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Aula 04: Ácidos Nucléicos: classificação, estrutura, função e importância Leonardo A. Z. Rodrigues (gqi132ufla@gmail.com) UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS DEPARTAMENTO DE QUÍMICA Disciplina: Bioquímica SEMESTRE: 2014/2 I. Cronograma e Conteúdo Programático AULA DATA ASSUNTO 1ª 2ª 3ª 4ª 5ª 6ª 7ª 8ª 9ª 10ª 11ª 12ª 13ª 14ª 15ª 16ª 17ª 18ª 19ª 18/08 25/08 01/09 08/09 15/09 22/09 29/09 06/10 13/10 20/10 27/10 03/11 10/11 17/11 24/11 01/12 08/12 11/12 15/12 Apresentação da disciplina, Introdução à Bioquímica, Célula e água Carboidratos: classificação, estrutura, função e importância biológica Lipídios e ácidos Graxos: classificação, estrutura, função e importância biológica Ácidos Nucléicos: classificação, estrutura, função e importância biológica Aminoácidos: Estruturas, classificação, função e importância biológica Proteínas: níveis estruturais, classificação, função e importância biológica 1ª Prova (20%): sala de aula as 8 horas Enzimas: Atividade e cinética, especificidade e classificação Recesso Bioenergética: Leis da termodinâmica, Energia livre de Gibbs e Reações biológicas Catabolismo de Carboidratos: glicólise, fermentações, regulações e Pentose Fosfato Ciclo de Krebs e ciclo do glioxilato: respiração celular, acetato e reações das vias 2ª Prova (20%): sala de aula as 8 horas Cadeia de transporte de elétrons e Fosforilação Oxidativa Metabolismo de lipídeos (catabolismo e biossíntese) Metabolismo de compostos nitrogenados (catabolismo e biossíntese) 3ª Prova (20%): sala de aula as 8 horas Segunda chamada geral (sala 3 do pavilhão 6 as 12:15 h) matéria da prova que perdeu Prova Substitutiva (matéria toda): sala de aula as 8 horas A Célula CONSTITUIÇÃO QUÍMICA DAS CÉLULAS Inorgânicos Orgânicos Água e Sais Minerais Carboidratos Lipídios Ácidos Nucléicos Aminoácidos Proteínas O que é um Ácido Nucléico? Qual a sua importância? E sua função? Trangênicos, Células Tronco, Terapia Gênica, Clonagem Humana, Aborto Terapêutico e muitos outros… OLHANDO MAIS DE PERTO Por trás da diversidade anatômica existe uma incrível similaridade em nível celular e químico A LÓGICA MOLECULAR DA VIDA Poucas generalizações podem ser feitas para todos os organismos ORGANISMO Proteínas Polissacarídeos Acidos Nucléicos Sistemas Órgãos Tecidos Células Organelas Moléculas Aminoácidos Açúcares A, T, C e G ALFABETO QUÍMICO Todos os organismos vivos são constituídos a partir das mesmas unidades monoméricas A estrutura das macromoléculas é o que determina a sua função biológica Cada espécie apresenta um conjunto distinto de macromoléculas Fluxo da informação gênica HISTÓRICO DA BIOLOGIA MOLECULAR 1866: Gregor Mendel HISTÓRICO DA BIOLOGIA MOLECULAR 1869 → Johann Friedrich Miescher # Buscava determinar os componentes químicos do núcleo celular. # Usava os glóbulos brancos contidos no pus para suas pesquisas (células que apresentam núcleos grandes e fáceis de serem isolados do citoplasma). # Descobriu a presença de um composto de natureza ácida desconhecido até o momento (rico em fósforo e em nitrogênio, desprovido de enxofre e resistente à ação da pepsina - enzima proteolítica)) → nucleína HISTÓRICO DA BIOLOGIA MOLECULAR 1880 → Albrecht Kossel # Demonstrou que a nucleína continha bases nitrogenadas em sua estrutura. 