inocular a amostra por estrias através de esgotamento da alça de platina. Obedecer os critérios internos do laboratório acerca das condições de assepsia e esterilidade do local de trabalho. Incubar a placa inoculada à 35 ± 2ºC por até 72 horas. Enquanto incubadas, observar as placas de 24h em 24h.
Interpretação: Ágar Sangue Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias.Havendo crescimento de colônias, proceder testes complementares (provas bioquímicas, meios seletivos, provas sorológicas, etc.).
Ágar MacConkey Não havendo crescimento bacteriano,constata-se amostra isenta de bactérias. As bactérias fermentadoras de lactose produzem colônias vermelhas ou rosadas. Outros bastonetes Gram-negativos, como Pseudomonas sp. E Aeromonas sp. também apresentam crescimento, formando colônias cuja coloração varia de incolor até verde café. Bastonetes Gram-positivos têm seu crescimento inibido pelos sais biliares e pelo cristal violeta. Em número reduzido, Enterococcus faecalis pode desenvolver-se, formando colônias puntiformes vermelhas.
Apresentação:Meio de cultura pronto para uso em placa de petri.