1889 → Richard Altmann # Obteve nucleína com alto grau de pureza, comprovando sua natureza ácida e dando- lhe o nome de ácido nucléico. HISTÓRICO DA BIOLOGIA MOLECULAR 1900: Hugo de Vries, Erich von Tschermak e Carl Correns Redescoberta de Mendel Leis da Hereditariedade Leis de Mendel HISTÓRICO DA BIOLOGIA MOLECULAR 1928: Frederick Griffith: Transformação HISTÓRICO DA BIOLOGIA MOLECULAR O rato produz anticorpos que destroem as bactérias não capsuladas Os anticorpos não destroem a cápsula. A bactéria sobrevive. O rato morre. As bactérias patogênicas são mortas pelo calor. Alguma substância proveniente das bactérias S (mortas) integrou-se nas R, tornando-as capazes de produzir cápsulas transformando-as em bact S. HISTÓRICO DA BIOLOGIA MOLECULAR 1944: Avery, MacLeod e MacCarty: Princípio transformante HISTÓRICO DA BIOLOGIA MOLECULAR 1953: Alfred Hershey e Martha Chase DNA 32P Proteína 35S As proteínas da cápsula do vírus tem enxofre (S) e não tem fósforo (P). O DNA tem fósforo (P) e não tem enxofre (S). As proteínas das cápsulas dos vírus não penetram nas bactérias O DNA viral entra nas bactérias e origina novos vírus HISTÓRICO DA BIOLOGIA MOLECULAR 1953: James Watson e Francis Crick ESTRUTURA MOLECULAR DO DNA • Prêmio Nobel de Fisiologia e Medicina em 1962 •Modelo da dupla hélice (cadeias de nucleotídeos enrolados formando uma escada espiral) • Ligados por Pontes de Hidrogênio DNA – DesoxirriboNucleic Acid (do inglês) DNA – ácido desoxirribonucléico ESTRUTURA MOLECULAR DO DNA DNA → INTRODUÇÃO PONTES DE HIDROGÊNIO • ADENINA (A) liga-se com TIMINA (T) por meio de 2 pontes de H; • GUANINA (G) liga-se com CITOSINA (C) por meio de 3 pontes de H; DNA → INTRODUÇÃO • Entre todas as propriedades dos organismos vivos, a capacidade de auto-replicação é fundamental. • Conter a informação genética significa armazená-la, transmiti-la ao longo das gerações e expressá-la na forma de proteínas. • Avanços significativos tem sido alcançados na área da Biologia Molecular a partir do isolamento, análise e síntese de sequências de DNA. • Sequenciamento do genoma e Biologia molecular → estudos de função e dos mecanismos que controlam a expressão gênica DNA → INTRODUÇÃO Autossomos x Sexuais 99% 1% GENOMA HUMANO O número total de genes varia de 30 mil a 40 mil. Independente da quantidade de genes, todos eles, são agrupados em cromossomos. Todos os seres humanos têm 46 cromossomos, dos quais 23 vieram da mãe e 23 do pai. Nucleotídeo DNA Cromossomo Genoma GENOMA HUMANO Curiosidades... •Espécie •Número de Cromossomos •Humana 46 •Milho 20 •Ervilha 14 •Drosophila 8 •Dália 64 •Tatu 64 •Cavalo 64 - O material genético humano tem entre 2,8 milhões e 3,5 milhões de pares de base. - 3% do genoma humano é formado por genes. - O corpo é formado por cerca de 100 trilhões de células. ESTRUTURA PRIMÁRIA DO DNA PURINAS (Bicíclicas) PIRIMIDINAS (Monocíclicas) Adenina = Timina Guanina Citosina Uracila Purina Adenina Guanina Pirimidina Citosina Uracil Timina Bases Nitrogenadas = Anéis Aromáticos Heterocíclicos ESTRUTURA PRIMÁRIA DO DNA Pentose (Açúcar) Ribose -D-Ribofuranose OH - R 2’-Desoxirribose -D-2-desoxirribofuranose H ESTRUTURA PRIMÁRIA DO DNA Grupamento Fosfato = Ésteres de Fosfato - Monofosfato - Difosfato - Trifosfato 5’-Difosfato de Adenosina - ADP 5’-Difosfato de Desoxiadenosina - dADP 5’-Trifosfato de Adenosina - ATP 5’-Trifosfato de Desoxiadenosina - dATP 5’-Monofosfato de Adenosina -AMP 5’-Monofosfato de Desoxiadenosina - dAMP ESTRUTURA PRIMÁRIA DO DNA Posições dos Átomos Grupamento Fosfato Bases Nitrogenadas Pentose ESTRUTURA PRIMÁRIA DO DNA ESTRUTURA PRIMÁRIA DO DNA Nucleosídeo Nucleosídeo (2’-) Desoxirribonucleotídeo Ribonucleotídeo Nucleotídeo x Nucleosídeo Formação de um polinucleotídeo ESTRUTURA PRIMÁRIA DO DNA A Hidroxila do carbono-3 da pentose do primeiro nucleotídeo se liga ao grupo fosfato ligado à hidroxila do carbono-5 da pentose do segundo nucleotídeo através de uma ligação fosfodiéster (ligação covalente) Sentido da Fita de DNA ESTRUTURA PRIMÁRIA DO DNA Os Ácidos Nucléicos são cadeias de Nucleotídeos ligados por Pontes de Grupo Fosfato (Ligação Fosfodiéster) na direção 5’ para 3’ de unidades de Pentose vizinhas 5’ AACGTTGCTATCGT 3’ 5’ 3’ Ligações Fosfodiéster Ligação Glicosídica Ligações Importantes ESTRUTURA PRIMÁRIA DO DNA Ligações covalentes – unem os átomos; Forças hidrofóbicas – forçam as bases a se esconderem dentro da dupla hélice; Forças de Van der Walls – entre os anéis aromáticos de bases adjacentes (ao lado); Pontes de hidrogênio – entre as bases adjacentes. Ligações Covalentes Sítios Hidrofóbicos Sítios Hidrofílicos Forças de Van der Walls Pontes de Hidrogênio Interações Iônicas (Mg+2) Estabilidade do DNA: Integridade e Flexibilidade DUPLA-HÉLICE DO DNA Características da dupla hélice do DNA Fitas complementares, anti-paralelas e enrolam-se helicoidalmente em volta do mesmo eixo Características da dupla hélice do DNA Cavidades Maior e Menor Características da dupla hélice do DNA Efeito Hipercrômico A desnaturação do DNA pode ser acompanhada pela medida em espectrofotômetro de absorbância de luz ultravioleta (UV). Características da dupla hélice do DNA Desnaturação e Renaturação TIPOS DE DNA O DNA pode assumir diferentes conformações, dependendo da sua composição de bases e do meio em que se encontra → DNA A → DNA B → DNA Z Tipo A → Ocorre quando há pouca água disponível para interagir com a dupla hélice. Esta presente em regiões híbridas de DNA:RNA e RNA ds Tipo B → Forma clássica e mais abundante descrita por Watson & Crick. Em solução o DNA geralmente assume esta conformação. Tipo Z → Ocorre quando o açúcar e a base nitrogenada ficam do mesmo lado da ligação glicosídica. Em eucariotos o DNA tende a assumir esta conformação devido à metilação de DNA. DNA B DNA A DNA Z TIPOS DE DNA TIPOS DE DNA # Fatores que estabilizam sua formação: → metilação ou bromação de bases → estresse torcional → ligação de proteínas específicas ao DNA • Alterações nas conformações podem facilitar ou dificultar a interação do DNA com proteínas. Conformação anti e syn C2’-endo C3’-endo DNA B DNA A DNA Z Etanol 75% [Sal] Dupla RNA Metilação ou Bromação Umidade Relativa (92%) TIPOS DE DNA Principais características dos DNAs A, B e Z CARACTERÍSTICAS FORMA A FORMA B FORMA Z Sentido helicoidal (Giro) Direita Direita Esquerda Diâmetro (nm) ~2,6 ~2,0 ~1,8 Pb por giro (n) 11 10 12 Espaço entre as bases (nm) 0,26 0,34 0,37 Inclinação da base 20o 6o 7o Sulco maior Estreito/Profundo Largo/Profundo Achatado Sulco menor Largo/Raso Estreito/Profundo Estreito/Profundo Ligação glicosídica anti anti anti(pir) sin(pur) TIPOS DE DNA RNA RNA – RiboNucleic Acid (do inglês) ESTRUTURA MOLECULAR DO RNA • Formado por vários nucleotídeos (moléculas grandes) • Precisa do DNA para ser formado • O açúcar do RNA é uma pentose (RIBOSE) • URACILA no lugar de TIMINA • NÃO POSSUI DUPLA HÉLICE (única camada) RNA mensageiro (mRNA) Fim da mensagem Sinal de ligação ao Ribossomo Códon de Iniciação (Start Códon) Início da Transcrição Hairpin AAAAA CAU AGGAGGU AUG transfere a informação do DNA (núcleo) ao ribossomo (citoplasma) sob a forma de aminoácidos para a síntese de proteínas; RNA transportador (tRNA) Decifra o código dos aminoácidos contidos no mRNA para a síntese de proteínas. RNA ribossomal (rRNA) Associa-se com uma série de proteínas para formar o Ribossomo. Representa 75% do RNA total da célula; Tipos de RNA OUTROS RNAs hnRNA snRNA snoRNA Ribozimas: pequenos RNAs presentes no núcleo e citoplasma com funções estruturais e catalíticas. (heterogêneos nucleares): precursores de mRNA; (pequenos nucleares): formação das ribonucleoproteínas (snRNP) que tem função de produzir mRNA funcionais; RNA DE INTERFERÊNCIA (RNAi) Andrew Fire e Craig Mello Premio Nobel de Medicina 2006 RNA x DNA H H H H RNA x DNA RNA x DNA PRINCIPAIS DIFERENÇAS ENTRE DNA E RNA DNA RNA BASES PÚRICAS ADENINA(A) GUANINA (G) ADENINA(A) GUANINA (G) BASES PIRIMÍDICAS CITOSINA (C) TIMINA (T) CITOSINA (C) URACILA (U) PENTOSES DESOXIRRIBOSE RIBOSE Processos 1. Replicação 2. Transcrição 3. Tradução 1. AUTO DUPLICAÇÃO ou REPLICAÇÃO – Capacidade do DNA de originar cópias exatas de si mesmo IMPORTÂNCIA: Permite que após a divisão celular, as células filhas recebam a mesma quantidade de moléculas de DNA da célula-mãe O processo requer a ação de um conjunto de enzimas e é dividido em: Processos DNA Girase / DNA Helicase DNA Primase / DNA Polimer. 3 (pr. contínuo e descontínuo) DNA Polim. 1 / DNA Ligase Replicação do DNA Processos DNA Girase / DNA Helicase DNA Primase / DNA Polimer. 3 DNA Polim. 1 / DNA Ligase DNA Transferase • Replicação do DNA Processos Processos A replicação é semiconservativa... Etapas: - A molécula de DNA abre-se por ação da enzima RNA POLIMERASE - Em seguida começa o pareamento de novos nucleotídeos - Depois de pareado, o RNA pronto irá soltar-se e vai para o citoplasma - A molécula de DNA se recompõe e volta ao normal Processos 2. TRANSCRIÇÃO – envolve apenas uma região específica do DNA conhecida como gene. Essa região é utilizada como molde para sintetizar uma fita de RNA. IMPORTÂNCIA: Permite que a informação contida no DNA seja transferida a moléculas de RNA para sua posterior expressão. O processo requer a ação de uma única enzima (RNA Polimerase) que exerce todas as funções necessárias para a transcrição de um gene a partir de uma das fitas do DNA. Processos • A transcrição de um segmento se inicia quando a RNA polimerase reconhece e liga-se a seqüências específicas de nucleotídios em uma região especial, no início do gene, denominada promotor • A partir daí a RNA polimerase move-se ao longo do molde, sintetizando RNA, até alcançar uma outra seqüência específica que sinaliza o término da transcrição Processos 3. TRADUÇÃO – é a transferência da informação contida em nucleotídeos para aminoácidos e consequentemente para proteínas IMPORTÂNCIA: é o resultado da informação genica na forma de expressão T G C A G C T C C G G A C T C C A T . . . RNA Polimerase promotor Transcrição A C G U C G A G G C C U G A G G U A . . . DNA mRNA Tradução His Ribossomo A C G códonProcessos 3. TRADUÇÃO T G C A G C T C C G G A C T C C A T . . . RNA Polimerase promotor Transcrição A C G U C G A G G C C U G A G G U A . . . DNA mRNA Tradução Ribossomo His Leu Gli Ser Ser Cis Processos 3. TRADUÇÃO Proteína U C A G U Phe Phe Leu Leu Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Parada Parada Cys Cys Parada Trp U C A G C Leu Leu Leu Leu Pro Pro Pro Pro His His Gln Gln Arg Arg Arg Arg U C A G A Ile Ile Ile Met Thr Thr Thr Thr Asn Asn Lys Lys Ser Ser Arg Arg U C A G G Val Val Val Val Ala Ala Ala Ala Asp Asp Glu Glu Gly Gly Gly Gly U C A G 1 a b a se n o c ó d o n 2a base no códon 3 a b a se n o có d o n Processos 3. TRADUÇÃO Código Genético mapeamento dos códons nos aminoácidos 64 códons 20 aminoácidos 3 códons de parada aminoácidos mapeados por mais de um códon Degeneração do código genético Processos 3. TRADUÇÃO Visto que o código genético tem redundância, é possível que diferentes seqüências nucleotídicas codifiquem a mesma seqüência de aminoácidos Essas diferenças limitam-se a uma ou, quando muito, a duas posições da trinca de uma dado códon Leu Pro Arg Lis Ile UUA CCU AUU AAA CGG CUG CCG AUA AAG CGA Processos 3. TRADUÇÃO Processos 3. Etapas da tradução Processos 3. Etapas da tradução Processos 3. Etapas da tradução Enzimática Transporte Estrutural Hormonal Imunológica Motora Reserva alimentar CONSIDERAÇÕES FINAIS Ácidos Nucléicos maiores representantes do genótipo (DNA) Proteínas maiores representantes do fenótipo DNA Envolvido com todo metabolismo do organismo Molécula da Hereditariedade: Seqüências de bases nitrogenadas Informações DNA Moléculas principais RNA Moléculas intermediárias Proteína Resultado final da informação Responda: a) Que tipo de ácido nucleico é este? Justifique. b) Que tipo de açúcar está presente neste trecho de molécula?
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